人乳头瘤病毒58型E6E7融合基因重组巨细胞病毒的构建及鉴定

目的 利用人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)58突变型E6E7(Mutant type E6E7,mE6E7)融合基因为靶点,巨细胞病毒株(Towne株)细菌人工染色体(SW102 Towne bacterial artificial chromosome,SW102-T-BAC)为载体,构建携带HPV58 mE6E7融合基因的重组病毒,探讨HPV58mE6E7的转化活性。方法 PCR扩增带有50 bp Towne 开放读码框(open reading frame,ORF)75左右同源臂的GalK、mE6E7及野生型E6E7(Wild type E6E7,wE6E7)融合基因片段,切胶回收纯化;将GalK片段电转到(SW102-T-BAC)感受态细胞,经过同源重组、GalK及氯霉素抗性筛选,获得SW102-T-ORF75-Galk-BAC克隆;然后分别将纯化的mE6E7及wE6E7电转到SW102-T-ORF75-Galk-BAC感受态细胞,经脱GalK及氯霉素抗性筛选,获得SW102-T-ORF75-mE6E7-BAC及SW102-T-ORF75-wE6E7-BAC克隆;提取所得克隆质粒DNA,转染ARPE-19细胞(以转染SW102-T-BAC的细胞及未转染细胞为对照),逆转录PCR及测序分析验证转染细胞中mE6E7及wE6E7的表达状况;观察重组病毒T-ORF75-mE6E7及T-ORF75-wE6E7对转染ARPE-19细胞的影响,通过软琼脂克隆分析mE6E7及wE6E7转化活性。结果 获得了SW102-T-ORF75-mE6E7-BAC及SW102-T-ORF75-wE6E7-BAC的克隆。逆转录PCR及测序分析验证转染细胞中mE6E7及wE6E7的表达正确。转染SW102-T-ORF75-wE6E7-BAC的细胞生长失去接触抑制,出现重叠生长现象,其形态由原来梭形变为变圆、肿胀、胞浆颗粒增多;并且在软琼脂中能够形成克隆;而转染SW102-T-ORF75-mE6E7-BAC、SW102-T-BAC及未转染细胞未出现上述细胞的特点。结论 获得了T-ORF75-mE6E7及T-ORF75-wE6E7重组病毒,并且重组病毒T-ORF75-mE6E7的转化活性已消除,为HPV58型治疗性疫苗的研究奠定了基础。     

FOXP3~+Treg在肿瘤患者外周血中的表达及意义

目的:探究肿瘤患者外周血中FOXP 3+T reg细胞的表达及意义。方法:收集肿瘤患者外周血,应用F ico ll密度梯度离心法获取PBM C;经免疫荧光及流式细胞术分析其中FOXP 3+T reg的表达。结果:肿瘤患者外周血中FOXP 3+T reg表达比例为(6.208±2.754)%,而对照组为(2.653±0.638)%。结论:肿瘤患者外周血中FOXP 3+T reg比例较对照组显著增高(P<0.01),提示患者免疫系统存在缺陷。     

激发性CD28单抗对肿瘤患者外周血FOXP3^＋Treg细胞的下调作用及意义

目的探究肿瘤患者外周血单个核细胞（PBMC）中FOXP3^＋Treg经CD28单抗激发后的改变及意义。方法采用腹水诱生法及免疫亲和层析法进行单抗的制备和纯化,Ficoll密度梯度离心法获取外周血PBMC,经激发性CD28单抗10μg／mL共培养后经免疫荧光及流式细胞术分析其中FOXP3^＋Treg的表达以及FOXP3^＋Fas^＋Treg和FOXP3^＋FasL^＋Treg的表达。结果免疫荧光和流式细胞术显示肿瘤患者外周血中FOXP3^＋Treg表达比例为（6．208±2．754）％,而对照组为（2．653±0．638）％。FOXP3^＋FasL^＋Treg细胞经CD28单抗活化后FasL表达上调为（7．252±2．23）％,而健康对照组为（7．96±2．938）％,FOXP3^＋Fas^＋Treg活化前后的比例分别为（1．467±0．590）％和（3．692±1．822）％。结论肿瘤患者外周血中PBMC经CD28单抗激发后FOXP3^＋Treg的比例下调（P〈0．01）,提示该抗体能够使肿瘤患者的免疫功能得到一定程度的恢复与提高。     

血管内皮生长因子-D、 微血管密度及微淋巴管密度的表达与乳腺癌临床病理特征的相关性

目的 探讨乳腺癌中血管内皮生长因子D(vascular endothelial growth factor-D,VEGF-D)及微血管密度(microvessel density,MVD)、微淋巴管密度(Lymphatic vessel density,MLD)表达情况及意义.方法 收集2009年1月至2016年5月在临沂市肿瘤医院病理科存档病例,其中乳腺癌61例,乳腺增生症23例.采用免疫组化法检测各组织VEGF-D、MVD和MLD表达.结果 乳腺癌组织中VEGF-D蛋白阳性率为62.30%,明显高于乳腺增生组织,差异有统计学意义(χ2=16.215,P<0.05);乳腺癌组织中MVD和MLD分别为(17.70±7.10)和(2.41±0.85),明显高于乳腺增生组织,差异有统计学意义(t=10.900、t=8.795,P<0.05);VEGF-D表达与乳腺癌患者年龄、肿瘤大小以及淋巴结转移无明显关系(χ2=0.394、0.032、0.244,P>0.05);MVD和MLD密度与乳腺癌患者年龄和肿瘤大小无明显差异(χ2=0.081,0.126,0.219,0.196,P>0.05);VEGF-D、MVD和MLD密度与乳腺癌组织学分级相关(χ2=13.076、23.892、10.082,P<0.05),随着组织学分级递增,VEGF-D、MVD和MLD密度明显增高;MVD和MLD在乳腺癌伴淋巴结转移中密度明显高于无淋巴结转移(t=2.481、5.791,P<0.05).结论 VEGF-D在乳腺癌组织中呈高表达,可能在乳腺癌的发生发展中起重要作用,而MVD和MLD与乳腺癌肿瘤分化、转移有一定的关系.     

外周血涂片 骨髓细胞形态 骨髓活检三者联合检查在骨髓增殖性疾病中的应用

<正>骨髓增殖性疾病(MPD)是以骨髓一系或多系髓系细胞持续增殖为特征的一组克隆性干细胞紊乱性疾病。广义的讲包括骨髓增生异常综合征(MDS),骨髓纤维化(MF)、真性红细胞增多症(PV)、原发性血小板增多症(ET)、慢性     

急性心肌梗死 PCI 术后主要不良心血管 事件的发生率及影响因素

〔摘 要〕 目的：探讨急性心肌梗死冠状动脉介入术（PCI）患者发生主要不良心血管事件风险以及危险因素。 方法：收 集 2019 年 6 月至 2022 年 6 月于安阳市第三人民医院诊治的行 PCI 的 98 例急性心肌梗死患者的临床资料,所有患者入院后 均行急诊 PCI,出院后进行门诊和电话随访,根据出院后 1 年内是否发生主要心脏不良事件将患者分为发生组（21 例）与 未发生组（77 例）,比较两组患者的一般资料和临床指标,对术后主要不良心血管事件的危险因素进行 logistic 回归分析。 结果：98 例患者中,共有 21 例出现主要不良心血管事件,发生率为 21.43 %。多因素 logistic 回归分析结果显示,年龄大、 合并糖尿病、有吸烟史及 LDL–C、BNP、cTnI、Lp(a) 水平高、血红蛋白含量低是急性心肌梗死 PCI 患者发生主要不良心血 管事件的危险因素（P ＜ 0.05）。 结论：急性心肌梗死 PCI 患者,其年龄、糖尿病、吸烟史、LDL–C、BNP、cTnI、Lp(a) 水平、血红蛋白均是发生主要不良心血管事件的危险因素,临床可据此采取相应的干预措施,降低发生风险。