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目的建立有活性的蛋白激酶C受体1(RACK1)过表达和低表达人脐静脉内皮细胞系(HUVEC),为进一步从分子水平研究RACK1在心律失常中的作用机制提供有效手段。方法扩增RACK1基因的全长c DNA序列,并插入p IRES2-EGFP获得过表达载体p IRES2-EGFP-RACK1;同时,设计合成3对短发夹结构的互补DNA序列和一对阴性对照序列,亚克隆至p Genesil-1得到相应的干扰载体;脂质体转染法将重组体及相应的空质粒分别转染至HUVEC细胞,经G418筛选抗性细胞克隆,qRT-PCR及Western blot鉴定RACK1 mRNA和蛋白的表达。结果RACK1真核表达载体和RNA干扰载体构建成功。重组体经脂质体法转染HUVEC 48 h后,经G418筛选3周得到细胞抗性克隆,qRT-PCR及Western blot结果证实了过表达载体和干扰载体能有效的增强和沉默HUVEC细胞中RACK1的表达。结论成功建立了RACK1过表达和低表达HUVEC细胞系。 相似文献
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鉴于国内外治疗钩体病的常用抗菌药物尚存在一些问题。为了寻找治疗钩体病的新药和监测钩体对常用抗生素的敏感性,我们以8种抗菌药物青霉素G、氨苄青霉素、链霉素、庆大霉素、强力霉素、白霉素、利福喷丁及甲氧苄氨嚷啶,对国内临床常 相似文献
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