血清蛋白质组双向凝胶电泳技术优化

蛋白质组学已成为生命科学研究的重点,是寻求疾病标志物的重要源泉.通过血清蛋白质组学研究,寻找特定疾病的血清特异蛋白质标志物或发现新的疾病相关蛋白质,能为疾病的诊断或治疗提供新的依据,也可能进一步阐明一些复杂疾病的发病机制.自1975年O′Farrell[1]提出高分辨率双向电泳技术以来,该技术有了长足的发展,并与质谱技术、生物信息学技术成为蛋白质组学研究的三大核心技术 .     

2007年驻津武警某部新兵集训期间伤病情况分析

[目的]分析新兵集训期间伤病发生情况,更有目的的开展卫生服务和进行医疗资源配置。[方法]按照国际ICD-10标准进行疾病的命名和分类。采用Epiinfo6.0建立数据库和逻辑检棤及数据录入。用SPSS11.0软件进行数据分析。[结果]各种伤病的总发病率为71.78%。呼吸系统疾病、损伤中毒和外因的某些其他后果、消化系统疾病居前3位。就系统内部疾病的构成而言(前5位):上呼吸道感染、咽炎和扁桃腺炎累计占到全部呼吸系统疾病的95.64%;踝关节损伤、软组织损伤及足损伤累计超过损伤中毒和外因的某些其他后果系统疾病60%;胃肠炎、牙周炎、胃肠功能紊乱累计超过消化系统疾病的70%;皮炎、荨麻疹和皮疹累计超过皮肤和皮下组织系统疾病的60%;关节痛、肢体疼痛和骨膜炎累计占到超过肌肉骨骼子系统和结缔组织疾病的60%。[结论]在新兵集训期间,要高度重视呼吸系统疾病的预防;同时,也要控制损伤中毒及外因的某些其他后果系统的疾病因病减员率及胃肠炎的发生。     

某部新兵集训医疗资源使用情况分析

[目的]分析新兵集训过程医疗资源使用情况,为医疗资源合理配置提供参考.[方法]实时、动态地登记并随访选中新兵集训过程中所有伤病发生、发展、治疗及结局.疾病命名和分类参照国际ICD-10标准.采用Epi-info6.0建立数据库和逻辑检棤程序及数据录入.用SPSS11.0进行数据分析. [结果]集训期间前10位药品使用频率(次/千人)由高到低依次为:速效上风胶囊(166.89)、甘草片(76.55)、伤湿止痛膏(72.54)、病毒灵(66.31)、消炎痛(63.64)、螺旋霉素(53.40)、白霉素(43.17)、咳必清(1.83)、阿司匹林(39.16)和红药片(39.16).约90%医疗经费按疾病不同系统分配情况是:呼吸系统(57.45%～64.94%)、损伤中毒及外因的某些其他后果(13.56%～15.08%)、某些传染病寄生虫系统(3.50%～4.02%)、肌肉骨骼子系统和结缔组织系统(3.46%～3.91%)和皮肤和皮下组织系统(2.53%～2.87%). [结论]配置集训新兵医疗资源时,要重点加强呼吸系统疾病药品的配备,加强提供理疗等物理治疗器材、药品和场地,同时要强调各类皮肤病类药品的准备,并为各类传染病的隔离、治疗或转院提供足够的便利.     

严重急性呼吸综合征康复人员并发股骨头缺血性坏死血清相关蛋白研究

目的 分析严重急性呼吸综合征(SARS)康复人员并发股骨头缺血性坏死血清差异蛋白,探讨其发生机制.方法 设立正常健康女性人员为正常对照组(A组,10例)、SARS康复无并发症的女性人员为单纯组(B组,10例)、SARS康复并发股骨头缺血性坏死的女性人员为坏死组(c组,10例).应用双向凝胶电泳结合基质辅助激光解吸飞行时间串联质谱技术对A、B、C组进行血清比较蛋白质组学研究;酶联免疫吸附测定血清淀粉样P成分在3个组个体血清样本中的表达;统计分析其特异度和敏感度.结果 A、B、c组双向电泳凝胶图蛋白质点数分别为632±28、671±55、688±42.匹配率为85%～95%;共找出18个差异蛋白,经质谱鉴定为甲状腺素运载蛋白、丝氨酸蛋白酶抑制因子、α-1抗胰蛋白酶前体、血清淀粉样P成分等10种差异蛋白;与A组和B组比较,C组甲状腺素运载蛋白A链、白蛋白、前白蛋白、补体C4、纤维蛋白原γ载脂蛋白L低表达,而丝氨酸蛋白酶抑制因子、α-1抗胰蛋白酶前体、血清淀粉样P成分高表达;血清淀粉样P成分在A、B、C组个体血清样本中的含量分别为(0.54±0.30)、(0.83±0.39)、(1.21±0.29)ns/ml;与A组和B组比较,C组血清淀粉样P成分高表达(t值分别为2.27、2.98,P＜0.05);ROC曲线下面积为0.854,特异度77.8%,.敏感度85.2%.结论 3组间存在差异表达蛋白,血清淀粉样P成分可能成为SARS康复人员并发股骨头缺血性坏死潜在血清标记物之一.     

血清蛋白质组双向凝胶电泳技术优化

目的建立稳定的人血清蛋白质组双向凝胶电泳（2-DE）技术体系,提高人血清蛋白2-DE图谱的分辨率和重复性。方法采用固相pH梯度（IPG）等电聚焦（IEF）为第一向、SDS-PAGE垂直电泳为第二向的双向电泳技术,对血清蛋白质样品制备、上样量、IPG胶条选择、等电聚焦和SDS-PAGE垂直电泳程序及参数等进行了比较和优化。结果两样品经过3次重复,还原烷基化蛋白质斑点数（678±32）个,非还原烷基化蛋白质斑点数（358±26）个,还原烷基化分离较好,电泳图谱更清晰。结论还原烷基化处理能提高血清蛋白质2-DE的分辨率,该方法也可对其它蛋白质样品的制备和双向电泳提供借鉴作用。     

血清蛋白质组双向凝胶电泳技术优化

目的 建立稳定的人血清蛋白质组双向凝胶电泳(2-DE)技术体系,提高人血清蛋白2-DE图谱的分辨率和重复性.方法 采用固相pH梯度(IPG)等电聚焦(IEF)为第一向、SDS-PAGE垂直电泳为第二向的双向电泳技术,对血清蛋白质样品制备、上样量、IPG胶条选择、等电聚焦和SDS-PAGE垂直电泳程序及参数等进行了比较和优化.结果 两样品经过3次重复,还原烷基化蛋白质斑点数(678±32)个,非还原烷基化蛋白质斑点数(358±26)个,还原烷基化分离较好,电泳图谱更清晰.结论 还原烷基化处理能提高血清蛋白质2-DE的分辨率,该方法也可对其它蛋白质样品的制备和双向电泳提供借鉴作用.     

血清层粘连蛋白荧光免疫层析检测方法的建立及性能评价

建立一种荧光定量层粘连蛋白(LN)检测方法,定量检测人血清LN水平。将鼠抗LN抗体用划线机喷到硝酸纤维素膜表面作为检测线(T),将链霉素亲和素用划线机喷到硝酸纤维素膜表面作为质控线(C);用生物素荧光微球标记鼠抗LN抗体作为缓冲液。利用双抗体夹心法原理定量检测LN水平,对方法的线性、精密度、空白限、回收率、相关性等性能指标进行验证,并使用市售化学发光LN试剂盒比对。荧光免疫分辨检测LN方法的回收率为86.03%~97.50%,空白限为4.22 ng/mL,线性范围为20~800 ng/mL,相关系数(r)为0.9989;批内精密度为6.51%,批间精密度为6.23%。与市售LN试剂平行检测100份血清标本,有良好的相关性(Y=1.0219X-1.1720,r=0.9871)。本研究建立了LN荧光免疫检测方法,各项性能指标均达到临床检验要求,操作便捷、结果准确,可用于临床血清LN水平的检测。     

武警新兵集训期问伤病发生情况分析

目的 分析武警新兵集训期间伤病发生的时间、兵源地域和城乡分布特点,为预防和减少各种伤病的发生提供依据.方法 采用分层随机整群抽样方法,按照国际ICD-10标准进行疾病分类.采用Epiinfo 6.0录入数据,SPSS 11.0进行数据分析.结果 新兵集训期间,呼吸系统疾病占所有系统疾病的54.06%.就伤病总的时间趋势而言,开训前2周呈上升趋势,以后逐渐下降,第2周、第6周和第10周出现3个高峰,昼夜发病率分别达到12.66‰、8.45‰和7.00‰.上呼吸道感染在第2周和第10周出现2个发病高峰,分别为6.54‰和3.94‰.胃肠炎的昼夜发病率第8周(1.14‰)和第11周(0.83‰)较高.踝关节扭伤的发病率第2周和第6周较高,分别为0.70‰和1.14‰.来自于华东、华北、华中和东北4个地区的新兵发病率有显著差异(X2=71.217,P＜0.05).4个地区间上呼吸道感染发病率不同(X2=25.771,P＜0.05),而胃肠炎和踝关节扭伤无显著性差异(P>0.05).城乡新兵总发病率无显著性差异(X2=0.021,P=0.884).农村兵踝关节扭伤的发病率显著高于城镇兵(X2=7.29,P=0.007).上呼吸道感染和胃肠炎发病率在城乡新兵间无显著性差异.结论 预防呼吸系统疾病对集训卫生防病工作意义重大;防病工作在不同训练期间应有所侧重;卫生防病预案的制定需要遵循疾病自身发病特点.     

武警某部2008年新兵集训期间训练伤发生情况分析

6‰).华东、华北、华中和东北4个地区来源的新兵中训练伤的发生率不同(χ2=9.998,P=0.019),城市新兵训练伤的发生率(1.11‰)低于农村新兵(1.43‰,χ2=5.945,P=0.015).结论 在集训前两周要特别重视新兵适应训练;训练科目的 安排要循序渐进;重视农村新兵的身体协凋性训练.     

染矽尘大鼠早期肺组织差异基因表达谱的研究

目的 研究染矽尘大鼠早期肺组织与正常肺组织的差异基因表达谱.方法 应用气管暴露法建立雄性Wistar大鼠染矽尘模型和对照组,每组3只,应用Illumina激光共聚焦光纤微珠基因芯片技术,研究建模后14 d时的大鼠肺组织差异基因表达谱,并采用DAVID生物信息学分析工具,进行Fisher精确概率检验,对差异基因的基因功能和生物学通路进行富集统计学分析.结果 检测出的有效基因共22 107个,筛选出染矽尘组与对照组的差异基因共1567个,其中上调基因为765个,下调基因为802个.在KEGG生物学通路数据库中,共406个差异基因获得注释,上调基因为204个,其中11个生物学通路相关基因显著上调;下调的基因有202个,其中3个生物学通路相关基因显著下调.Real-time PCR实验验证了血红素加氧酶1(HMOXl)、超氧化物歧化酶2(SOD2)基因上调的趋势和基因芯片结果是一致的.结论 本次实验筛选出了染矽尘早期大鼠肺组织差异基因,提示矽尘致肺纤维化过程中可能存在相互作用的基因簇.