用RT—PCR法分析合肥地区HCV基因型

应用逆转录－ＤＮＡ聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ），对合肥地区的１９５例病人的血清进行了ＨＣＶＲＮＡ检测及基因型分析。结果显示，８０例ＨＣＶＲＮＡ阳性标本中，７０例（８７．５％）为Ⅱ／１ｂ型ＨＣＶ感染，７例（８．８％）为Ⅲ／２ａ型，３例（３．７％）为Ⅱ和Ⅲ型混合感染，未发现Ⅰ／１ａ和Ⅳ／２ｂ型ＨＣＶ感染。     

呼吸道合胞病毒疫苗研究进展

呼吸道合胞病毒(RSV)是全球婴儿严重下呼吸道疾病最重要的病原体，发展其疫苗已被WHO列为全球最优先发展疫苗之一。目前RSV疫苗研究主要集中于亚单位疫苗、减毒活疫苗、DNA疫苗等。     

真核表达人呼吸道合胞病毒F蛋白的纯化方法

目的 真核表达人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus,SV)融合蛋白(fusion protein,),并完成蛋白纯化及纯度测定.方法 根据编码F蛋白的基因序列设计引物,CR方法扩增出3'端带His标签的F基因序列,克隆入pGEM-T-easy载体,经核酸序列分析后,进一步克隆到pcDNA3.1( )真核表达载体,限制性内切酶鉴定,用脂质体Lipofectamine2000转染COS-7细胞,2 h后再用Westem blot检测目的蛋白的表达.Ni柱亲和层析纯化COS-7细胞表达的F蛋白,高效毛细管电泳分析纯化后蛋白纯度.结果 核酸序列分析证实获得带His标签的RSV F基因序列,没有发生无义突变.转染COS-7细胞后,利用Western blot方法检测到F蛋白的特异性条带,纯度达99%以上.结论 初步建立了真核表达RSV F蛋白的纯化方法,为进一步优化RSV F蛋白制备条件及单克隆抗体及诊断试剂等研究奠定了基础.     

铅对儿童血液系统的损伤

铅是一种金属元素，也是一种古老的毒物，它广泛存在于自然界，也广泛应用于现代工业和人们的日常生活中。由于铅不可降解，在环境中可长期蓄积，并通过消化道、呼吸道等进入人体，对人体产生损害。儿童与成人相比，对铅的毒性作用更加易感。近期     

不同条件下CIM试验检测耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌的评价

目的评估不同底物、不同孵育时间下碳青霉烯类抑制法(CIM)对肠杆菌科细菌碳青霉烯酶表型筛选能力的差异。方法分别用亚胺培南、美罗培南、厄他培南作为指示底物对120株耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(CRE)进行CIM试验,再以美罗培南为指示底物,分别孵育0.5、1、2、4h进行CIM试验,并采用PCR及测序技术检测菌株是否携带碳青霉烯酶相关基因。结果碳青霉烯酶耐药基因PCR检测结果显示,120株CRE中,阳性93株,阴性27株。以亚胺培南作为底物,阳性95株,阴性25株;以美罗培南作为底物,阳性87株,阴性33株;以厄他培南作为底物,阳性68株,阴性52株。与PCR结果相比,三者的灵敏度分别是98.9%(92/93),90.3%(84/93),69.9%(65/93),差异有统计学意义(χ~2=18.43,P<0.01);三者的特异度均为88.9%(24/27)。3种底物的一致率分别为96.7%,90.0%,74.2%,Kappa值分别是0.90,0.73,0.44。在4个不同孵育时间下,灵敏度分别为46.2%(43/93)、58.1%(54/93)、90.3%(84/93)和90.3%(84/93),孵育2h和0.5、1h结果相比差异有统计学意义(χ~2=27.31,P<0.05)。结论亚胺培南、美罗培南CIM试验灵敏度和一致率均高于厄他培南,可作为合适的底物,同时2h为最佳孵育时间。     

黄芪联合抗结核药对肺结核合并糖尿病患者细胞免疫炎性反应、凝血功能的影响

目的观察黄芪联合抗结核药对肺结核合并糖尿病(PTB-DM)患者细胞免疫炎性反应、凝血功能的影响。方法将2016年1月—2017年12月中国人民解放军联勤保障部队第九八〇医院收治的80例PTB-DM患者患者随机分为对照组和观察组,每组40例。2组均给予常规四联抗结核治疗和胰岛素皮下注射,观察组在此基础上给予中药黄芪治疗,疗程为6个月。分别于治疗前后根据肺结核症状积分标准对患者咳嗽、咳痰、乏力、盗汗和食欲情况进行评分,观察2组治疗后痰液结核杆菌涂片转阴情况、空腹血糖(FPG)、细胞免疫指标(CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+及Th1、Th2细胞水平和Th17、Treg细胞表达率)、炎性指标[单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和转化生长因子-β(TGF-β)]、凝血指标[凝血酶原时间(APTT)、血浆凝血酶原时间(PT)、血浆凝血酶时间(TT)、血小板(Plt)、纤维蛋白原(FIB)和D-二聚体(D-D)]的变化,比较2组治疗期间不良反应发生情况。结果治疗后2组咳嗽、咳痰、乏力、盗汗和发热评分均明显降低(P均<0.05),且观察组均明显低于对照组(P均<0.05)。治疗2个月和6个月观察组痰涂片结核杆菌转阴率均明显高于对照组(P均<0.05)。治疗2个月、6个月2组FPG均明显降低(P均<0.05),且观察组在治疗6个月时明显低于对照组(P<0.05)。治疗后2组CD3+、CD4+、Th1和Th17水平和CD4+/CD8+均升高(P均<0.05),且观察组明显高于对照组(P均<0.05);2组Th2、Treg水平及MCP-1、IL-6、TNF-α、TGF-β均明显下降(P均<0.05),且观察组明显低于对照组(P均<0.05)。治疗后2组APTT、PT、TT均明显缩短(P均<0.05),Plt、FIB、D-D水平明显降低(P均<0.05),且观察组缩短及降低程度明显大于对照组(P均<0.05)。治疗期间观察组胃肠道反应、肝功能受损、皮疹和白细胞降低发生率均明显低于对照组(P均<0.05)。结论黄芪联合抗结核药可以有效改善PTB-DM患者的临床症状,提高痰涂片转阴率,且不良反应少,可能与改善患者的细胞免疫状态和凝血功能、减轻炎性反应有关。     

黄芪注射液辅助治疗肺结核合并糖尿病疗效及作用机制研究

目的:探讨黄芪注射液辅助治疗肺结核合并糖尿病患者的临床疗效及初步作用机制。方法:将肺结核合并糖尿病患者80例随机分为两组,两组均给予规范抗结核药物治疗,观察组在治疗基础上给予黄芪注射液,于强化期静脉滴注,继续期改为黄芪颗粒口服。记录两组治疗前后的病灶吸收情况,空洞变化情况; 比较治疗前后T淋巴细胞亚群; 血清中细胞因子IL-6、TNF-α、MCP-1的水平变化情况。结果:观察组病灶吸收有效率及空洞闭合率与对照组相比显著提高(P<0.05)。两组治疗后CD₃⁺、 CD₄⁺和CD₄⁺/CD₈⁺与治疗前相比均显著升高(P<0.05),两组治疗后相比均显著升高(P<0.05); 两组治疗后CD₈⁺与治疗前相比显著降低(P<0.05),两组治疗后相比无统计学差异(P>0.05)。两组细胞因子IL-6、TNF-α及MCP-1与治疗前相比显著降低(P<0.05),两组治疗后相比均显著降低(P<0.05)。结论:黄芪注射液辅助治疗肺结核合并糖尿病具有显著疗效,可提高患者免疫功能; 改善患者炎症损伤状态; 降低IL-6水平,抑制Th1/Th2漂移,促进Th1/Th2平衡,从而发挥疗效。     

增强型绿色荧光蛋白真核表达载体的构建和表达

目的　构建增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein, EGFP)编码基因的真核表达载体 pcDNA3.1(+) GFP,并观察其在Hep 2细胞中的表达情况。　方法　据已知的EGFP基因序列,设计合成 1 对引物,并引入Hind Ⅲ和EcoR Ⅴ酶切位点。应用PCR技术,从含有 EGFP的 pAdTrack CMV中扩增 EGFP编码基因。通过 TA连接将其克隆入pGEM T easy载体,经PCR及限制性内切酶鉴定后,插入真核表达质粒pcDNA3.1(+)中,转化Esche richia coli DH5α感受态细胞,于Amp+ LB平板上筛选阳性克隆。重组子经 Hind Ⅲ和EcoRⅤ双酶切、PCR鉴定,将该载体转染人喉癌细胞 Hep 2 后 48 h观察 EGFP表达情况。　结果　成功构建了含 EGFP 编码基因的真核表达载体pcDNA3.1(+) GFP,并成功转染Hep 2细胞,在倒置荧光显微镜下呈现绿色光。　结论　获得可产生绿色荧光的 EG FP,能方便地用作报告基因和筛选标记。     

肝癌高危险人群口服左旋咪唑预防

扶绥县是全国肝癌高发区之一。1978～82年年均标化死亡率为56.53/10万。其中一些肝大、肝病患者和肝癌高发家庭的肝癌发病率更高为331.3/10万。HBsAg携带者为649.35/10万。因此,我们在1976年底开始对上述高危险人群进行药物预防。经过三年的随访观察,发现左旋咪唑有一定的预防效果。于1981年6月开始,在该县八个高发大队(年均死亡率为92.25～103.54/10万)重新设计,再次进行实验研究。现经三年的随访复查,说明左旋咪唑确有降低肝癌发病率的作用。     

DNA分子杂交检测肝癌病人血清及其肝组织中HBVDNA的应用研究

本文采用目前国内较先进的DNA分子杂交技术,使用~(32)P探针检测92例肝癌病人血清、92例对照病人血清及4例肝癌病人肝组织中的HBVDNA,从分子水平来探讨肝炎与肝癌的关系.肝癌病人血清中HBVDNA的检出率为23.91%,对照病人血清仅4.35%,两组比较P<0.01,差异显著.4例肝组织中HBVDNA检出1例.HBVDNA在肝癌病人血清和肝组织中检出,证明HBVDNA已整合于病人肝细胞中,HBV感染作为肝癌病因之一更加明朗.