利福平通过改善溶酶体功能保护鱼藤酮诱导的SHSY5Y细胞

目的:探讨利福平对鱼藤酮诱导SHSY5Y细胞损伤的保护作用,并从溶酶体功能的角度阐明其作用。方法:用鱼藤酮诱导SHSY5Y细胞构建帕金森病模型,经利福平预处理,CCK8检测细胞存活率,免疫细胞荧光检测溶酶体的渗透性变化及检测溶酶体pH值的变化。结果:与鱼藤酮组相比,利福平预处理组可明显提高多巴胺神经元的细胞活力;与正常细胞组相比,鱼藤酮可破坏细胞溶酶膜稳定及提高溶酶体内的pH值,利福平预处理可明显改善鱼藤酮介导的溶酶体功能障碍。结论:利福平可能通过改善鱼藤酮诱导的溶酶体功能障碍来保护多巴胺神经元。     

靶向调控lncRNA-T199678基因对SHSY5Y细胞周期的影响

目的:研究lnc RNA-T199678基因对细胞生长周期的影响。方法:用lnc RNA-T199678 smart silence转染SH-SY5Y细胞构建lnc RNA-T199678沉默细胞株,用过表达lnc RNA-T199678的质粒转染细胞构建lnc RNA-T199678过表达细胞株,通过q PCR实验验证细胞内lnc RNA-T199678的表达变化,利用流式细胞仪检测细胞生长周期变化。结果:q PCR验证发现lnc RNA-T199678沉默组中细胞内lnc RNA-T199678的表达明显低于NC对照组,lnc RNA-T199678过表达组中细胞内lnc RNA-T199678的表达明显高于NC对照组(P0.05)。与对照组相比,lnc RNA-T199678沉默组细胞处于G0/G1期的比例减少,S期的比例增加。与对照组相比,lnc RNA-T199678过表达组细胞处于G0/G1期的比例增加,S期的比例减少。结论:靶向调控lnc RNA-T199678基因可调控SHSY5Y细胞周期的进程。     

槲皮素抑制鱼藤酮诱导的PC12细胞凋亡

目的: 探讨槲皮素对鱼藤酮诱导的PC12细胞凋亡的影响及其作用机制。方法: 运用鱼藤酮诱导损伤PC12细胞,经300 μmol/L槲皮素预处理后,观察细胞形态学改变,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blotting检测Bax和Bcl-2蛋白的表达,JC-1染色检测细胞线粒体膜电位,比较各组的差异。结果: 与鱼藤酮组相比,槲皮素加鱼藤酮处理组细胞形态明显改善,凋亡率降至6.3%(P<0.01),Bcl-2表达增加(P<0.01),Bax表达降低(P<0.01),线粒体膜电位上升(P<0.01)。结论: 槲皮素对鱼藤酮诱导的PC12细胞凋亡具有抑制作用,上调Bcl-2和下调Bax蛋白的表达,维持线粒体膜电位可能是其作用的机制之一。     

白果内酯在鱼藤酮处理的PC12细胞中抑制α-共核蛋白蛋白寡聚体形成的实验研究

目的研究白果内酯对鱼藤酮诱导的帕金森病细胞模型是否具有保护作用,对α-共核蛋白（α-synuclein）的表达及聚集是否有影响。方法使用鱼藤酮对嗜铬细胞瘤株PCl2细胞进行处理,建立叶synuclein蛋白高表达的帕金森病细胞模型,白果内酯进行干预,采用四甲基偶氮唑盐法（MTT法）检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blotting法检测α-synuclein蛋白的表达。数据以均数±标准差（面±5）表示,应用SPSS16．0统计软件,多组间比较采用单因素方差分析,两组间独立样本的比较采用LSD—t检验,P〈0．05认为差异有统计学意义。结果1．6μmoL／L鱼藤酮组细胞活性显著低于对照组（t=17．422,P〈0．01）,细胞凋亡率和α--synuclein蛋白量高于对照组（t=9．141,t=8．392;P均〈0．01）;10μmol／L及50／μmol／L白果内酯组细胞活性均高于鱼藤酮组（t=4．257,t=6．501;P均〈0．01）,且高剂量者细胞活性更优（t=2．933,P=0．043）;10μmol／L及50μmoL／L白果内酯组细胞凋亡率较鱼藤酮组低（t=4．482,t=4．488,P均〈0．01）,α-synuclein蛋白的表达量低于鱼藤酮组（t=8．349,t：9．028,P均〈0．01）,但两剂量间二者均无统计学差异（￡=0．831,P=0．45;t=2．178,P=0．095）;实验中所显影的α-synuclein蛋白分子量在57kD左右。结论白果内酯对鱼藤酮诱导的PCI2细胞损伤有保护作用,该保护作用可能通过抑制仅,synuclein蛋白寡聚物的形成来实现。     

鲁卡帕尼对于鱼藤酮诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的影响

目的:研究聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)抑制剂鲁卡帕尼对于鱼藤酮诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的影响.方法:将呈对数生长的SH-SY5Y细胞分为3组:对照组(正常培养)、模型组(鱼藤酮10μmol/L诱导)、药物组(鲁卡帕尼5μmol/L预处理1小时后加入鱼藤酮10μmol/L),用CCK8检测各组细胞的存活率,用蛋...     

PEG-PEI/ROCK-Ⅱ-siRNA复合物物理性能和转染C17.2神经干细胞效率的研究

目的探索PEG-PEI/ROCK-Ⅱ-siRNA复合物的物理性能及转染C17.2神经干细胞的效率。方法设计合成PEG-PEI共聚物基因载体,与ROCK-Ⅱ-siRNA进行复合;用凝胶阻滞电泳实验、粒径与电位的测定观察PEG-PEI/ROCK-Ⅱ-siRNA复合物的复合效果;采用透射电镜观察PEG-PEI/ROCK-Ⅱ-siRNA复合物的形态学;通过流式细胞仪技术定量检测复合物对C17.2神经干细胞的转染效果。结果 PEG-PEI/ROCK-Ⅱ-siRNA复合物在N/P=10时完全复合。随着N/P比的增大,复合物的粒径变小而电位增大。在N/P=50时,透射电镜观察到复合物为球形,很好的分散性,平均粒径约为100 nm。PEG-PEI/ROCK-Ⅱ-siRNA复合物在N/P=50时转染C17.2神经干细胞的转染效率最高,为(70.24±5.21)%。结论 PEG-PEI基因载体可以很好的与ROCK-Ⅱ-siRNA复合。PEG-PEI/ROCK-Ⅱ-siRNA复合物对于C17.2神经干细胞具有良好的转染效率。     

聚乙二醇一聚乙烯亚胺介导小干扰RNA体外转染神经干细胞的研究

目的 研究聚乙二醇—聚乙烯亚胺(PEG-PEI)作为非病毒纳米载体介导小干扰RNA(siRNA)体外转染C17.2 NSCs的效果。 方法 采用自行设计合成的PEG-PEI与靶向Nogo受体复合体基因的siRNA形成复合物,通过粒径与电位的测定、凝胶阻滞电泳实验等方法观察PEG-PEI/siRNA纳米复合物的表征及复合效果。以脂质体复合体系Lipofectamine 2000/siRNA为对照,采用流式细胞仪检测不同N/P比(PEG-PEI中氮原子和siRNA中磷原子的摩尔比)的PEG-PEI/siRNA复合物对NSCs的转染效率。 结果 PEG-PEI和siRNA形成粒径为纳米级别的复合物,随着N/P比增大,复合物的粒径逐渐减小,而表面电位逐渐增大。凝胶阻滞电泳实验表明siRNA与PEG-PEI可以通过静电相互作用而稳定结合。流式细胞仪检测细胞转染率后发现,N/P=15时,PEG-PEI/siRNA复合物转染率最高,可达(78.72±8.18)％。 结论 PEG-PEI是一种有良好发展前景的非病毒型siRNA转运载体,对神经干细胞基因治疗具有潜在的应用价值。