套式PCR检测骨髓移植人巨细胞病毒感染的研究

骨髓移植受体由于免疫抑制或免疫缺陷诱发人巨细胞病毒感染常常造成移植失败。应用套式ＰＣＲ对骨髓移植３３例受体和９８例供体检测发现，受体人巨细胞病毒的感染率（７５．８％，２５／３３）明显高于普通正常人（５７％，５６／９８），移植后４０天可达９３．９％（３１／３３），呈感染上升趋势。结果提示有必要在ＢＭＴ时对供受体进行人巨细胞病毒感染检测，便于ＢＭＴ术前选择和术后治疗，以提高移植的成功率。     

禽多杀性巴氏杆菌（5：A）荚膜保护性抗原提纯及单克隆抗体细胞系的建立

用机械物理方法与Sephadex G-200分子筛层析、DEAE-cellulose离子交换层析相结合，将多杀性巴氏杆菌(5：A)荚膜抗原粗提物(CE)分为P1、P2两种成份，并经免疫保护性试验证明：荚膜中含有保护性蛋白成份P1，P1分子量为129．1kD，且至少含分子量分别为46．7kD、42．6kD和39．8kD的3种蛋白亚基。     

人IL-2抗独特型单克隆抗体

本文报道吸附纯化兔抗人重组IL-2抗体(Id)的抗独特型单克隆抗体(抗-IdMcAb)6A12。McAb与Id结合可以抑制Id对IL—2的中和作用,表明其结合位点可能与Id上IL—2中和位点相同或邻近。6A12协同IL—2对PHA活化人T细胞的增殖作用,纯化的6A12 IgG也可与纯化的重组IL-2受体可溶性P~(55)亚单以结合;对IL-2依赖的鼠T细胞系(C TLL),纯化的6A 12IgG有抑制IL-2爱性作用,而当IL-2过量时可使抑制作用逆转。结果表明:6A12不可能是IL-2受体结合位点精确的“内都影像”,但它至少可与高亲和力IL-2受体复合物中配体结合位点P~(55)亚单位结合。特定配体的抗-Id抗体与配体的生理受体相互作用已有系统描述,对人重组白细胞干扰素A(rIFN-αA )抗体的抗-Id McAb研究已知:McAb 3B1似乎完全可以作为干扰素内部影像或Jerne称作的“补位诱导抗体(Ab2β)”。T淋巴细胞表面具有对IL-2亲和力高低不同的膜受体,IL-2与之结合调节T细胞生长。最近有关受体结构研究也表明。高亲和力IL-2受体复合物至少由2种多肽链构成,α链(Tac抗原或P~(55))及β链(70～75kD糖蛋白或P70),二者分别以低等(P~(55))和中等亲和力独立与IL-2结合。本文报道研制了人IL-2抗-Id MeAb 6A12,并对其生物学活性进行了研究。     

抗HBsAg单克隆抗体杂交瘤的建立与临床应用

目的 制备分泌抗HBsAg单克隆抗体杂交瘤细胞株,为建立快速诊断HBsAg的方法奠定了基础。方法 通过细胞融合建立了能稳定分泌抗HBsAg单抗的杂交瘤细胞株,利用ELISA测定单抗的特异性,并用此单抗对临床标本进行初步检测。结果 细胞株分泌的单抗可与HBsAg特异性结合,与乙肝病毒E抗原和核心抗原无交叉反应,经免疫扩散试验分析为IgG1型,将此单抗用辣根过氧化物标记后可与HBsAg阳性的病人血清反应。结论 筛选出了一株适合临床应用的单抗杂交瘤细胞株。     

8－氮鸟嘌呤诱变3D_5杂交瘤细胞的初步研究

小鼠杂交瘤３Ｄ５为一株分泌抗人红细胞非凝集性单克隆抗体的杂交瘤细胞株，用８－氮鸟嘌呤（８－ＡＧ）诱变处理可以使之成为具有模拟骨髓瘤性质的次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶缺失的杂交瘤细胞系，并且保留杂交瘤细胞系分泌抗体的能力，在利用自身血细胞凝集试验对各种病原体的快速诊断中应用广泛。实验表明，用不同剂量的８－ＡＧ进行诱变，在不同剂量水平上３Ｄ５杂交瘤细胞主要呈现细胞生长抑制、部分细胞衰老死亡、存活细胞分裂生长成为多细胞克隆及细胞适应８－ＡＧ诱变后恢复正常生长能力等一系列的变化过程。利用间接免疫荧光方法检测３Ｄ５分泌抗体结果表明，诱变后３Ｄ５杂交瘤细胞株仍然保持有分泌抗人红细胞非凝集性单克隆抗体的能力，此细胞系的建立不仅为研制自身血细胞凝集试验的双功能抗体奠定了基础，同时也具有一定理论意义     

STD淋球菌与人巨细胞病毒感染的调查分析

应用细菌培养与ＰＣＲ方法检测淋球菌，应用ＰＣＲ方法与套式ＰＣＲ方法检测人巨细胞病毒，在１００例ＳＴＤ患者中年龄、性别对淋球菌与人巨细胞病毒感染或二者混合感染无明显关系，凡与ＳＴＤ患者频繁性接触都存在着感染的可能。临床资料分析表明，ＳＴＤ患者男性多于女性，男性主要集中于２０～４０岁，女性集中于２０～３０岁之间，工人患者最多，确定了ＳＴＤ患者重点监控对象，为ＳＴＤ的防治提供了依据。实验表明，ＰＣＲ检测病原体感染更加敏感、快速、准确，有较高的实用价值     

淋球菌PCR基因诊断试剂盒的研制及初步应用

淋球菌ＰＣＲ基因诊断方法特异，敏感，与泌尿生殖道的其它污染菌不产生非特异扩增反应，在淋球菌３．８ｆｇ提取ＤＮＡ可得到明显扩增带。用自制ＰＣＲ诊断试剂盒进行临床检测与菌株鉴定，其标本处理方法简便易行，检出率与培养法符合率高，且整个检测可在３￣４ｈ内完成，适于医院临床应用。     

用PCR及Southern杂交方法对HBsAg阴性献血员HBV感染的检测

用ＰＣＲ与Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交（ＳＢＨ）方法对７８例ＨＢｓＡｇ阴性献血员进行ＨＢＶ感染检测，结果２份标本经ＰＣＲ后直接在２５４ｎｍ紫外灯下观察就可见到特异扩增带，另有１２份标本经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ转膜杂交后可观察到特异扩增带，总阳性率较原来ＨＢｓＡｇ检测提高１７．９％，说明ＰＣＲ－ＳＢＨ可以区分ＨＢｓＡｇ阴性但仍然存在ＨＢＶ潜伏感染的献血员，使用ＰＣＲ－ＳＢＨ方法检测的ＨＢＶ可以提高输血的安全性。     

抗乙肝表面抗原单链抗体的基因克隆与序列分析

目的：为乙型肝炎病毒基因工程双特性抗体的研制奠定基础。方法：提取抗乙型肝炎病毒杂交瘤细胞总RNA,利用鼠源性抗体可变区通用引物,经逆转录PCR扩增轻链可变芡和重链可变区,用连接肽（Gly4Ser)3连接轻、重链可变区基因,构建单链抗体基因,并克隆pGEM-TEasy质粒,进行核苷酸序列分析。结果：分别得到了414 辽的轻链可变芡基因片段和393bp的重链可变区基因片段,序列分析表明轻链可变区属于小鼠kappa链第XX家族,重链可变区属于小鼠Ig链第Ⅸ家族。结论：克隆到序列正的抗乙型肝炎病毒表面抗原单链抗体基因。     

人巨细胞病毒感染家庭聚集性的初步研究

骨髓移植治疗白血病常常由于感染人巨细胞病毒导致移植失败。在对骨髓移植ＨＬＡ配型血术前检测同时进行人巨细胞病毒染检测发现，通过套式ＰＣＲ特异扩增人巨细胞病毒即刻早期基因外显示４的ＤＮＡ片段，在２９个骨髓移植家庭供受体的外周血中，有的家庭中所有成员均有人细胞病毒感染，而有的家庭成员中却根本不存在人巨细胞病毒感染。