烟雾染毒下血管平滑肌细胞和内皮细胞中p-c-jun与细胞周期蛋白D1的表达

目的探讨香烟烟雾对血管壁组织中的两种主要细胞:血管平滑肌细胞和血管内皮细胞增殖活力的影响。方法应用磷酸盐缓冲液(PBS)作为溶剂萃取香烟烟雾,制备烟雾萃取剂。用此烟雾萃取剂依据不同浓度对以上两种细胞进行染毒处理,CCK-8试剂盒测定细胞增殖活力,Western blot检测转录因子c-jun、细胞周期蛋白D1(cyclinD1)的变化,转染过表达c-jun质粒检测cyclinD1的变化。结果 CCK-8检测显示在烟雾染毒浓度(0.625%～10%)范围内,平滑肌细胞增殖活力增加,内皮细胞在染毒处理后随浓度增加其活力降低。染毒处理48 h后,平滑肌细胞和内皮细胞的染毒处理组的c-jun表达与PBS对照组相比差异均无统计学意义,平滑肌细胞染毒组的p-c-jun比PBS对照组明显增加(P<0.05),内皮细胞染毒组的p-c-jun降低(P<0.05)。细胞周期蛋白cyclinD1在平滑肌细胞染毒处理后明显增加(P<0.05),内皮细胞染毒后则显著降低(P<0.05),并且过表达c-jun后cyclinD1的表达水平也相应增高。结论烟雾染毒具有增加血管平滑肌细胞增殖活力和降低内皮细胞活力的作用,其与c-jun磷酸化和cyclinD1表达有关。     

B细胞淋巴瘤/白血病-xL重组腺病毒的构建及其功能鉴定

目的 构建携带目的基因B细胞淋巴瘤/白血病-xL (bcl-xL)的重组腺病毒并鉴定其功能.方法 构建重组腺病毒pAdxsi-GFP-bcl-xL并体外感染人脐静脉内皮细胞,检测目的蛋白表达及氧化应激下细胞凋亡.结果 重组腺病毒pAdxsi-GFP-bcl-xL构建成功,感染人脐静脉内皮细胞后可成功表达目的蛋白bcl-xL,膜联蛋白V/异硫氰酸荧光素(Annexin V/FITC)荧光染色及碘化丙锭(PI)染色结果提示,在氧化应激下,重组腺病毒感染组早期及中晚期细胞凋亡率均较对照组(H2O2组)显著降低,两组早、中晚期凋亡率分别为(3.7±0.2)％、(10.3±0.5)％(P＜0.01)及(6.8±1.3)％、(18.3±2.8)％(P＜0.05).结论 成功构建重组腺病毒pAdxsi-GFP-bcl-xL,它可显著降低氧化应激介导的血管内皮细胞凋亡.     

抗delta-like-1单克隆抗体的制备与鉴定

目的 制备抗delta-like-1的单克隆抗体并鉴定其特异性.方法 用delta-like-1多肽-BSA蛋白复合物作为免疫原免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,经多次筛选及克隆化,建立可以稳定分泌抗delta-like-1单抗的杂交瘤细胞株.用ELISA、Western blot、细胞免疫组化对此抗体特性进行鉴定.结果 筛选到两株能稳定分泌抗delta-like-1单抗的细胞株3H11C11A9E3和2D5D11F8F1,亚类鉴定两株均为IgG1,轻链为kappa链;ELISA法测定两株细胞腹水抗体效价分别为1∶4.096×105和1∶1.024×105,抗体亲和常数分别为3.98×107、3.28 × 107L·mol-1;Western blot显示此单抗能特异性识别神经胶质瘤细胞株U251中的天然delta-like-1蛋白;细胞免疫组化进一步显示delta-like-1分布于细胞核中.结论 成功制备了抗delta-like-1单克隆抗体,可为研究delta-like-1与脑胶质瘤等神经系统疾病的关系奠定基础.     

巨噬细胞增强H2O2抑制人血管内皮细胞和兔血管平滑肌细胞的增殖

目的探讨H2O2处理对巨噬细胞分泌因子的影响,及对血管内皮细胞(VEC)及平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响。方法实验分组:空白对照组,0.5 mmol/L H2O2组,巨噬细胞条件培养基组,巨噬细胞+0.5 mmol/L H2O2条件培养基组。CCK-8测定VEC和VSMC的增殖情况。ELISA检测白介素-6(IL-6)、白介素-10(IL-10)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α),以及血管内皮细胞生长因子(VEGF)。Western blot检测增殖核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白cyclinD1的表达,以及血管内皮细胞内皮源性一氧化氮合酶(eNOS)的表达。结果 VEC中其他3个处理组的增殖水平均低于对照组(P<0.05),而在VSMC中,巨噬细胞组的增殖水平高于空白对照组(P<0.05)。在VEC和VSMC中,巨噬细胞+0.5 mmol/L H2O2组的增殖水平均高于单独0.5 mmol/L H2O2处理组(P<0.05),且低于单独巨噬细胞处理组(P<0.05)。巨噬细胞分泌的IL-6、IL-10、MCP-1随时间和H2O2的浓度增加而增高(P<0.05)。VEC分泌的VEGF在1.0 mmol/L H2O2浓度时有明显增高(P<0.05)。结论氧化应激处理可影响巨噬细胞炎性因子的分泌,进而影响血管内皮细胞和平滑肌细胞的增殖。