肿瘤特异性TCRαβ基因转染诱导记忆性T细胞分化及其免疫功能的研究

目的研究特异性TCR基因转染T细胞被肿瘤抗原激活后,记忆性T细胞的分化情况,并明确其表型特征和免疫功能。方法密度梯度离心法分离PBMC,重组TCR腺病毒感染T细胞,流式细胞术检测外源TCR表达效率。AFP表位肽刺激T细胞,流式细胞术检测TCR基因转染T细胞经抗原刺激后,记忆性T细胞标志分子表达。MTT法检测T细胞对不同肿瘤细胞株的杀伤活性。Annexin V-PI双染法检测靶细胞凋亡比例。ELISA法检测T细胞作用于靶细胞后IFN-γ与IL-2分泌水平。结果重组腺病毒载体感染3 d后,外源TCR表达比例接近30%。特异性TCR基因转染可有效促进T细胞识别肿瘤抗原后活化,CD45RO+细胞比例逐渐上升至接近50%。CD45RO+细胞以CD62L–CD44+表型为主。此后CD62L+细胞比例逐渐上升。最终出现分群明显的CD62L+CD44+TCM表型细胞。特异性TCR基因转染能够促进T细胞杀伤AFP+靶细胞,诱导靶细胞凋亡,并促进IFN-γ分泌。抗原预先刺激能够进一步增强TCR基因转染T细胞抗肿瘤免疫效应。结论 TCR基因转染能够有效促进T细胞识别肿瘤抗原后活化。经肿瘤抗原预先刺激的TCR基因转染T细胞将启动记忆性T细胞分化,在再次遭遇表达相同抗原的肿瘤细胞时发挥更为强烈的免疫效应。     

反映瓣膜功能和右心功能前后负荷的超声指标对胎儿病理性三尖瓣反流的诊断价值

目的 建立评价胎儿病理性三尖瓣反流（TR）和生理性TR的有效判断指标。方法 回顾性收集胎儿TR病例,以产后超声或引产后胎儿尸体解剖为结局指标,应用高分辨率彩色多普勒超声诊断仪,在胎儿胸腹部获取标准四腔心切面和静脉导管切面,测量①TR峰值流速,②TR血彩彩束面积占右心房面积比值（TRJA/RAA）,③右心房/左心房在收缩末期的横径比（RAD/LAD）,④观察心房收缩期静脉导管血流有无降低、缺失或反转;以上述4项指标的不同组合判断胎儿病理性和生理性TR。结果 ①生理性TR组162例,TR峰值流速为114.0 cm·s-1,TRJA/RAA为16.6％; RAD/LAD为1.075,静脉导管A波平均流速34.8 cm·s-1,静脉导管内均为向心血流,均未出现A波反转、消失。②病理性TR组35例,TR峰值流速为261 cm·s-1,较生理性TR组明显增高,TRJA/RAA为52.3%,约为生理性TR组的3倍;RAD/LAD为1.274,较生理性TR组亦有明显增大,静脉导管A波平均流速3.8 cm·s-1,较生理性TR组明显降低;A波反转12例,消失5例,明显降低3例。4项观测指标参数绘制相应的ROC曲线获取相应界值,4项指标中的任意1项特异度均较高（87.7%~100%）,但敏感度较低（48.6%~69.8%）。将TR峰值流速和TRJA/RAA合并为1项指标,加RAD/LAD和静脉导管A波血流反转或缺失,以其中任意1项指标超出界值判断病理性TR的敏感度为88.6%,特异度为92.0%。结论 联合反映瓣膜病变和右心功能前、后负荷的胎儿超声指标,对提示胎儿病理性TR敏感度、特异度均较高,操作方便简单     

Tourette综合征患儿家长知识、信念、行为现状及影响因素

目的 了解Tourette综合征(TS)患儿家长对TS的认知、态度及行为(知信行)水平现状,分析影响家长知信行的因素,为制定健康教育策略提供依据.方法 采用自制的知信行调查问卷,对2008年11月-2010年10月就诊本院儿童保健科门诊的207例TS患儿家长进行调查.结果 接受调查的家长中,70.5％(146/207例)认为TS是一种不良行为习惯,12.6％(17/207例)认为TS是一种神经精神性疾病,73.9％(153/207例)采取过责备惩罚的方式干预患儿不自主行为,92.8％(192/207例)认为TS对儿童的影响主要是运动性抽动或发声性抽动导致的形象问题.长期在三级医院就诊者占55.1％(114/207例);3个月内至少复诊一次者占53.6％(111/207例).48.8％(101/207例)的家长按医嘱定时复诊;46.4％(96/207例)的家长对患儿的生活习惯遵从医嘱实施干预.多因素Logistic分析显示,家长受教育程度、症状严重程度、复诊频率及患儿就诊医院等级对于家长的知信行有影响.其中家长受教育程度和就诊医院等级与对患儿是否责骂惩罚(β'=2.056、-1.152,Pa＜0.05)、是否规范患儿生活方式(β'=0.736、1.518,Pa＜0.05)、危险因素知晓率(β'=-0.044、0.639,Pa＜0.05)相关;患儿的复诊频率与TS危险因素知晓率相关(β'=2.217,P＜0.05);患儿症状严重程度与症状消失时是否坚持用药相关(β'=-0.249,P＜0.05).结论 TS患儿家长对TS的知信行水平不理想,为更好地防治TS,必须改善患儿家长的知信行水平.     

早中孕期胎儿畸形超声筛查方法分析

目的探讨二维超声和二维联合实时三维超声在孕早中期筛查胎儿畸形的价值,为临床推广无创伤筛查方法提供基础资料依据。方法回顾性分析中南大学湘雅医学院附属海口医院于2013年1月—2015年6月共4 929例产妇经产前二维超声和二维联合实时三维超声对比检查结果,并对比分析追踪引产或分娩的结果。结果引产或分娩后证实胎儿畸形151例,二维超声检出的胎儿畸形108例,准确率为71.5%,二维超声联合实时三维超声检出胎儿畸形135例,准确率为89.4%,差异有统计学意义(P0.05)。二维超声联合实时三维超声在胎儿神经系统畸形、先天性心脏畸形、消化道畸形、唇腭裂、两种及以上多种畸形等的检出准确率要明显高于单独使用二维超声,差异有统计学意义(P0.05)。结论二维超声联合实时三维超声检查可以明显提高胎儿畸形的筛查率,有助于优生优育。     

耳针联合盐酸氟桂利嗪胶囊治疗前庭性偏头痛的研究

目的：观察耳针联合盐酸氟桂利嗪胶囊治疗前庭性偏头痛的临床疗效。方法：将84例前庭性偏头痛患者按照随机数字表法随机分为治疗组和对照组,每组42例。对照组予盐酸氟桂利嗪胶囊,5 mg/次,每晚1次,口服。治疗组在对照组治疗基础上给予耳针(耳穴取神门、交感、肾、脾、肝、皮质下、额、颞、枕)治疗,每次选穴3～5个,固定3 d, 3 d后更换揿针及耳侧,嘱患者每日按压10次,治疗6 d休息1 d。两组均以2周为1个疗程,共治疗2个疗程。对比两组临床疗效和眩晕次数、持续时间、眩晕残障量表(dizziness handicap inventory, DHI)、疼痛视觉模拟评分(visual analogue scale, VAS)。结果：治疗组显效9例,有效28例,无效4例,有效率为90.24%(37/41);对照组显效4例,有效26例,无效10例,有效率为75.00%(30/40)。两组疗效对比,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组眩晕次数均较治疗前减少(P<0.01),持续时间较治疗前缩短(P<0.01),且治疗组优于对照组(P<0.01);头痛VAS评分和DH...     

MMP-2,-9及其抑制物TIMP-1在多囊卵巢综合征患者黄素化颗粒细胞上的表达

目的分析多囊卵巢综合征(PCOS)患者黄素化颗粒细胞上基质金属蛋白酶-2,-9(MMP-2,-9)及其组织抑制物TIMP-1的蛋白及mRNA在不同培养时间的表达水平,了解与细胞外基质合成、降解相关的MMPs/TIMPs系统参与PCOS的病理生理机制。方法收集2011年9月到2012年1月行体外受精(IVF)或卵胞浆内单精子注射(ICSI)治疗的PCOS患者30例,对照组为同期行IVF或ICSI治疗的不孕症患者30例。密度梯度法获得卵巢黄素化颗粒细胞,细胞贴壁培养,分别在培养24、48和72h收集颗粒细胞。采用Western blotting方法检测颗粒细胞中MMP-2、MMP-9和TIMP-1的蛋白表达;RT-PCR检测颗粒细胞中MMP-2、MMP-9和TIMP-1mRNA的表达。结果 (1)PCOS组黄素化颗粒细胞MMP-2,-9蛋白表达在各培养时间点(24、48、72h)均显著高于对照组(P均0.05);且MMP-2蛋白表达水平在48、72h相对于24h的比值,以及MMP-9蛋白表达水平在72h相对于24h的比值,PCOS组均显著高于对照组(P均0.01)。(2)PCOS组MMP-2mRNA在24、48、72h的表达,MMP-9mRNA在48、72h的表达均高于对照组,差异有统计学意义(P均0.05);MMP-2,-9mRNA表达水平在48、72h相对于24h的比值,PCOS组高于对照组,差异均有统计学意义(P均0.05)。(3)PCOS组TIMP-1蛋白及mRNA表达在24、48、72h与对照组比较无统计学差异(P0.05)。结论 PCOS患者黄素化颗粒细胞中MMP-2和MMP-9的表达升高,其MMPs/TIMPs的平衡状态向蛋白酶的活性增强方向移动,可能与PCOS患者黄体功能不足有关。