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目的观察脂肪间充质干细胞源exosomes的生物学特性,初步探讨其对乳腺癌细胞系MCF7中microRNAs表达谱的影响。方法收集脂肪间充质干细胞培养上清液,以超滤和超离的方法提取exosomes;电镜下观察形态;用Western blot检测exosomes表面蛋白标志物的表达情况;用Dil染料标记exosomes后加入到乳腺癌细胞MCF7上清中,荧光显微镜下观察MCF7对exosomes的内吞作用;用microRNA芯片检测MCF7在exosomes处理24 h后microRNAs表达谱的变化以及exosomes中含有的microRNAs种类。结果脂肪间充质干细胞分泌30~100 nm的exosomes,exosomes表达CD63和HSP70,可被乳腺癌细胞MCF7内吞;exosomes作用24 h,可引起MCF7中244个microRNAs表达发生变化(其中174个表达上调,70个表达下调,倍数2倍);对脂肪间充质干细胞exosomes中microRNAs的分析提示MCF7中microRNAs的上调大部分是内源性的,不是exosomes输入的。结论脂肪间充质干细胞源exosomes可以诱导乳腺癌细胞MCF7microRNA表达谱发生变化,揭示了间充质干细胞影响乳腺癌细胞发生和发展的一个新机制。 相似文献
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目的用microRNA-373(miR-373)的模拟物转染人脂肪来源Flk1+间充质干细胞(MSC),探讨microRNA-373对Flk1+MSC成骨分化的影响。方法利用脂质体作为载体,用miR-373模拟物瞬时转染Flk1+MSCs,然后对其进行成骨诱导,碱性磷酸酶(ALP)染色和茜素红染色观察成骨情况,real-time PCR技术检测成骨标志性基因的表达。结果 ALP染色和茜素红可见明显差异;real-time PCR检测结果显示,实验组(miR-373组)成骨标志基因runt相关转录因子2(RUNX2)(0.543±0.021)、ALP(0.556±0.024)和骨钙蛋白(OC)(0.499±0.017)的表达都明显低于对照组(NC组)(P<0.05)。结论 miR-373参与调控Flk1+MSC向骨细胞分化。 相似文献
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目的探讨体外诱导、获取均一的神经干细胞群(NSCs)的有效方法,并建立神经干细胞体外稳定传代扩增体系。方法首先采用无血清的诱导培养基贴壁诱导mESCs形成神经上皮祖细胞(NPCs)。然后将经添加表皮生长因子(EGF)和成纤维细胞生长因子-2(FGF2)的无血清培养基短暂悬浮培养后的NPCs再贴壁培养,诱导形成NSCs。通过细胞系46C监测NPCs的形成,同时对分化细胞进行定量PCR和免疫荧光染色,在不同水平检测细胞分化效果。结果 mESCs神经诱导5 d出现大量Sox1+的NPCs;NPCs悬浮培养后,进一步诱导可得到形态均一的NSCs。第2代和第6代NSCs的神经干细胞标志定量PCR检测结果为:Pax6、Nestin、Mash1、BLBP高表达。第8代NSCs免疫荧光染色显示90%以上的细胞均为Nestin、RC2和Pax6阳性。结论成功诱导mESC生成神经干细胞群,并且可以在体外连续稳定的传代。 相似文献
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