急性髓系白血病相关循环肿瘤标志物的临床应用

恶性肿瘤严重危害人类生命健康,为了设计和选择更好的治疗方案,早期诊断是其治疗中最重要的步骤之一。虽然近年来急性髓系白血病(AML)的诊治方法不断提高,但其长期无病生存率仍然较低。因此,探寻更加灵敏、特异的早期生物学标志物,尽早明确AML的诊断和治疗方案,对提高AML患者的长期无病生存率具有重要意义。随着无创检验技术的不断创新,循环肿瘤标志物成为研究的热点。这些肿瘤标志物的出现为AML的早期诊断提供了新靶点,并为患者的预后和生存带来希望。本文主要对近年来报道的AML相关循环肿瘤标志物及其在临床的应用价值进行综述。     

PD-1/PD-L1通路中相关调控microRNA分子的研究进展

PD-1/PD-L1是调节T细胞活化增殖分化的重要抑制性信号通路,其激活能够减少免疫效应对周围组织的破坏和损伤,避免免疫性疾病的发生,同时也导致肿瘤逃避机体免疫监视,促进肿瘤细胞增殖。微小RNA (miRNA)作为机体重要的基因转录调控因子,可以通过调控PD-1/PD-L1表达参与机体T细胞的免疫效应,在肿瘤发生、发展过程中发挥重要的作用。该文对近年来报道的涉及PD-1/PD-L1调控的miRNAs作一综述。     

TCR Vα23-Vβ13 基因修饰T细胞及其特异性细胞毒活性研究

目的: 分析弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)抗原特异T细胞受体(TCR) Vα23-Vβ13 基因修饰T细胞后的体外特异性杀伤活性。方法:扩增并克隆已鉴定的DLBCL患者外周血中单克隆增殖T细胞的TCR Vβ13 和TCR Vα23 基因全长序列,构建TCR Vβ13 -IRES-TCR- Vα23 双基因重组质粒,经核转染的方法将其转染正常人T细胞,通过real-time PCR和Western blotting检测TCR Vβ13 和TCR Vα23 这2个外源基因在mRNA和蛋白水平的体外表达情况,并对TCR转基因T细胞进行体外细胞毒性检测。结果:经酶切分析和核酸序列测定证实重组质粒构建正确,转染正常人T细胞后,TCR Vβ13 和TCR Vα23 在mRNA及蛋白水平实现了共表达。转染后3 d,TCR转基因T细胞对DLBCL细胞株Toledo细胞的杀伤活性明显高于非特异细胞株Raji细胞和Molt-4细胞,显示出特异性细胞毒活性。结论:成功构建DLBCL相关抗原特异的TCR Vβ13 -IRES-TCR Vα23 双基因真核表达质粒;TCR基因修饰T细胞可获得特异性细胞毒活性。     

急性髓系白血病患者PD-L1和MicroRNA-138-5p的表达及其临床意义

目的:探讨PD-L1和MicroRNA-138-5p(miR-138)在急性髓系白血病(AML)患者外周血单个核细胞(PBMNCs)中的表达特点及其临床意义。方法:应用SYBR GreenⅠreal-time PCR方法分别检测20例初治AML患者、9例复发/难治AML患者和8例完全缓解患者PBMNCs中PD-L1 mRNA和miR-138的表达水平,并选择20例健康体检者外周血样本作为对照组。结果:初治AML组和复发/难治AML组患者PD-L1的表达水平均显著高于健康对照组(P0.01),而且复发/难治AML组患者PD-L1的表达水平显著高于初治AML组患者(P0.01);初治AML组和复发/难治AML组患者miR-138的表达水平均显著低于健康对照组(P0.01);在20例初治AML患者中共收集了8例完全缓解期标本,完全缓解组mi R-138的表达水平高于初治AML组(P0.05),而缓解组PD-L1的表达水平与初治AML组差异无统计学意义(P0.05);初治AML患者中PD-L1 mRNA与mi R-138表达呈负相关(P0.05)。结论:AML患者PBMC中PD-L1表达增加、miR-138表达下调,且两者间有相关性。     

抗原特异性T细胞受体基因转导技术优化策略的研究进展

肿瘤抗原特异性T细胞受体(TCR)基因转导技术作为肿瘤过继性免疫治疗的新手段之一,细胞和动物实验都证明它有很好的抗肿瘤作用,但临床试验结果却不尽人意.影响临床疗效主要原因是肿瘤抗原特异性T细胞受体不能有效地表达于T淋巴细胞表面,因而探索提高抗原特异性TCR高效表达的方法可能是解决这种问题的必要途径.     

汞对作业工人周围血T细胞受体-Vβ亚家族表达影响

目的分析汞作业工人周围血中T细胞受体-Vβ(TCR-Vβ)亚家族表达模式的变化,了解汞对T细胞免疫功能的影响。方法利用逆转录聚合酶链反应分析15例接汞工人周围血TCR-Vβ亚家族的分布情况,另选15名一般办公室健康人员作为对照组。结果 15例汞作业工人周围血单核细胞(PBMC)可检测到15～23个Vβ亚家族,中位数为21个亚家族,与对照组(可检测全部24个亚家族)比较,差异有统计学意义(P=0.000)。TCR-Vβ亚家族在汞接触工人中分布具有比较集中的趋势,全部样本均未能检测到Vβ6亚家族的表达,而Vβ16表达频率低,仅为20%,Vβ12表达频率为33%,而Vβ4的表达频率则为40%。结论本研究提供了汞接触对周围血T细胞Vβ亚家族出现选择性表达的现象,这可能是汞对T细胞损伤的一些早期表现。     

慢性粒细胞白血病T细胞TCRζ链表达上调后全基因表达谱改变的分析

目的:分析表达上调TCRζ后慢性粒细胞白血病(CML)患者T细胞基因表达谱的变化特点,探讨转基因上调TCRζ后T细胞活性恢复的分子机制.方法:收集3例初发未治疗慢性期CML患者的外周血单个核细胞(PBMCs),利用MACS法分选获得CD3+T细胞;利用核转染技术转染TCRζ-IRES2-EGFP(实验组)和pIRES2...     

抗原特异性T细胞受体基因转导技术优化策略的研究进展

肿瘤抗原特异性T细胞受体(TCR)基因转导技术作为肿瘤过继性免疫治疗的新手段之一,细胞和动物实验都证明它有很好的抗肿瘤作用,但临床试验结果却不尽人意.影响临床疗效主要原因是肿瘤抗原特异性T细胞受体不能有效地表达于T淋巴细胞表面,因而探索提高抗原特异性TCR高效表达的方法可能是解决这种问题的必要途径.     

弥漫大B细胞淋巴瘤相关抗原特异TCR基因修饰T细胞TCRζ链基因的表达

目的:分析DLBCL相关抗原特异TCR基因修饰T细胞经肿瘤细胞刺激活化前后TCRζ链基因表达水平的变化.方法:利用SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR,相对定量检测TCR基因修饰T细胞活化前后TCRζ链基因的表达情况,β2微球蛋白基因(β2M)为内参照,根据相对定量公式:2-ΔCt ×100%和2-ΔΔCt,计算TCR基因修饰T细胞活化前后TCRζ链基因的相对表达水平及其差异情况.结果:与未转染T细胞的TCRζ基因mRNA表达量(1.74±0.28)%相比,TCR转基因修饰T细胞TCRζ基因mRNA的表达水平没有发生明显的变化,表达量为(1.78±0.22)%;而经效/靶细胞(TCR基因修饰T细胞/Toledo细胞)混合培养后,活化的TCR基因修饰T细胞的TCRζ基因mRNA表达水平为(11.54±1.98)%,明显高于未刺激培养之前的TCR基因修饰T细胞和未转染T细胞的TCRζ基因的表达水平(P＜0.05),分别增长了(6.59 ±0.80)倍和(6.48±0.36)倍.结论:TCR转基因修饰T细胞受到抗原的刺激而活化,TCRζ链基因的表达相应增加.     

T-ALL患者外周血TCRγ/δ T细胞的分布和增殖特点

目的:了解T细胞急性淋巴白血病(T-cell acute lymphocytic leukemia,T-ALL)患者外周血TCR Vγ和Vδ亚家族T细胞的分布和克隆情况。方法:利用RT-PCR扩增9例T-ALL患者和10例正常人外周血单个核细胞中3个TCR Vγ和8个Vδ亚家族基因的互补决定区3(CDR3),了解TCR亚家族Vγ和Vδ亚家族细胞的分布;阳性产物进一步经基因扫描分析CDR3长度,从而了解其克隆性。结果:9例T-ALL患者3个Vγ亚家族的表达率都明显低于正常人Vγ亚家族的表达率(P<0.05);Vδ亚家族中只有Vδ1和Vδ3的表达率低于正常人(P<0.05)。3例T-ALL患者出现克隆性增殖的γ/δT淋巴细胞。结论:T-ALL患者外周血TCR Vγ和部分Vδ亚家族谱系出现限制性表达和克隆性增殖。同时存在克隆性增殖γδ T细胞提示可能为γδ 白血病性T细胞克隆。