RP-HPLC法测定注射用尖吻蝮蛇血凝酶的含量

目的:建立测定注射用尖吻蝮蛇血凝酶的高效液相色谱分析方法。方法:采用Vydac 208TP54-C8(5μm,4.6 mm×250 mm)色谱柱,流动相A为0.1%三氟乙酸,B为乙腈-水(90∶10,含0.1%三氟乙酸),梯度洗脱,流速为0.8 mL·min-1,柱温45℃,检测波长为280 nm。结果:尖吻蝮蛇血凝酶浓度在2.5～30μg·mL-1(r=0.9991)范围内线性关系良好,平均回收率(n=9)为99.5%。结论:该方法可以为注射用尖吻蝮蛇血凝酶的质量控制提供依据。     

重组人甲状旁腺激素效价测定方法的研究

采用酶标法、放免法、化学发光法对 rh PTH效价进行测定,并进行了比较性研究。结果表明,三种方法间无显著性差异。酶标法简单快捷、安全,更适合作为常规重组人甲状旁腺激素生物学活性的测定。     

重组人促卵泡激素(rhFSH)肽图分析方法研究

目的建立重组人促卵泡激素(rh-FSH)的标准肽图分析方法。方法通过超滤、透析、冷冻干燥法富集制备rh-FSH对照品。通过尿素变性、二硫苏糖醇(DTT)还原、碘乙酸酰基化制备供试品溶液。采用N型-糖苷酶F(PNGaseF)酶解去除rh-FSH糖侧链,经SDS-PAGE验证切糖结果后,用胰蛋白酶水解,酶解所得肽段通过RP-HPLC分析,得到rh-FSH肽图。结果利用国外原研厂rh-FSH制剂富集制备的rh-FSH结构完整,可用作rh-FSH肽图分析的对照品。国产样品的肽图谱与对照品一致。结论建立的肽图分析方法可作rh-FSH产品的结构确证。     

人胰岛素及其类似物国家标准增修订概况

本文介绍了《中国药典》2020年版（三部）人胰岛素及其类似物国家标准增修订概况。包括标准起草过程的基本原则和技术考量，并就关键项目在中国药典、欧洲药典和美国药典的协调性方面进行了分析，旨在为本领域内相关研发和质控人员更好地理解和使用人胰岛素及其类似物药典标准提供参考。     

脑蛋白水解物注射液相对密度的测定

目的对国内企业生产的脑蛋白水解物注射液进行相对密度测定,为研究该品种的质量标准提供依据。方法利用DE40密度计于室温20℃测定脑蛋白水解物注射液的相对密度。结果脑蛋白水解物注射液相对密度在1.0137~1.0211g/cm3之间。结论本方法简单,快速,重复性好,为完善脑蛋白水解物注射液的质量标准提供依据。     

基于液质联用技术的脂肪酸修饰型GLP-1类似物一级结构测定

目的 使用超高效液相色谱-四极杆串联飞行时间质谱法(UPLC-Q-TOF MS)对脂肪酸修饰型胰高血糖素-1(GLP-1)类似物利拉鲁肽和司美格鲁肽一级结构进行测定。方法 分别在完整分子和酶切肽段水平上检测,采用ACQUITY UPLC peptide BEH C18(2.1 mm×100 mm,30 nm,1.7 μm)色谱柱,流动相A为0.1%甲酸-水溶液,流动相B为0.1%甲酸-乙腈溶液,梯度洗脱,流速0.3 ml/min;采用正离子ESI⁺离子源和MS^E采集模式进行数据采集。结果 分别从完整分子和肽段水平准确测定了两种脂肪酸修饰型GLP-1类似物一级完整序列结构信息,并对修饰侧链位点进行准确定位。肽段覆盖率为100%,且专属性强、重复性好。结论 液质联用技术快速、灵敏、准确,可用于GLP-1类似物一级结构的表征分析。     

首批甘精胰岛素国家对照品的研制

目的：建立甘精胰岛素国家对照品。方法：用质谱测定分子量、HPLC法肽图鉴别及测定纯度。结果：以氮含量、纯度扣除法以及外标法结果综合考虑，最终确定首批甘精胰岛素国家对照品的含量为93．7％。即每1mg含甘精胰岛素0．937mg。结论：建立的甘精胰岛素国家对照品可用于国内同类药物的研究和检定以及该进口药品的质控。     

甘精胰岛素注射液有关物质分析方法研究

目的:优化甘精胰岛素注射液有关物质分析方法,论证现行标准规定限度科学性,并对主要有关物质进行鉴别。方法:采用Thermo scientific Bio-Basic-C₁₈色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5μm),以氯化钠-磷酸盐缓冲液-乙腈(18.4 g∶250 mL∶250 mL,加水至1 000 mL)为流动相A,氯化钠-磷酸盐缓冲液-乙腈(3.2 g∶250 mL∶650 mL,加水至1 000 mL)为流动相B,梯度洗脱,流速1.0 mL·min^-1,检测波长214 nm,柱温35℃。利用该方法收集含量最大有关物质组分并利用LC-MS方法进行鉴别。分析色谱柱为ACQUITY UPLC BEH C₁₈ Column(100 mm×2.1 mm, 1.7μm, 300?),以0.1%甲酸水溶液为流动相A,0.1%甲酸乙腈溶液为流动相B,进行梯度洗脱,柱温为50℃。质谱数据采集条件为MS~E模式,一级质谱能量40 V。结果:该RP-HPLC有关物质分析方法,方法学验证结果良好,能够有效分离并准确测定样品中的有关物...     

时间分辨荧光免疫分析法测定人胰岛素生物学活性

目的:利用时间分辨荧光免疫分析系统建立人胰岛素基于转基因细胞的生物学活性检测方法。方法:以CHO-INSRB1284转基因细胞2.5×10~5个·mL^-1作为靶细胞,以400 pmol·mL^-1作为初始浓度对人胰岛素进行3倍系列稀释,随后药物与靶细胞作用20 min,通过时间分辨荧光免疫分析系统,进行生物学活性检测,对该方法进行关键参数的优化,并依据2020年版《中华人民共和国药典》四部通则9401和ICH指导原则Q2(R1)、Q6B进行验证。结果:人胰岛素在本方法中存在良好的量效关系,符合四参数方程：y=(A-D)/[1+(x/C)B]+D。本方法专属性强,5个效价水平(64%、80%、100%、125%及156%)的相对生物学活性(n=8)的几何平均值分别为(55.8±2.06)%、(82.1±5.52)%、(94.4±5.46)%、(121.4±5.94)%、(154.4±8.37)%,相对偏倚及其90%置信区间分别为-12.8%(-16.3%,-9.9%)、2.6%(-4.4%,9.5%)、-5.6%(-11.2%,-0.3%)、-2...     

高效液相色谱法分析卡贝缩宫素及其有关杂质

目的:应用反相高效液相色谱法分析卡贝缩宫素及其有关杂质,并对有关杂质进行定位。方法:用 Lichrospher(?) 100 RP-C_(18)(125 mm×4 mm,5μm)色谱柱,流动相为磷酸盐缓冲液(pH 7.0)-乙腈(76:24);流速为1.2 mL·min~(-1);柱温为60℃,检测波长为220 nm。结果:卡贝缩宫素在0.25～8.0μg范围内呈良好的线性关系,r=1.000,最低检测限为2 ng,平均回收率为99.3%,各有关杂质的相对保留时间范围为相对保留时间±0.02。结论:本法简便、准确,适用于卡贝缩宫素的定量及其有关杂质的鉴别。