兔抗小鼠胚胎干细胞免疫血清对8-细胞胚胎发育的影响

目的 制备兔抗小鼠胚胎干细胞免疫血清,观察其对小鼠胚胎发育的影响。方法 用小鼠胚胎培养基稀释兔抗血清,分别稀释至50倍、100倍、200倍,用其对小鼠8-细胞胚胎进行培养,通过胚胎致密化、囊胚率、胚胎体外贴壁生长、细胞计数、胚胎移植和免疫荧光染色观察胚胎发育状况。 结果 形态学上50倍稀释的抗血清能够抑制8 细胞胚胎的发育甚至使其死亡;100倍稀释的抗血清能够延迟8 细胞胚胎的致密化,并使得胚胎在囊胚化过程中出现空泡化的现象;200倍稀释的抗血清作用不明显。未作免疫处理的兔血清与空白对照组差异不显著。100倍稀释的抗血清能够显著抑制囊胚内细胞团（ICM）的发育、囊胚细胞分布紊乱、胚胎细胞数目减少以及囊胚畸形率增加。虽然囊胚的碱性磷酸酶和Oct4均呈阳性,但经胚胎移植后都不能正常发育。 结论 兔抗小鼠胚胎干细胞免疫血清能够抑制小鼠胚胎致密化过程和囊胚内细胞团的发育,使囊胚出现空泡化,细胞分布紊乱,抑制胚胎着床。     

利用四倍体胚胎补偿法制备ES小鼠的技术方法

目的介绍四倍体胚胎补偿法制备ES小鼠技术的操作环节,加快该技术的推广应用。方法综合分析近几年来国内外在小鼠四倍体胚胎与ES细胞嵌合的研究成果,并结合我们自己的实验结果,分析影响ES小鼠制备的各种因素。结果四倍体胚胎不能正常发育至妊娠期末,通过四倍体胚胎与胚胎干（ES）细胞的嵌合可以得到完全由ES细胞发育而来的小鼠,即ES小鼠。同核移植小鼠相比,ES小鼠具有正常的形态、生理和神经特征。ES细胞和四倍体胚胎的遗传背景、ES细胞的生长状态、嵌合方法、培养基种类、体外培养环境、移植方法、继母母性等是影响ES小鼠生活力的重要因素。结论利用四倍体胚胎补偿法可以简便而快速地从遗传修饰的ES细胞获得突变体小鼠,为研究基因功能和构建人类疾病动物模型提供了一条有效途径。     

尿道会师手术治疗后尿道损伤187例

我院自1985年至1997年13年间共收治后尿道损伤198例,其中187例行尿道会师手术,治疗效果满意。本组患者均为男性,年龄最小11岁,最大70岁,平均年龄36.5岁。均因交通事故、工程塌方、坠落伤等明确的下腹及会阴部损伤所致。其中膜部尿道损伤167例,前列腺部尿道损伤31例。全组病例均伴有骨盆骨折或耻骨联合分离,伴有休克86例。其中四肢骨折19例,颅脑损伤10例,脾破裂8例,肝破裂5例,小肠破裂6例,膀胱破裂9例,多发肋骨骨折、血胸2例,直肠损伤1例,最多1例有3种不同复合伤。198例中,187例(94.4％)行尿道会师手术,在会师的基础上行前列腺被膜会阴部牵引28例(均为     

小鼠附植前胚在子宫内的迁移能力

目的观察小鼠附植前胚在子宫内的迁移能力。方法将CD-1小鼠受精卵、2-细胞胚、桑椹胚、囊胚、四倍体胚、孤雌活化胚等6种胚共1042枚单侧（右侧）移植CD-1假孕母鼠的输卵管或者子宫,观察移植胚在两侧子宫角内的附植情况。结果共得到45只妊娠鼠,在这45只鼠的右侧子宫角都有不同数目的着床胚,而仅在6只鼠的左侧子宫角发现了6枚着床胚。结论小鼠胚在子宫内的迁移能力非常有限,单侧移植的多个胚很少的机率迁移到另一侧子宫角内着床,不能进行胚均匀分布。     

小鼠4倍体胚胎诱导蜕膜化反应

目的 探讨小鼠囊胚内细胞团(ICM)在蜕膜化过程中是否具有调控作用.方法 采用电融合技术制备4倍体胚胎,作为内细胞团缺陷胚胎,通过输卵管胚胎移植制备4倍体胚胎诱导蜕膜组织,以正常2-细胞胚胎诱导的蜕膜组织作为对照,从着床位点和蜕膜形态对两组蜕膜进行比较分析后,采用高通量测序筛选两组中差异表达的微小RNA(miRNA),...     

空气诱导小鼠子宫内膜蜕膜化

目的 探讨空气对小鼠子宫内膜蜕膜化的诱导作用，建立非手术法小鼠子宫内膜蜕膜化诱导技术。 方法 利用小鼠非手术法胚胎移植器，通过子宫颈向30只假孕3.5 d小鼠单侧子宫角移植2 μl空气，诱导子宫内膜蜕膜化，观察蜕膜化子宫形态并测量其直径和重量，HE染色观察细胞形态，RT-PCR检测蜕膜化相关标记基因表达。 结果 移植空气诱导25只假孕小鼠出现不同程度的蜕膜化现象。与对照侧子宫角相比，空气移植侧子宫角明显肿大、增粗、增重，子宫内膜毛细血管通透性增加，蜕膜化标记基因环氧化物水解酶-2（COX-2）、泌乳素（Prl）3c1、Prl8a2等高表达，且细胞出现多核现象。 结论 利用非手术法子宫内移植空气可以高效诱导小鼠子宫内膜蜕膜化。     

四倍体胚胎发育阶段对胚胎干细胞嵌合体小鼠制备的影响

目的 探讨四倍体胚胎发育阶段对胚胎干细胞(ES)嵌合体小鼠制备的影响.方法 通过2-细胞胚胎电融合法制备四倍体胚胎,采用显微注射方法将ES细胞分别注入1-细胞、4-细胞、囊胚3个发育阶段的四倍体胚胎中.所用ES细胞分别为杂交系B6D2F1×129/Sv和近交系C57BL/6J,经胚胎移植和剖腹产以获得ES小鼠.结果 实...     

双侧副输精管1例报告

输精管畸形极少见,笔者在国内未见双侧副输精管的报道。我院在1990年大批量输精管结扎(男扎)手术中发现1例双侧副输精管畸形,现报告如下: 受术者,王××,男,35岁,农民,汉族。自愿施行输精管结扎术。体格检查;发育正常,营养中等,心肺无异常,肝脾肋下未触及。外生殖器发育正常,双侧输精管无粘连,在每侧整个精索部位的后侧皆可触及与输精管伴行、质地相等似输精管条状物,但较细,上至外环,下至附睾。常规备皮消毒、无菌巾单,用“针     

小鼠胚胎体外培养方法的改良

目的改进胚胎培养系统以进一步提高胚胎质量与发育潜能。方法采用内径0.21mm、外径0.28mm的塑料毛细管培养胚胎,将吸有胚胎的毛细管浸在盛有蒸馏水的烧杯内,再将烧杯放置在培养箱里的磁力搅拌器上,允许胚胎在微小的空间内发育并伴随着水的旋转而摆动,更好地模拟了胚胎在输卵管中的运动环境。结果分别对85枚、82枚2-细胞胚胎进行毛细管及微滴培养,其中毛细管培养胚胎的囊胚率以及胚胎细胞数(85.4%,57.0)显著高于微滴培养(36.5%,20.6),囊胚率差异显著(P0.05)。且接种在Matrigel基底膜上形成的内细胞团集落显著增大。结论小鼠胚胎体外培养方法的改良——毛细管培养,促进小鼠植入前胚胎的体外发育。     

超数排卵对小鼠妊娠建立的影响

目的 探讨超数排卵(超排)是否通过改变小鼠子宫内环境影响小鼠妊娠建立过程。方法 对比超排小鼠和自然交配小鼠着床妊娠情况，建立超排移植小鼠研究模型，在0.5 d将超排小鼠一侧输卵管结扎，2.5 d通过手术法向结扎侧子宫角移植正常囊胚，比较两侧子宫角的妊娠着床情况。通过组织切片和高通量测序方法对比超排假孕小鼠和正常假孕小鼠着床前子宫的差异，并进行生物学分析。结果 与正常小鼠相比，超排小鼠的妊娠率显著下降，超排组妊娠个体的平均着床数高于对照组。超排移植小鼠的对照侧与移植侧子宫角妊娠率之间差异不显著。超排假孕小鼠子宫内膜变薄，腺体数量减少。超排假孕和正常假孕小鼠着床前子宫的基因表达模式存在差异，显著差异基因1097个，其中上调基因752个，下调基因345个。生物信息学分析显示，差异基因在生物学过程中主要参与蜕膜化、对孕激素的反应、血管生成的正向调节等过程，主要富集在FoxO信号通路、细胞周期信号通路和类固醇生物合成信号通路上。结论 超数排卵处理影响了小鼠妊娠的建立，改变了小鼠着床前子宫容受性相关标志基因的表达。