刺激隐核虫免疫学研究进展

刺激隐核虫病是海水鱼类养殖中的常见寄生虫病之一。本文综述了刺激隐核虫诱导鱼类发生免疫反应的类型、机制以及刺激隐核虫疫苗的研究现状,为通过免疫学方法预防该病提供了参考。     

恩诺沙星完全抗原的制备试验

目的制备恩诺沙星(EF)的完全抗原,进而为EF单克隆抗体检测试剂盒的研制奠定基础。方法将小分子的药物EF和鸡血清白蛋白(OVA)以及牛血清白蛋白(BSA)分别采用碳二亚胺法和活化酯法两种不同的偶联方法合成完全抗原,通过紫外特征光谱和抗血清效价对完全抗原的合成效果进行分析。结果2种不同的偶联方法均使OVA和BSA与EF偶联成功。偶联方法对于完全抗原的合成效果也存在差异,从紫外吸光率和偶联物结合比判断,OVA采用活化酯法效果好,未经EDA处理的OVA、活化酯法和碳二亚胺法合成的偶联物的结合比分别为10.3、20.7、16.5;而BSA采用碳二亚胺法效果好,未经EDA处理的BSA、活化酯法和碳二亚胺法合成的偶联物的结合比分别为20.5、24.6和30.8。血清效价检测发现,以BSA-EF为完全抗原的效价为25600,以OVA-EF为完全抗原的效价为6400,这表明完全抗原的合成是成功的。结论2种不同方法合成的OVA-EF和BSA-EF完全抗原,可以作为免疫原用于制备抗体以及检测时的包被原进行ELISA检测。     

嗜水气单胞菌毒力因子特性及作用机理研究进展

嗜水气单胞菌是一类广泛存在于水环境的常见菌,已成为人-兽-鱼共患病原菌。近年来,对其研究越来越多,对其毒力因子的研究,有利于深入了解其致病机理,探索药物和免疫防治的有效方法。本文综述了嗜水气单胞菌的毒力因子及其特性、致病机理等内容。     

嗜水气单胞菌气溶素的纯化及其溶血特性分析

目的用亲和纯化法纯化嗜水气单胞菌气溶素,从单因子水平分析嗜水气单胞菌的溶血特性。方法用嗜水气单胞菌气溶素单克隆抗体McAb3C12B11为配体制备亲和层析柱,甘氨酸洗脱以获得纯化的嗜水气单胞菌ZN1气溶素。获得的纯化气溶素分别与1%欧洲鳗鲡血红细胞、1%兔血红细胞、1%羊血红细胞进行溶血特性分析,并利用单克隆抗体McAb3C12B11进行溶血抑制试验。结果经亲和纯化获得分子量约为51.7kDa的气溶素,该气溶素能在Western-blotting反应中被嗜水气单胞菌ZN1胞外产物(ECPs)免疫血清和McAb3C12B11所识别。溶血试验证实亲和纯化的ZN1气溶素和ZN1ECPs对兔血红细胞、欧洲鳗血红细胞和绵羊血红细胞的溶血效价分别为5.12×104HU/mg、3.20×103HU/mg、6.40×103HU/mg和2.56×104HU/mg、1.28×104HU/mg、3.20×103HU/mg。溶血抑制试验结果表明:当红细胞为1%兔血红细胞时,McAb3C12B11对气溶素和ZN1ECPs的溶血抑制效价均为1∶211;当红血细胞为1%欧洲鳗血红细胞时,McAb3C12B11对气溶素的溶血抑制效价为1∶210,对ZN1ECPs的溶血抑制效价仅为1∶23。结论嗜水气单胞菌气溶素在单因子条件下与嗜水气单胞菌ECPs的溶血特性存在一定的差异,嗜水气单胞菌ZN1ECPs中存在多种溶血性毒素,这些毒素对不同宿主的溶血能力存在差异,同一嗜水气单胞菌菌株对不同的宿主起主要作用的溶血性毒素不同。     

中华鳖胰岛细胞分离及生物活性检测

目的 探讨中华鳖胰岛细胞分离、提取方法及对其功能评价,为临床胰岛移植探索一种新的供体来源.方法 采用胶原酶消化分离中华鳖胰岛细胞,在体外用不同浓度的葡萄糖刺激胰岛细胞,测定其生物学活性.结果中华鳖胰岛细胞在体外对不同浓度的葡萄糖刺激具有明确的生物学反应,并随着葡萄糖浓度的增加胰岛素的产生也相应增加.结论 采用胶原酶消化分离中华鳖胰岛细胞的方法可行,胰岛细胞在体外对不同浓度的葡萄糖刺激产生胰岛素并具有正相关,其为爬行纲与哺乳纲动物之间的胰岛细胞移植提供实验基础.     

环丙沙星单克隆抗体的制备及其免疫学特性分析

目的:制备环丙沙星单克隆抗体,并分析其免疫学特性,为建立环丙沙星残留的免疫学检测方法服务。方法:用人工抗原环丙沙星-小牛血清白蛋白偶联物免疫BALB/c小鼠,产生预期免疫应答后,将小鼠脾细胞与瘤细胞融合,经初筛、复筛和再克隆,筛选得到1C9、3F6、6H2、6A7、6G11和8F56株分泌环丙沙星单克隆抗体的杂交瘤细胞。对单克隆抗体的亚型、纯度、亲和力、灵敏度及特异性等免疫学特性进行鉴定和分析。结果:1C9、3F6和6A7的抗体亚型为IgG2a;6H2和8F5的抗体亚型为IgG1;6G11的抗体亚型为IgG3。SDS-PAGE电泳结果显示单抗蛋白重链分子量约为50kD,轻链分子量约为25kD。6株细胞产生的单抗均具有良好的特异性和灵敏度。其中,细胞株1C9细胞培养上清和腹水效价分别为1∶6.4×102和1∶5.6×105,亲和力常数可达2.85×109L/mol,IC50值可达245.86ng/ml,最低检测限为45.25ng/ml,对氧氟沙星、双氟沙星、沙拉沙星、左氧氟沙星、孔雀石绿、氯霉素、呋喃西林等药物几乎不存在交叉反应,与恩诺沙星存在交叉反应,交叉反应率为84.6%。结论:本方法制备的环丙沙星单克隆抗体具有较好的亲和力和特异性,可用于环丙沙星残留免疫学检测。