Effects of hammerhead ribozyme (RCP) on HBV P gene in vitro

Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｈａｍｍｅｒｈｅａｄｒｉｂｏｚｙｍｅ（ＲＣＰ）ｏｎＨＢＶＰｇｅｎｅｉｎｖｉｔｒｏＧａｎＬｉｘｉａ（甘立霞），ＷａｎｇＰｉｎｇ（王平），ＺｈｕＸｉｈｕａ（朱锡华），ＤｏｎｇＹａｎｌｉｎ（董燕麟），ＨｏｕＹｕｎｄｅ（侯云德）（Ｄｅｐａｒ...     

重组人干扰素α-2b鼻腔喷雾剂预防治疗恒河猴感染SARS-CoV的试验研究

目的评价重组人干扰素α-2b鼻腔喷雾剂对恒河猴感染SARS-CoV的预防治疗作用。方法采用鼻腔喷雾法(剂量为60万单位/鼻孔)研究了重组人干扰素α-2b鼻腔喷雾剂对感染SARS-CoV的恒河猴预防治疗效果。结果试验组(5只)和对照组(5只)相同时间检测的咽拭子等标本中,Real-time PCR检测和病毒分离均未检出病毒。攻毒后病毒导致机体产生的中和抗体和IgG抗体的反应也较对照组弱。血液学指标检测结果表明试验组动物攻毒后各项指标较试验前比较没有显著性改变;病理结果显示试验组2只恒河猴肺组织形态基本正常,其余3只猴有肺间质性炎,表现肺间隔增厚、单核样细胞为主的炎细胞浸润,其中1只增厚的肺间隔有局灶相互融合,这3只猴肺部病变与对照组的病变表现相似,且病变累及范围较对照组小;其他各受检脏器均未见明显异常。结论重组人干扰素α-2b鼻腔喷雾剂可以有效阻断或减弱SARS-CoV对恒河猴的感染。     

流感病毒血凝素基因工程抗体的抗病毒实验效果观察

目的：对昆虫细胞系统表达纯化的中和性流感病毒血凝素基因工程全抗体IgG-IV-2,IgG-IV-6进行体外和体内抗病毒效果的研究。方法：对比抗体应用前后病毒在MDCK细胞中的病毒滴度和动物模型中粘膜用药前后鼠肺内病毒滴度的改变，验证抗体的粘膜抗感染效果。结果：两株基因工程抗体使4．5log10TCID50滴度的病毒下降1／2的剂量分别为0．8μg和0．5μg；动物模型的粘膜给药表明使4．0log10TCID50的病毒下降1／2所需的抗体剂量IgG-IV-2为0．25mg/kg体重，IgG-IV-6为0．1mg/kg体重，联合应用时为0．08mg/kg体重。结论：获得的基因工程抗体具有体内体外的抗病毒效果，能够中和病毒毒力。     

用聚合酶链反应技术和异羟基洋地黄毒苷配基分子杂交检测孕妇－新生儿巨细胞病毒感染

用聚合酶链反应技术和异羟基洋地黄毒苷配基分子杂交检测孕妇－新生儿巨细胞病毒感染杨新科，段淑敏，栾向红，侯云德，钱止维，张景华，吴广芹，曹毓彬应用聚合酶链反应（Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）和异羟基洋地黄毒甙配基（Ｄｉｇｏｘｉ...     

表达单纯疱疹病毒Ⅱ型糖蛋白D的重组痘苗病毒活疫苗株的建立

我们以前曾报道，表达单纯疱疹病毒Ⅱ型糖蛋白Ｄ（ＨＳＶ－２ｇＤ）的重组痘苗病毒（实验疫苗株）能保护被免疫小鼠抵抗致死量ＨＳＶ－２病毒的攻击。在此工作基础上，严格按人用疫苗研究要求的实验条件，成功地建立了表达ＨＳＶ－２ｇＤ的重组痘苗病毒活疫苗株。首先将经聚合酶链反应（ＰＣＲ）修饰的ＨＳＶ－２ｇＤ基因插入痘苗表达质粒ｐＪＳＢ１１７５，置于痘苗病毒Ｐ７５Ｋ早／晚期启动子控制下。将此重组质粒用Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ方法转染已受野型ＴＫ＋痘苗病毒天坛７６１株感染的人胚肺二倍体细胞。经同位素探针（３２Ｐ－ＨＳＶ－２ｇＤ）原位杂交法和３轮蚀斑纯化，筛选出基因组内整合有ＨＳＶ－２ｇＤ基因的重组痘苗病毒。斑点和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交证实，ＨＳＶ－２ｇＤ基因已插入痘苗病毒基因组内预期的ＴＫ区段，间接免疫荧光检测显示，重组病毒感染细胞后能有效地表达ＨＳＶ－２ｇＤ蛋白。     

慢性乙型肝炎患者树突状细胞表型的研究

目的探讨慢性乙型肝炎患者外周血来源树突状细胞（Dendritic cell，DC）数量及表型的改变，并对其与肝功能、乙肝病毒复制水平的关系进行研究。方法检测37例慢性乙肝患者和21例健康人肝功能及血清HBV DNA水平，并提取外周血单个核细胞（Peripheral blood mononuclear cell，PBMC）进行体外诱导培养，促使其发育成DC，计数其数量并检测膜表面分子的变化。分析DC数量及表型与肝功能、乙肝病毒复制水平的关系。结果与正常对照组比较，慢性乙肝患者的树突状细胞数量明显减少（P〈0．05），且其膜表面分子CD83、CD86的表达均明显降低（P〈0．05）。在慢性乙肝患者中，DC数量、DC膜表面分子CD83和CD86与血清HBV DNA之间呈负相关关系，而与肝功能之间无明显相关关系。结论慢性乙肝患者体内存在DC数量减少及成熟障碍，这种改变与肝内炎症反应程度不相关，但与乙肝病毒（Hepatitis Bvirus，HBV）的复制水平呈负相关，提示DC参与慢性乙肝患者体内HBV的清除。     

痘苗病毒VGF细胞膜外结构域在真核及原核细胞中的表达

目的为了进一步探索ＶＧＦ的生物学功能方法分别构建了痘苗病毒天坛株生长因子（Ｖａｃｃｉｎｉａｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ＶＧＦ）基因细胞膜外结构域（ＶＧＦｓｌ）的真核及原核表达系统，在相应的细胞中获得了单独表达（真核）和融合表达（原核）。结果初步纯化的ＶＧＦｓｌ表达产物能够与上皮生长因子（ＥＧＦ）的受体结合，并刺激受体中酪氨酸残基发生磷酸化反应。与ＥＧＦ相比，ＶＧＦｓｌ表达产物刺激ＥＧＦ受体自身磷酸化的能力更强。结论上述结果为ＶＧＦ在病毒感染过程中的作用以及ＶＧＦ作为新型多肽类药物的研究提供了有价值的线索。     

利用缺陷型单纯疱疹病毒载体在大鼠中枢神经系统表达外源基因

本研究利用构建的Ⅰ型单纯疱疹病毒（ＨＳＶ－１）扩增子质粒载体ｐＨＳＬ，在辅助病毒ＨＳＶ－１ｔｓＫ（许可温度３１℃）的辅助下，以首尾相连的连接体形式被包装成复制缺陷型的ＨＳＶ－１假病毒颗粒，得到一种ＨＳＶ－１混合毒种ｄｖＨＳＬ。将ｄｖＨＳＬ接种体外培养的大鼠胚胎脊髓运动神经元和大脑皮质神经元后均可获得报告基因的表达；接种大鼠角膜后，ｌａｃＺ基因在三叉神经节中持续表达两个月；直接注射接种到大鼠前脑皮质后，可在注射部位的局部表达报告基因近两个月。研究结果表明上述缺陷型单纯疱疹病毒载体可作为神经系统基因转移的工具，应用于神经系统生理、病理及神经系统疾病基因治疗的实验研究     

汉坦病毒A9株全长L片段cDNA克隆和核苷酸序列测定

目的克隆我国分离的汉坦病毒A9株L片段全长cDNA,并测定其核苷酸序列.方法用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术分段扩增汉坦病毒A9株全部L片段,用T-A克隆方法进行PCR产物克隆,测定PCR产物的核苷酸序列.通过亚克隆将分段的L片段连接成全长cDNA克隆.结果A9株的基因组L片段长度为6533个核苷酸,腺嘌呤核苷酸和尿嘧啶核苷酸丰富(%A+U=62.47).包含有一个单一的开放读码框架(ORF),编码一个标准的质量为2.46×105的蛋白,含有2151个氨基酸.A9株与76-118、C1-1和C1-2株的同源性最高,达到83.8%.与TULA病毒的关系较远,其核酸序列的同源性为65.8%.将推导的A9株编码的氨基酸序列与其他21种负链RNA病毒的依赖RNA的RNA聚合酶的氨基酸序列以及汉坦病毒几个代表株的L片段氨基酸序列进行比较,显示A9编码的RNA聚合酶也有6个比较保守的区域以及几个极端保守的氨基酸残基.结论汉坦病毒A9株L片段具有和其他汉坦病毒RNA聚合酶相似的核苷酸一级结构,通过对推导的氨基酸分析,该片段具有一些在RNA病毒聚合酶中都存在的保守区域.