利用缺陷型单纯疱疹病毒载体在大鼠中枢神经系统表达外源基因

本研究利用构建的Ⅰ型单纯疱疹病毒（ＨＳＶ－１）扩增子质粒载体ｐＨＳＬ，在辅助病毒ＨＳＶ－１ｔｓＫ（许可温度３１℃）的辅助下，以首尾相连的连接体形式被包装成复制缺陷型的ＨＳＶ－１假病毒颗粒，得到一种ＨＳＶ－１混合毒种ｄｖＨＳＬ。将ｄｖＨＳＬ接种体外培养的大鼠胚胎脊髓运动神经元和大脑皮质神经元后均可获得报告基因的表达；接种大鼠角膜后，ｌａｃＺ基因在三叉神经节中持续表达两个月；直接注射接种到大鼠前脑皮质后，可在注射部位的局部表达报告基因近两个月。研究结果表明上述缺陷型单纯疱疹病毒载体可作为神经系统基因转移的工具，应用于神经系统生理、病理及神经系统疾病基因治疗的实验研究     

质粒型单纯疱疹病毒载体的构建及其在真核细胞中的表达

利用基因工程技术构建成功质粒型Ⅰ型单纯疱疹病毒（ＨＳＶ－１）载体ｐＨＳＶ，其中含有ＨＳＶ－１包装信号序列和ＨＳＶ－１复制起点，以及ＨＳＶ－１ＩＥ６８启动子。为验证其构建是否成功，在其ＩＥ６８启动子下游的多克隆位点上插入了Ｅ．ｃｏｌｉＬａｃＺ基因，构建成ｐＨＳＶＬ质粒。用ＨＳＶ－１温度敏感株（ｔｓＫ株）超感染传代细胞后，将这种质粒转染入该细胞，ｐＨＳＶＬ可在辅助病毒ＨＳＶ－１ｔｓＫ（允许温度为３１℃）存在的条件下被包装成病毒颗粒，由此得到的混合病毒含有ＨＳＶ－１ｔｓＫ和ｐＨＳＶＬ假病毒颗粒，收获后再感染培养的Ｖｅｒｏ细胞，原位检测β－半乳糖苷酶活性呈阳性。同时用ｐＨＳＶＬ病毒接种体外培养的ＳＤ大鼠胚胎脊髓运动神经元，用Ｘ－ｇａｌ原位检测β－半乳糖苷酶的活性，亦发现有阳性的神经元存在。说明载体ｐＨＳＶＬ携带的报告基因ｌａｃＺ在这两种真核细胞中均得以正确表达。报告基因可为其它目的基因所代替，可用于神经生理、病理以及神经系统疾病基因治疗的实验研究。     

高效液相色谱法测定盐酸雷尼替丁的含量

目的：建立一种适用于盐酸雷尼替丁原料药的含量测定方法。方法：采用反相高效液相色谱法，Shimadzu ODS柱（250mm×4．6mm，10μm），甲醇-0．001mol／L磷酸氢二钠溶液（40：60）为流动相，检测波长为320nm，柱温40℃，流速1．0mL．min．采用导数色谱法鉴定了色谱峰纯度，并与中国药典收载的色谱条件进行了比较。结果：盐酸雷尼替丁在20～500μg·ml^-1范围内，峰面积与浓度的线性关系良好（r^2=0．9996）；平均回收率为100．15％，重现性试验RSD=0．41％（n=6）。与中国药典收载的色谱条件相比较，盐酸雷尼替丁与相邻杂质分离更完全。结论：所建立的方法简便、准确、重复性好，可作为盐酸雷尼替丁稳定性及降解动力学研究的含量测定方法。     

利用缺陷型单纯疱疹病毒载体在大鼠中枢神经系统…

本研究利用构建的Ｉ型单纯疱疹病毒（ＨＳＶ－１）扩增子质粒载体ｐＨＳＬ，在辅助病毒ＨＳＶ－１ｔｓＫ（许可温度３１℃）的辅助下，以首尾相连的连接全形成包装成复制缺陷型的ＨＳＶ－１假病毒颗粒，得到一种ＨＳＶ－１混合毒种ｄｖＨＳＬ。将ｄｖＨＳＬ接种体外培养的大鼠胚胎脊髓运动神经元和大脑皮质神经元后均可获得报告基因的表达；接种大鼠角膜后ｌａｃＺ基因三叉神经节中持续表达两个月；直接注射接种到大鼠前脑上质后，可     

含Ⅰ型单纯疱疹病毒包装信号序列片段的分离及扩增子质粒双表达载体的构建

利用基因工程技术分离出含有Ⅰ型单纯疱疹病毒（HSV－1）包装信号序列和HSV－1基因组复制起点序列的片段，表达外源基因所必需的启动子序列以及其下游作为报告基因的lacZ基因片段，构建成质粒型HSV－1载体pHSVL。用脂质体介导的方法可将该质粒转染入经辅助病毒HSV－1tsK株超感染的Vero细胞，并将其包装成HSV－1假型病毒颗粒，可如天然病毒一样再感染传代细胞和神经细胞并在其中进行基因表达。在pHSVL的基础上，我们还构建了一种可同时表达两种外源基因的质粒型疱疹病毒载体pHLCL，即在pHSVL中插入第二个转录单位：HCMVIE启动子和其下游的荧光素酶基因（lucgene），由此获得的pHLCL病毒接种传代细胞证明它可在其中同时表达两种报告基因．本研究成功地构建了两种质粒型HSV－1载体，其独特的基因转移方式使之在神经生理、病理及神经系统疾病的基因治疗的实验研究中都具有广阔的应用前景。