采用简并引物克隆葎草花粉过敏原全长同源cDNA

目的：建立一套稳定可靠的方法，对过敏原性物种中的过敏原同源基因进行快速克隆。方法：在分析生物信息数据库中积累的大量过敏原序列同源性的基础上，设计简并引物，基于高质量Lǘ草花粉RNA，逆转录合成cDNA。采用Touchdown方式在cDNA池中进行选择性PCR扩增。同时借助梯度PCR程序，对引物扩增的简并性作进一步强化，并结合RACE技术获取全长cDNA．进而对Lǘ草花粉中的过敏原同源基因进行克隆。结果：成功地获得3个全长cDNA克隆。序列分析显示．这些基因与已知过敏原的基因序列相似性高达79％-85％，初步认定其为泛过敏原肌球蛋白抑制蛋白(profilin)的同源基因。对比RACE技术获得的相应基因的全长序列发现，这些序列在引物结合处与简并引物序列之间存在4个碱基的差异，提示采用Touchdown方式的梯度PCR程序．可使引物的简并性得到进一步扩展。结论：简并引物与Touchdown梯度PCR相结合的方法．能够对以Lǘ草为代表的基因组未曾深入研究的物种中的过敏原同源基因进行有效克隆.     

洛伐他汀最新研究进展

此文综述了洛伐他汀最新研究概况,并对利用基因工程技术提高洛伐他汀产率的研究现状及发展趋势进行了论述,为进一步研究洛伐他汀提供了参考。     

食入性过敏原-杏仁蛋白组分的双向电泳分析

目的 :应用蛋白质双向电泳的分析技术 ,对一种主要的食入性过敏原杏仁果实的蛋白质组分进行分析。方法 :通过三氯乙酸法提取杏仁果实总蛋白质 ,通过等电聚焦和第 2向SDS PAGE分析获得完整的杏仁果实全蛋白质的图谱 ,并应用相应分析软件 (ImageMaster 2D)对电泳图谱进行分析。结果 :通过等电聚焦和第 2向SDS PAGE ,有 188个不同的蛋白质组分被检测出来。其中大约 2 8%的蛋白质等电点 (pI)在 4 .5～ 5 .5之间 ,大约 6 2 %的蛋白质的相对分子质量 (Mr)在 (2 0～ 2 5 )× 10 3 之间。结论 :所获得的高分辨率的双向电泳图谱 ,是我国杏仁果实蛋白质第一张完整的蛋白质图谱 ,为今后杏仁果实中致敏蛋白质的检测 ,分离、基因克隆和变应原的标准化奠定了基础。