人血红蛋白时间分辨荧光免疫分析试剂的研制及初步应用

目的建立人血红蛋白(Hb)时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)试剂,探讨在大便潜血(FOB)检测中的应用。方法采用固相双抗体夹心法建立检测Hb的TRFIA方法,并对该试剂的各项性能指标进行评价。结果自制试剂盒的最低检测量为0.8ng/mL或32ng(Hb)/g(粪便),线性范围为0.8～1000ng/mL或32～40000ng(Hb)/g(粪便)。分析内和分析间变异系数分别为3.4%～8.9%和5.2%～13.4%。与羊、鸡、牛、猪、兔、狗Hb不发生交叉反应。90份临床确诊标本用本试剂盒和胶体金免疫层析(GICA)试剂同时测试,TRFIA法的敏感性和特异性均为100%,GICA法的灵敏度和特异性分别为95.6%、100%。结论Hb-TRFIA试剂盒各项指标均达到临床检测要求,适用于临床上大便潜血Hb的检测。     

AFP/CEA双标记时间分辨荧光免疫分析试剂的研制及性能鉴定

目的研制甲胎蛋白（AFP）及癌胚抗原（CEA）的双标记时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）试剂,并鉴定其性能。方法将抗AFP单克隆抗体（E014）与抗CEA单克隆抗体（3E6）混合包被96孔板,用钐标记抗AFP单克隆抗体（E010）,铕标记抗CEA单克隆抗体（S001）,用双抗体夹心一步法建立AFP/CEA TRFIA试剂,测定其线性相关性、灵敏度、精密度、回收率、特异性,并与对应的单标记进口试剂进行比较。结果 AFP分析灵敏度为0.3 U/ml,线性范围为0.3~800 U/ml,平均回收率为99.8%,分析内和分析间变异系数分别为2.1%~5.8%、4.1%~8.7%;CEA分别为0.2 ng/ml、0.2~400 ng/ml、100.3%、2.4%~5.6%、4.8%~9.8%。该试剂与对应的单标记进口试剂的相关系数分别为0.99、0.98。结论成功研制了AFP/CEA双标记TRFIA试剂,其性能均达到临床检测要求,可替代国内外的单标记试剂。     

半枝莲总黄酮对非小细胞肺癌细胞增殖及迁移的影响

目的观察半枝莲总黄酮对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移及凋亡的影响并对其机制进行初步探索。方法体外培养非小细胞肺癌 A549细胞,分为阴性对照组、实验组、阳性对照组。阴性对照组用 1640培养液 200 μL处理细胞,实验组分别用 1, 5,10,20,40 μg/mL半枝莲总黄酮处理细胞 24 h,阳性对照组用 200 μL 40 μg/mL芦丁溶液处理细胞。采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法( MTT)观察细胞增殖情况;通过流式细胞术检测细胞凋亡情况;蛋白质印迹法( Western Blot)检测凋亡抑制蛋白 Survivin和促凋亡蛋白酶 Caspase?3蛋白的表达;迁移划痕实验检测迁移的情况。结果 MTT检测结果显示,阳性对照组的增殖抑制率为( 57.234±0.533)%,实验组的增殖抑制率分别为( 14.852±1.059)%、(23.486±1.366)%、(36.396±0.321)%、(46.179± 1.334)%和( 51.530±1.054)%,随浓度增加抑制率显著升高,呈浓度依赖( F＝1 408.303,P＜0.001);式细胞术检测细胞凋亡率,阴性对照组( 9.09±0.50)%、阳性对照组( 67.27±1.48)%、实验组分别为( 24.62±0.70)%、(34.67±0.46)%、(46.92±0.29)%、(55.67±0.57)%和( 59.29±0.73)%,实验组的细胞凋亡率均高于阴性对照组( F＝1 467.681,P＜0.001); Western Blot结果显示,实验组 Survivin蛋白表达均低于阴性对照组, Caspase?3蛋白表达均高于对照组( F＝34.176,P＜0.001;F＝57.730,P＜0.001);迁移划痕实验结果显示,半枝莲总黄酮抑制肺腺癌 A549细胞迁移并呈现剂量依赖性。结论半枝莲总黄酮可抑制人肺腺癌 A549细胞的增殖,可能与 Survivin蛋白降低和 Caspase?3蛋白表达量升高有关;另外,半枝莲总黄酮可抑制人肺腺癌 A549细胞的迁移。     

甲状腺素运载蛋白时间分辨免疫荧光试剂盒的制备和效能评价

目的制备甲状腺素运载蛋白(transthyretin,TTR)的时间分辨免疫荧光(time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA)试剂盒并对其性能进行评价。方法将抗TTR的4H2单克隆抗体作为包被抗体包被至96孔板,用Eu^3+标记3E4单克隆抗体作为检测抗体,制备双抗体夹心TRFIA试剂盒,应用该试剂盒对42例川崎病(Kawasaki disease,KD)患儿及13名健康儿童的血清进行检测,以稀释回收率、准确度、精密度、稳定性等指标对试剂盒的效能进行评价。结果该研究制备的TTR TRFIA试剂盒与Western blot法同时检测42份KD临床样本和13份健康样本,两方法的结果符合率为100%,特异性强。试剂盒的最低检出浓度为0.05μg/ml,稀释回收率为88.00%~111.00%,分析内精密度为8.01%~9.17%,分析间精密度为8.88%~11.82%。稳定性实验表明该试剂盒可在4℃稳定保存6个月,37℃稳定保存7 d。结论该研究制备的TTR TRFIA试剂盒具有准确性高、方便快捷等优点,适用于大批量临床KD血清样品的TTR检测,为快速区分丙种球蛋白敏感型和无反应型的KD患儿提供了方法。     

检测β⁃CTX和N⁃MID水平的双标记时间分辨免疫荧光分析方法的建立和评价

目的:研制一种检测β胶联降解产物(β-CTX)和骨钙素N端中分子片段(N-MID)水平的双标记时间分辨免疫荧光分析方法(TRFIA)并评价其检测性能.方法:将抗β-CTX和N-MID的4E5和2B7单克隆抗体(MAb)作为包被抗体包被在96孔培养板,采用铕离子(Eu3+)和钐离子(Sm3+)分别标记2G6和5A3 MA...     

人血红蛋白时间分辨荧光免疫分析试剂的研制及初步应用

目的建立人血红蛋白（Hb）时间分辨免疫荧光分析（TRFIA）试剂,探讨在大便潜血（FOB）检测中的应用。方法采用固相双抗体夹心法建立检测Hb的TRFIA方法,并对该试剂的各项性能指标进行评价。结果自制试剂盒的最低检测量为0．8ng／mL或32ng（Hb）／g（粪便）,线性范围为0．8—1000ng／mL或32—40000ng（Hb）／g（粪便）。分析内和分析间变异系数分别为3．4％-8．9％和5．2％-13．4％。与羊、鸡、牛、猪、兔、狗Hb不发生交叉反应。90份临床确诊标本用本试剂盒和胶体金免疫层析（GICA）试剂同时测试,TRFIA法的敏感性和特异性均为100％．GICA法的灵敏度和特异性分别为95．6％、100％。结论Hb—TRFIA试剂盒各项指标均达到临床检测要求,适用于临床上大便潜血Hb的检测。     

双标记AFP及Free-β-HCG时间分辨荧光免疫分析法的建立

目的：研制能同时检测人血清AFP和Free-β-HCG的双标记时间分辨荧光免疫分析（TrFIA）试剂盒。方法：铕（Eu3＋）标记抗AFP单克隆抗体,用钐（Sm3＋）标记抗Free-β-HCG单克隆抗体,采用双抗体夹心法建立AFP/Free-β-HCG双标记TrFIA试剂,对试剂的各项性能指标进行评价。结果：AFP分析灵敏度为0.1U/ml,分析内和分析间的精密度分别为1.2%～5.9%和2.8%～6.3%,检测试剂的测量范围为（0.1～500）U/ml;Free-β-HCG分析灵敏度为0.25ng/ml,分析内和分析间的精密度分别为1.5%～6.2%和3.5%～5.6%,检测试剂的测量范围为（0.25～200）ng/ml。孕妇血样用本试剂盒与进口的同类试剂盒同时检测,AFP和Free-β-HCG的相关系数分别为0.987、0.968,具有较好的一致性。结论：自制AFP/Free-β-HCG双标记TrFIA试剂盒的各项性能指标均能达到临床检测要求,可替代国外同类产品。     

游离雌三醇时间分辨免疫荧光分析法的建立

目的建立游离雌三醇（uE3）时间分辨免疫荧光分析（TRFIA）方法。方法采用竞争抑制一步法建立检测uE3的TRFIA分析方法,并对该试剂的各项性能指标进行评价。结果该方法的灵敏度为0．14nmol／L,线性范围为0．14—120nmol／L,回收率为97．7％。分析内和分析间变异系数分别为1．6％-4．1％和4．4％-8．8％。与E2、孕酮和睾酮的交叉反应率分别为0．24％、0．36％和0．40％。149份血样用本试剂与进口的同类试剂同时检测,其相关系数为0．925。结论试剂盒各项指标均达到临床检测要求,可替代国外同类产品试剂盒。     

三七总苷对肝癌细胞(QGY-7703)中mcl-1L和Bak基因表达水平的初步探索

目的:探讨三七总苷对肝癌细胞QGY-7703中mcl-1L基因与Bak基因表达水平的影响。方法:采用不同浓度三七总苷诱导肝癌细胞,通过实时荧光定量PCR检测mcl-1L基因与Bak基因的表达情况,同时采用流式细胞仪检测细胞凋亡的改变。结果:三七总苷作用后,肝癌细胞mcl-1L基因的表达受到明显抑制,而Bak基因的表达则出现明显上调,mcl-1L/Bak呈上升趋势,细胞增殖受到抑制。结论:三七总苷可能通过影响mcl-1L/Bak表达水平影响细胞凋亡。