2016—2018年长沙市人群及活禽市场环境H5N6亚型禽流感病毒监测分析

目的:开展2016—2018年长沙市人群感染和活禽市场(live poultry markets, LPMs)环境污染H5N6亚型禽流感病毒(avian influenza virus, AIV)监测,为防控人感染H5N6亚型AIV提供实验室数据。方法:采集2016—2018年长沙市流感样病例和不明原因肺炎病例咽拭子6...     

逆转录-环介导等温扩增方法检测甲型H1N1流感病毒

2009年3月墨西哥暴发"人感染猪流感"疫情,造成人员死亡.研究发现,此次疫情的病原为变异后的甲型H1N1流感病毒,甲型H1N1流感病毒属于正黏病毒科(orthomyxoviridae),甲型流感病毒属(influenza virus A).该毒株包含有猪流感、禽流感和人流感3种流感病毒的基因片段,可以在人间传播.     

多重PCR快速检测3种致泻性大肠埃希菌方法的建立

目的利用多重聚合酶链反应(PCR)技术,建立一种可以同时快速检测肠致病性大肠埃希菌(EPEC)、肠侵袭性大肠埃希菌(EIEC)、肠出血性大肠埃希菌(EHEC)3种致泻性大肠埃希菌的多重PCR方法。方法根据EPEC的eae基因、EIEC的ipaH基因、EHEC的stx1基因筛选设计引物,建立多重PCR检测体系,并对PCR反应体系和条件进行优化。结果设计的3对PCR引物均能特异地扩增出相应的目的基因,该多重PCR体系能同时检测3种目的菌,特异度强。结论初步建立了一种能够同时快速检测3种致泻性大肠埃希菌的多重PCR检测方法,可用于食品安全及食物中毒事件的快速筛查。     

1996～2005年人用狂犬疫苗免疫效果分析

目的观察人用狂犬疫苗的免疫效果。方法采用ELISA方法对1996～2005年被动物（以狗、猫为主）咬（抓）伤且全程足量注射狂犬疫苗免疫者3086例（男1659例，女1427例）进行抗体检测与分析。结果平均抗体阳转率为83．70％，1996～2005年免疫成功率分别为64．77％～92.06％。各年龄段抗体阳转率为68．57％～92．06％，男、女性抗体阳转率分别82．58％（1370／1659）、85．00％（1213／1427）。结论近10年来人用狂犬疫苗免疫平均阳转率为83，70％。1996～2005年抗体阳转率随年份推近逐年提高，尤其2002年采用Vero细胞狂犬病纯化疫苗代替精制狂犬疫苗进行免疫，抗体阳转率有了大幅度提高。低年龄组人群对狂犬疫苗刺激较高年龄组敏感，因此推荐50岁以上的中、老年人使用疫苗剂量在第1、2针次时加倍，并采用多点注射法以提高免疫成功率。     

长沙市疾控系统离退休人员血糖、血脂异常调查及其相关性分析

目的了解疾控系统离退休人员血糖、血脂水平,分析高血糖与高血脂的相关性。方法利用生化分析仪对416名50岁以上离退休人员进行血糖、血脂检测。结果血脂异常率73.08%,高脂血症罹患率66.35%,血糖升高率24.04%,85.00%血糖升高患者伴有高脂血症。结论本组人群血脂、血糖异常率较高,女性高脂血症罹患率明显高于男性。高脂血症作为糖尿病的病理基础又是易患因素,应引起高度重视。     

长沙市家禽市场环境中H5N1亚型禽流感病毒传播风险研究

目的 对长沙市家禽市场职业暴露人群进行禽流感病毒（AIV）H5N1亚型抗体水平和环境AIV核酸检测,并对环境中AIV H5N1亚型的血凝素（HA）基因进行测序分析。方法 抽取长沙市1个区和1个县,各选择2个城区或乡镇家禽市场进行职业暴露人群H5N1抗体和环境AIV核酸检测。利用单放射免疫扩散溶血实验（SRH）对102份家禽市场职业暴露人员血清标本进行H5N1抗体检测,real-time PCR方法检测160份家禽市场环境标本（污水、禽类粪便、羽毛和禽类笼具表面涂抹标本）AIV核酸,对4份污水H5N1亚型AIV核酸阳性标本进行HA基因RT-PCR扩增和TA克隆测序,测序结果利用Lasergene和Mega 5.0软件进行氨基酸比对和进化树构建。结果AIVH5N1抗体监测结果显示,家禽市场职业暴露人群血清H5N1抗体阳性率为25.5%（26/102）,其中乡镇和城区家禽市场职业暴露人群阳性率分别为50.0%（9/18）和25.4%（17/67）,乡镇家禽市场职业暴露人群阳性率高于城区。长沙市家禽市场环境中H5亚型AIV核酸阳性率为31.3%（50/160）,其中乡镇家禽市场阳性率为37.3%（31/83）,高于城区家禽市场24.7%（19/77）;不同标本H5亚型AIV核酸阳性率不同：污水（50.0%,24/48）、羽毛（44.5%,4/9）、禽类粪便（29.8%,14/47）和禽类笼具表面涂抹（14.3%,8/56）;差异均有统计学意义（P＜0.01）。TA克隆测序得到4个AIVH5N1亚型HA基因序列,进化树显示4个AIVH5N1亚型HA基因与中国内地和香港禽来源的AIV分离株为同一分组,属于欧亚分支;4个AIV H5N1亚型HA基因受体结合位点氨基酸序列仍然为禽源（QSG）、HA1和HA2蛋白之间连接肽为多个碱性氨基酸序列（RERRRKK或RERRGKK）,与入源AIV H5N1亚型具有相同的受体结合位点和高致病性的分子特征。结论 长沙市家禽市场环境中存在较多数量的AIVH5N1亚型,是导致职业暴露人群抗体阳性率达25.5%的原因之一;环境中存在的AIVH5N1亚型HA基因表现出来的高致病性分子特征,增加了家禽市场环境中发生AIV传播的风险。     

痰中结核分枝杆菌DNA提取方法的比较及在LAMP检测中的应用

目的:对5种DNA提取方法进行比对,为选择适用于痰中结核分枝杆菌DNA的提取方法提供依据。方法:采用PureLink genomic DNA kits(PLKm)、苯酚与氯仿法(PCm)、Chelex-100法(Cm)、磷酸盐缓冲液法(PBm)及硅珠法(SBm)5种方法提取痰标本中的DNA,对提取产物的浓度、纯度等技术指标进行分析,并对核酸扩增结果进行统计。结果:DNA浓度均值由高到低依次是PBm、Cm、PCm、SBm、PLKm,组间比较差异有统计学意义,两两比较发现PLKm与PCm、Cm、PBm之间差异有统计学意义,但Cm与SBm间的比较有统计学意义;5种提取方法的OD260:OD280比值均值与1.8的接近程度依次是PLKm、PCm、Cm、PBm、SBm,组间比较差异有统计学意义,两两比较发现除SBm与另外4种方法间存的差异具有统计学意义外,其余各组间的比较均无统计学意义;采用PLKm、PCm及Cm提取的产物均扩增出阳性结果,而PBm、SBm提取产物分别有18例和11例未获得阳性结果,经Mc-Nemar x2检验方法间的差异有统计学意义。结论:Chelex-100提取痰标本中结核分枝杆菌DNA是一种简便、省时、廉价适用于基层结核病实验室进行核酸检测的方法。     

沙门菌属LAMP检测方法在食品卫生检验中的应用评价

目的探讨沙门菌属环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)方法在食品卫生检验中的应用价值。方法利用文献报道的LAMP检测方法和分离培养法分别对135份食品标本进行沙门菌检测,评价LAMP法和分离培养法的一致性。结果 LAMP方法检出14份食品标本沙门菌阳性,阳性率为10.4%,电泳和加荧光染料染色后均能判断结果;分离培养法检出6份食品标本沙门菌阳性,阳性率为4.4%。LAMP法检出阳性率高于培养法(P=0.021)。LAMP方法可在24 h内从食品中检测出沙门菌,而分离培养法检出沙门菌需要4~7 d,LAMP检测方法更快速。结论沙门菌属LAMP方法检测阳性率高于分离培养法,LAMP方法可用于食品中沙门菌的核酸检测。     

重组GII型诺如病毒长沙株全基因组序列的测定与分析

目的 对2016年长沙地区一起由GII型诺如病毒引起的急性胃肠炎暴发疫情致病原进行全基因组序列测定,掌握其基因类型、分子进化特征和抗原重组情况。方法 提取疫情中患者粪便标本的总RNA,反转录成cDNA,PCR扩增病毒全基因组并采用Sanger法测序,比对拼接后获得病毒全基因组序列;通过BLAST比对和诺如病毒在线分型工具(typing online tool)确定其基因型别;从GenBank中下载GII型诺如病毒参考序列,采用DNA Star软件进行序列多序列比对和同源性分析,绘制系统遗传进化树,基因重组特征分析采用SimPlot软件。结果 通过一代测序获得病毒基因组序列长7491bp,有3个开放阅读框(ORF),长度分别为5100bp,1647bp,765bp。多序列比对和同源分析发现ORF1区与GII.P12型代表株同源性最高,VP1区则与GII.3型同源性最高;因此,将该毒株命名为Hu/GII.P12-GII.3/CS02/2016 /CHN。分子遗传进化分析显示其与中国其他地区如北京、上海、广东等地流行的GII.P12-GII.3重组型诺如病毒亲缘关系最为接近。抗原重组分析发现Hu/GII.P12-GII.3/CS02/2016 /CHN长沙株重组位点在5080bp,为ORF1与 ORF2重叠区的起点。结论 除了GII.P16-GII.2重组诺如病毒的广泛流行外,长沙地区仍存在GII.P12/GII.3重组诺如病毒的散发流行,需加其强监测。