肾上腺髓质素对豚鼠心室肌细胞L-型钙通道的作用及其信号转导机制

目的: 研究肾上腺髓质素( adrenomedullin, ADM)抑制豚鼠心室肌细胞L-型钙通道的信号转导机制。方法: 应用全细胞膜片钳技术,记录应用ADM(1-100 nmol·L^-1)前后L-型钙电流(I_Ca,L),以及分别记录应用ADM特异性受体拮抗剂ADM_22-52(100 nmol·L^-1)+ADM(100 nmol·L^-1)、蛋白激酶A (PKA) 特异性拮抗剂H-89(10 μmol·L^-1) + ADM(100 nmol·L^-1)、蛋白激酶C (PKC) 特异性拮抗剂PKC_19-36(10 μmol·L^-1)+ADM(100 nmol·L^-1)、PKC特异性激动剂PMA(1 μmol·L^-1)前后I_Ca,L。结果: ADM(1-100 nmol·L^-1)浓度依赖性地抑制豚鼠心室肌细胞I_Ca,L,并可被ADM_22-52(100 nmol·L^-1)完全阻断;H-89(10 μmol·L^-1)对ADM抑制I_Ca,L的作用无影响。PKC_19-36(10 μmol·L^-1)可完全阻断ADM 对I_Ca,L的抑制效应,且PMA(1 μmol·L^-1)可模拟ADM 对I_Ca,L的抑制效应。结论: ADM作用于特异性ADM受体可浓度依赖性地抑制豚鼠心室肌细胞I_Ca,L,此作用有可能与PKC激活相关。     

急性缺血对单个家兔窦房结起搏细胞自发性电活动的影响及雷诺定的干预作用

目的:观察急性缺血对窦房结(sino-atrial node,SAN)起搏细胞(pacemaker cells,PCs)自发性电活动的影响及肌浆网(sarcoplasmic reticulum,SR)钙释放特异性阻断剂雷诺定的干预作用,探讨SR钙释放在急性缺血诱导的心动过缓中的作用。方法:实验分为2组:非干预组(实验Ⅰ组),细胞先灌流正常台式液作为对照;记录自发性动作电位(action potential,APs)后,灌流缺血样台式液(低pH、无葡萄糖以及100%N2饱和)5~8 min模拟缺血;最后用正常台式液冲洗。雷诺定干预组(实验Ⅱ组)在灌流缺血样台式液5~8 min之前,先灌流40μmol/L雷诺定15 min,其他实验步骤同实验Ⅰ组。结果:实验Ⅰ组灌流缺血样台式液5~8 min后起搏频率(beating rate,BR)减慢13%(P<0.05),APs的超射值(overshoot,OS)增大 6 mV(P<0.01),APs时程(actionpotential duration,APD)延长44%(P<0.05),而最大舒张期电位(maxi mumdiastolic potential,MDP)无显著变化;实验Ⅱ组经雷诺定干预处理15 min后,BR减慢12%(P<0.05),灌流缺血样台氏液5~8 min后,BR进一步减慢23%(P<0.01),OS增大 5 mV(P<0.05),APD延长29%(P<0.05)。结论:5~8 min缺血可改变单个家兔SAN PCs自发性电活动,而雷诺定不能阻断该效应,提示SR钙释放可能在急性缺血诱导的家兔单个SANPCs起搏过缓中的作用不大。     

肿瘤坏死因子-α表达在大鼠心肌梗死后室性心律失常发生中的作用

目的:探讨大鼠心肌梗死(MI)后肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达在室性心律失常发生中的作用。方法:采用液氮冷冻法建立大鼠MI模型。将60只雄性大鼠随机分为3组:MI组(20只)、假手术组(Sham组,20只)和TNF-α螯合剂组(rhTNFR:Fc组,20只)。在MI模型建立30d后,运用程序电刺激方法,观察诱发室性心律失常的发生情况,同时用Western Blot和激光共聚焦显微镜检测TNF-α蛋白表达水平。结果:与Sham组比较,MI组大鼠心肌组织TNF-α表达显著增加(P0.05),室性心律失常诱发率亦明显增高(P0.05);与MI组比较,rhTNFR:Fc组TNF-α表达显著减少(P0.05),室性心律失常诱发率亦明显降低(P0.05)。结论:MI后大鼠心肌组织TNF-α表达明显增加,大量TNF-α表达与MI后室性心律失常的发生密切相关。     

心房颤动抗心律失常药物研究的新进展

心房颤动(房颤)是临床上最常见的心律失常,其发病率和病死率随着年龄的增长而显著增加.然而,目前抗心律失常药物的治疗效果仍不尽人意,并不能显著提高房颤患者的生存率,究其原因,大多数临床使用Ⅲ类抗心律失常药物(如索他洛尔、伊布利特)可阻断至少一种既表达在人类心房又表达在心室的复极钾电流(如快激活的延迟整流钾电流,IKr),从而延长心房/心室动作电位时程,虽可有效治疗房颤,但同时增加了长QT间期综合征、尖端扭转型室性心动过速(TdP)等发生风险.     

Role of voltage-gated potassium channels in pathogenesis of chronic pulmonary heart disease

The influence of hypoxia on the activity of voltage-gated potassium channel in pulmonary artery smooth muscle cells （PASMCs） of rats and its roles in the pathogenesis of chronic pulmonary heart disease were investigated. Eighty male Sprague-Dawley rats were randomly allocated into control group （n=10）, acute hypoxic group （n=10）, and chronic hypoxic groups （n=60）. The chronic hypoxic groups were randomly divided into 6 subgroups （n=10 each） according to the chronic hypoxic periods. The rats in the control group were kept in room air and those in acute hypoxic group in hypoxia envi- ronmental chamber for 8 h. The rats in chronic hypoxic subgroups were kept in hypoxia environmental chamber for 8 h per day for 5, 10, 15, 20, 25, and 30 days, respectively. The mean pulmonary arterial pressure （mPAP）, right ventricular hypertrophy index （RVHI）, and the current of voltage-gated potas- sium channel （IK） in PASMCs were measured. Results showed that both acute and chronic hypoxia could decrease the IK in PASMCs of rats and the I-V relationship downward shifted to the right. And the peak Ir density at ＋60mV decreased with prolongation of hypoxia exposure. No significant difference was noted in the density oflK （at ＋60 mV） and I-V relationship between control group and chronic hy- poxic subgroup exposed to hypoxia for 5 days （P〉0.05）, but there was a significant difference between control group and chronic hypoxic subgroup exposed to hypoxia for 10 days （P〈0.05）. Significant dif- ferences were noted in the IK density （at ＋60 mV） and I-V relationships between control group and chronic hypoxic subgroups exposed to hypoxia for 20 days and 30 days （P〈0.01）. Compared with con- trol rats, the mPAP and RVHI were significantly increased after chronic exposure to hypoxia for 10 days （P〈0.05）, which were further increased with prolongation of hypoxia exposure, and there were signifi- cant differences between control group and chronic hypoxic subgroups exposed to hypoxia for 20 days and 30 days （P〈0.01）. Both the mPAP and the RVHI were negatively correlated with the density OflK （r---0.89769 and -0.94476, respectively, both P〈0.01）. It is concluded that exposure to hypoxia may cause decreased activity of voltage-gated potassium channel, leading to hypoxia pulmonary vasocon- striction （HPV）. Sustained HPV may result in chronic pulmonary hypertension, even chronic pulmonary heart disease, contributing to the pathogenesis of chronic pulmonary heart disease.     

H2O2对大鼠肺动脉平滑肌细胞Kv通道的作用

 目的:观察H₂O₂在常氧时对大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）的Kv的影响, 探讨H₂O₂对肺动脉平滑肌细胞的Kv通道的作用。 方法:用酶解法急性分离单个PASMCs，以全细胞膜片钳技术记录PASMCs膜上的电压依赖性钾通道 (voltage-gated potassium channel, Kv) 电流。 结果:常氧下 H₂O₂可显著增加Kv电流，电流-电压关系曲线左上移；而且Kv电流呈浓度依赖性增加。 结论:常氧下H₂O₂ 可使Kv通道开放。     

阿司咪唑阻断HERG通道的生物学特性及分子机制

目的 观察阿司咪唑对野生型和Y652突变型HERG通道阻断的生物物理学特性,探讨HERG通道分子位点改变对阻断的影响.方法 将HERG通道表达于非洲爪蟾卵母细胞,利用双电极电压钳技术测量其电流,观察阿司咪唑不同浓度、不同电压、不同作用时间下,对野生型和Y652A、Y652R突变型HERG通道电流的阻断作用.结果 阿司咪唑以电压、浓度、时间依赖性阻断HERG通道电流;与野生型比较,Y652A和Y652R突变型可显著减弱阿司咪唑对HERG通道的阻断作用.结论 阿司咪唑优先阻断开放状态的HERG通道,Y652是阿司咪唑与通道结合的关键位点,其极性和侧链长度改变可影响阿司咪唑与通道结合.     

Kvβ1.3亚基显著影响DPO-1对表达在卵母细胞上的Kvl.5通道的阻断作用

目的:研究Kvβ1.3亚基和Kv1.5共表达时,对表达在非洲爪蟾卵母细胞的Kv1.5通道DPO-1的阻断作用的影响。方法:在非洲爪蟾卵母细胞上异源表达克隆Kv1.5及Kvβ1.3通道基因,用双电极电压钳技术记录全细胞电流,检测药物对Kv1.5通道及Kv1.5+Kvβ1.3共表达通道电流的影响。结果:DPO-1以电压、频率及浓度依赖方式抑制Kv1.5+Kvβ1.3共表达通道的电流。Kvβ1.3亚基存在时,DPO-1的阻断效应明显减弱,DPO-1阻断的IC50由(0.77士0.12)μmol/L显著增加至(47.21士5.18)μmol/L,增加了约60倍(P<0.01)。结论:Kvβ1.3亚基显著抑制DPO-1对表达在卵母细胞上的Kv1.5通道的阻断作用,但不改变其电压、频率及浓度依赖性,可能机制是Kvβ1.3亚基与DPO-1相互竞争Kv1.5孔区内部的某些结合位点。     

心力衰竭大鼠肿瘤坏死因子-α表达与室性心律失常关系的研究

目的:探讨心力衰竭(心衰)大鼠心肌组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达及其与室性心律失常发生的关系。方法:大鼠心衰模型由腹主动脉缩窄法构建并通过超声检测。运用S1S2程序刺激诱发室性心律失常(室性心动过速/心室颤动),记录各组室性心律失常诱发情况。运用免疫组化法和Western-blot法检测心肌组织TNF-α的表达。结果:与假手术组比较,心衰大鼠心肌组织TNF-α表达显著增加,室性心律失常发生率亦明显增高(P<0·05);而心衰大鼠经重组人TNF-α受体融合蛋白(rhTNFR:Fc)干预后心衰状况有所改善,TNF-α表达显著减少,室性心律失常发生率亦明显降低(P<0·05)。结论:心衰大鼠心肌组织TNF-α表达明显增加,大量TNF-α表达与心衰室性心律失常发生相关。