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在hGM-CSF结构与功能研究的基础之上,通过应用PCR介导的缺失与突变和基因重组等技术,构建了表达rhGM-CSF(7~127)的三种原核表达载体pBV220/GM-TGA,pBV220/GM-TAA和pBV220/GM-3′UTR。在三种载体内,hGM-CSF(7~127)cDNA的5′端均缺失6个氨基酸,3′端则分别为天然终止密码TGA,突变终止密码TAA和TGA加3′UTR。SDS-PAGE表明三种载体表达rhGM-CSF(7~127)的水平分别为21%,18.8%和25%。经过用PCgene软件和Zulcer算法分析hGM-CSF(7~127)-3′UTRmRNA的二级结构,表明3′UTR在终止密码TGA附近形成两个茎-环结构,它可能与pBV220/GM-3′UTR载体高表达rhGM-CSF(7~127)有关。表达产物rhGM-CSF(7~127)经弱阴离子DEAE交换层析纯化后,纯度达到92%,比活性为8×107U/mg。 相似文献
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