外科发热患者静脉血中大肠埃希菌DNA实时定量PCR检测与体征及血细胞计数的相关性

目的 定量检测外科发热患者静脉血中大肠埃希菌DNA含量，研究其与体征及皿细胞计数之间的相关性，并比较不同检测方法对血中大肠埃希菌的阳性检出率的差异。方法 以实时定量PCR（RQ-PCR）定量检测40份健康人静脉血标本，确定临床阳性检测限。31例发热患者共72份血标本同时进行常规细菌培养及大肠埃希菌DNA定量检测，比较两种检测方法对血中大肠埃希菌的阳性检出率的差异，两个取血时间点间大肠埃希菌DNA含量的变化，并计算大肠埃希菌DNA含量与体温、心率、白细胞计数、中性粒细胞及淋巴细胞百分比之间的相关性。结果 RQ-PCR定量检测大肠埃希菌DNA阳性率为52．78％（38／72），显著高于细菌培养阳性率2．78％（2／72）（P=0．000）。同一患者两个时间点血标本检测结果显示，静脉血中大肠埃希菌DNA在2～6小时内的升降变化达10～20倍。血中大肠埃希菌DNA含量与体温和心率之间均显著相关（P=0．000），相关程度中度密切（，值分别为0．565和0．546），与白细胞计数、中性粒细胞及淋巴细胞百分比之间无显著相关关系。结论 RQ-PCR检测外科发热患者静脉血中大肠埃希菌阳性率远高于血培养。血中大肠埃希菌DNA拷贝数变化速度较快。血细胞计数不能很好反映血中大肠埃希菌的含量，而体温心率的影响因素较多，因此RQ-PCR能更及时准确反映大肠埃希菌血症的严重程度，有助于对肠屏障损伤导致肠道细菌移位的动态程度或后果进行评估。     

实时定量PCR在细菌移位研究中的潜力

实时定量PCR（RQ-PCR）是一种新型核酸定量技术,具有实时监测、快速、灵敏、精确、特异等特点.与原有PCR技术相比,其最主要的优势是能对待测样本起始PCR反应模板进行准确定量,扩大了PCR的应用范围.目前在细菌移位研究中,对肠黏膜屏障损伤的早期诊断一直没有很理想的方法.RQ-PCR能准确定量外周血中细菌DNA,有利于对肠黏膜屏障损伤的早期诊断和损伤程度评估.     

实时定量PCR检测大肠埃希菌在LB培养基和血中对抗生素的药物敏感性

目的 建立以实时定量PCR快速检测大肠埃希菌在LB液体培养基和健康人全血中对抗生素药物敏感性的方法。方法 临床血培养获得大肠埃希菌株，以常规纸片法检测其对抗生素的药物敏感性。分别在LB液体培养基和健康人新鲜全血中加入该大肠埃希菌至终浓度为0．5麦氏单位，采用不加抗生素的标本作为生长对照组，加入耐受或敏感的抗生素的标本作为耐受药物组或敏感药物组，37℃震荡培养，分别提取0、1、2、3、4小时的基因组DNA，以大肠埃希菌特异β-右旋半乳糖苷酶基因的引物和TaqMan探针，对标本进行实时定量PCR检测。结果 实时定量PCR方法有较好的重复性（CT值变异系数0．26％～1．56％）和精确度（大肠埃希菌DNA提取效率在LB培养基中为43．6％，在血中为26．7％），标准曲线线性关系好（R^2≥0．998）。培养1～3小时后，耐受药物组与生长对照组的大肠埃希菌DNA拷贝数均呈对数增长，在LB液体培养基中增至约19～120倍，在新鲜全血中增至约6～11倍；敏感药物组大肠埃希菌DNA拷贝数呈减少趋势，在LB液体培养基中减至0．22～0．12倍，在新鲜全血中为1．29～0．14倍。上述药敏结果与常规纸片法一致。结论 采用实时定量PCR检测大肠埃希菌在LB液体培养基和健康人全血中对抗生素的药物敏感性，结果与常规纸片法一致，但更快速。     

Hb、Alb及PLR与壶腹周围癌患者胰十二指肠切除术后并发症及临床预后的关系分析

目的 分析血红蛋白(Hb)、白蛋白(Alb)、血小板与淋巴细胞比值(PLR)与壶腹周围癌(VPC)患者胰十二指肠切除术(PD)术后并发症及临床预后的关系。方法 选取2019年1月—2022年1月徐州市肿瘤医院肝胆胰外科行PD治疗的VPC患者102例为研究对象。术后根据是否发生并发症分为发生组38例和未发生组64例,同时对所有患者均随访1年(失访3例),根据随访结果将患者分为预后不良亚组35例和预后良好亚组64例,比较各组患者Hb、Alb、PLR水平。采用Spearman相关性分析VPC患者Hb、Alb、PLR水平与术后并发症、预后的相关性;Logistic回归分析影响行PD治疗的VPC患者预后的危险因素;绘制受试者工作特征曲线(ROC)分析Hb、Alb、PLR水平对患者预后不良的预测价值。结果 发生组患者Hb、Alb水平低于未发生组,PLR水平高于未发生组(t/P=6.454/<0.001、20.333/<0.001、30.371/<0.001);预后不良亚组患者Hb、Alb水平低于预后良好亚组,PLR水平高于预后良好亚组(t/P=11.701/<0.001、2...     

实时定量PCR检测外科发热患者静脉血中大肠杆菌DNA的方法

目的建立实时定量PCR(RQPCR)检测大肠杆菌DNA的方法,评估临床标本检测效果。方法选择大肠杆菌β右旋半乳糖苷酶基因作为检测靶基因设计引物和探针,采用HighPurePCRTemplatePreparationKit提取基因组DNA,建立20μlTaqMan探针RQPCR反应体系。对26份外科发热患者标本(血标本20份,腹腔引流液3份,胸水2份,胆汁1份)进行荧光RQPCR检测。结果引物和探针特异性好,标准曲线相关系数在0.991～0.999之间。在最低检测限(102拷贝/反应体系)以上,仪器对不同含量大肠杆菌样本检测的平均准确性为(112.19±7.48)%;批内及批间重复性平均变异系数(CV)分别为(16.33±4.80)%和(16.03±7.80)%。血标本中大肠杆菌DNA平均提取效率为(38.40±14.05)%,提取效率平均CV为(20.57±16.92)%。含有同等量大肠杆菌模拟标本存放在-20℃或-70℃6个月内,大肠杆菌DNA拷贝数差异无显著性(P=0.130)。外科发热患者血中大肠杆菌阳性率高达30%,最高含量约为1.24×106个/ml;另外在胆汁及腹腔引流液标本中检测出的大肠杆菌DNA含量明显高于相同患者血中含量。结论RQPCR是一种快速、灵敏、特异、重复性好、能定量起始模板拷贝数的检测大肠杆菌DNA方法,可用于定量检测全血及其他体液标本中大肠杆菌含量。