微量淋巴细胞毒试剂盒中阳性血清的研制与鉴定

目的 研制微量淋巴细胞毒(CDC)试剂盒中阳性血清,为临床检测节约成本。方法 收集近年来临床检测人类白细胞抗原(HLA)配型的供者和受者外周血,用淋巴细胞分离液分离人外周血单个核细胞,通过多次免疫新西兰大白兔得到抗人淋巴细胞的抗体,即为试剂盒中的阳性血清,提取兔血清进行效价测定和微量淋巴细胞毒实验,与试剂盒中自带的阳性血清作对比分析;并对兔血清进行加速稳定性实验,采用过度升高和降低温度的条件来增加抗体降解的速度,来验证血清的稳定性。结果 免疫的两只兔子中,在做微量淋巴细胞毒实验中,1号兔子在免疫第十一次后实验组中死亡细胞比例已接近阳性对照组,在免疫第十二次后实验组中死亡细胞比例高于阳性对照组,2号兔子的实验组中死亡细胞比例最高只达50%,经验证对比1号兔子的血清比试剂盒中的阳性血清效果更佳,且效价达10⁷,获取总量达60mL,并对其做加速稳定性实验,具有很好的稳定性。结论 此研究方法适宜于研发部门参考文中成熟的研究方法,开发微量淋巴细胞毒试剂盒为其提供优质的实验材料,并可大批量制备后投放于市场,由于其制备成本低,也较易得到,其大大降低了试剂盒的制作成本,具有很好的...     

致康胶囊对人乳腺癌MCF-7细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨致康胶囊对人乳腺癌细胞系MCF-7增殖及凋亡的影响。方法:采用0（对照组）、0.5、1.0、2.0 mg/ml 致康胶囊培养液分别处理乳腺癌细胞MCF-7,分别于培养后24、48和72 h计数MCF-7细胞数。采用MTT法检测致康胶囊对乳腺癌MCF-7细胞生长增殖的影响;采用流式细胞仪检测细胞周期;PI 单染流式细胞仪检测致康胶囊对MCF-7细胞凋亡的影响。结果:不同浓度致康胶囊能有效地抑制MCF-7细胞增殖,且随浓度增加和作用时间延长,细胞的增殖抑制率增加。0.5、1.0、2.0 mg/ml的致康胶囊作用MCF-7细胞72 h后,G0/G1期细胞所占细胞周期的比例分别为19.33%±10.38%、14.12%±5.37%和26.84%±2.13%;而对照组G0/G1期比例为51.83%±1.90%。0.5、1.0、2.0 mg/ml致康胶囊处理48 h后细胞的凋亡率分别为2.09%±0.74%、3.84%±0.78%和 5.35%±0.83%。结论:致康胶囊能抑制MCF-7细胞的体外增殖,且抑制作用表现为时效和量效关系;并能通过阻滞细胞周期于G2/M期,促进乳腺癌细胞凋亡。     

白癜风患者血清前黑素小体蛋白17自身抗体的检测

目的 获取重组前黑素小体蛋白17(Pmel 17)并用于检测白癜风患者血清中Pmel 17自身抗体的分布.方法 通过RT-PCR从原代黑素细胞中获得人的Pmel 17基因,先后插入克隆载体pMD19-T和表达载体pGEX-4T-1,以构建重组质粒.IPTG诱导Pmel 17蛋白表达后以亲和层析法进行纯化.间接ELISA检测白癜风患者血清中抗Pmel 17自身抗体的阳性率.结果 重组质粒经测序,与预期设计完全一致,同时Pmel 17蛋白成功表达和纯化.ELISA检测进展期白癜风患者血清中抗Pmel 17自身抗体阳性率为22％,稳定期白癜风患者阳性率仅为2％,健康对照组未检测到抗Pmel 17自身抗体,进展期和稳定期阳性率差异具有统计学意义.结论 成功表达了Pmel 17重组蛋白,证明Pmel 17自身抗体与白癜风的疾病严重程度有一定关系.     

血小板膜糖蛋白Ⅱb、Ⅲa基因多态性与急性缺血性脑卒中的关系研究

背景血小板膜糖蛋白(GP)Ⅱb/Ⅲa受体与纤维蛋白原有效结合是血小板聚集、血栓形成的最后通路,近年来从分子生物学角度研究GP基因多态性与急性缺血性脑卒中(AIS)的关系成为研究热点。目的分析GPⅡb、Ⅲa基因多态性与AIS的关系。方法选取2017年10月—2018年11月陕西省人民医院神经内一科收治的AIS患者110例作为病例组,另选取同期在门诊体检中心的体检健康者90例作为对照组。比较两组受试者一般资料(包括性别、年龄及吸烟、饮酒情况)、实验室检查指标〔包括PAC-1阳性血小板百分比、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、空腹血糖(FPG)及同型半胱氨酸(Hcy)〕及GPⅡb、Ⅲa基因型和等位基因分布频率,并比较不同GPⅡb、Ⅲa基因型患者PAC-1阳性血小板百分比。结果 (1)两组受试者男性比例、年龄、吸烟率、饮酒率及TG比较,差异无统计学意义(P0.05);病例组患者PAC-1阳性血小板百分比、TC、FPG、Hcy高于对照组(P0.05)。(2)病例组与对照组受试者基因型分布频率均符合Hardy-Weinberg平衡定律(P0.05)。病例组患者GPⅡb ab基因型、bb基因型及b等位基因分布频率高于对照组(P0.05);两组受试者GPⅢa基因型和等位基因分布频率比较,差异无统计学意义(P0.05)。(3)GPⅡb bb基因型患者PAC-1阳性血小板百分比高于aa基因型(P0.05)。(4)不同GPⅢa基因型患者PAC-1阳性血小板百分比比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论 GPⅡb基因多态性与AIS的发生有关,携带b等位基因者可能通过增强血小板活化程度而增加AIS发生风险,而GPⅢa基因多态性则与AIS的发生无关。