排序方式: 共有61条查询结果,搜索用时 125 毫秒
1.
探查乳腺肿瘤组织中Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)的表达,并比较乳腺恶性肿瘤组织与良性纤继腺瘤及正常组织中PAI-1的差异。用免疫组织化学和原位杂交的方法,确定了乳腺癌、乳腺纤维腺瘤及瘤旁正常组织中PAI-1的分布;用发色底物法检测组织提取液中PAI-1的活性;用图象分析的方法对组织切片上的PAI-1进行灰度定量。结果:PAI-1主要分布在乳腺正常腺上皮细胞、瘤上皮细胞和腺癌细胞的胞浆中,但恶性组织中的成纤维细胞、巨噬细胞以及癌旁纤维组织也有染色。癌组织中PAI-1的活性(P<0.001)和含量(P<0.005)均高于良性乳腺纤维腺瘤及瘤旁正常组织。结论:PAI-1在乳腺恶性肿瘤组织中明显升高,PAI-1的检测可能为临床乳腺肿瘤的诊断、预后提供新的指标。 相似文献
2.
Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)是一种Mr为50×103的单链糖蛋白,有379个氨基酸残基,3个N型糖基化位点。构建PAI-1糖基化突变体,以便研究糖链的功能。用寡核苷酸定位突变技术将3个糖基化位点209,265,329位进行突变,把3个糖基化位点都发生了突变的PAI-1cDNA组装到真核表达载体pSV2中,得到真核表达质粒pZH-p1-M3E;在二氢叶酸还原酶缺陷型中国仓鼠卵巢细胞(CHOdhfr-)中进行短暂表达,用发色底物法和夹心ELISA方法检测培养液中PAI-1的活性和含量。结果:糖基化位点突变的PAI-1能在CHO细胞中表达,但表达水平及活性较低。非糖基化PAI-1的活性和抗原分别为4.34IU/ml和3.15μg/L结论:用寡核苷酸定位突变方法获得了PAI-1糖基化突变体,并且在CHO细胞中得到表达。 相似文献
3.
目的:检测IgG受体(FcγR)在炎症细胞因子刺激的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)上的表达。方法:采用ELISA、免疫组化染色法、免疫荧光法和RT-PCR等方法,检测FcγRII及其表达。结果:未经细胞因子刺激的正常HU-VEC可表达低水平的FcγRIIa;经2×105U/L TNF-α和1×105U/L IFN-γ联合刺激3d后,FcγRIIa的表达提高16倍(P<0.01)。免疫荧光法检测显示,TNF-α和IFN-γ诱导的FcγRIIa表达于HUVEC表面。RT-PCR结果显示,FcγRIIamRNA表达量在TNF-α和IFN-γ刺激24h后有明显提高。结论:TNF-α和IFN-γ可通过调节FcγRIIa的转录和翻译,增强其在HUVEC上的表达。FcγRIIa的表达可能与血管炎条件下,免疫复合物在血管上的特异性定位有关。 相似文献
4.
目的构建PAI-2ΔCD突变体基因,实现在大肠杆菌中的表达并建立重组人PAI-2ΔCD的分离纯化方法。方法用PCR扩增PAI-2ΔCD基因,经限制性内切酶片段分析及核苷酸序列分析后,突变体基因与原核表达载体pLY-4重组并转化蛋白酶缺陷型菌株JF1125。经温度诱导表达,表达产物用SDS-PAGE,Western印迹法和纤溶抑制活性测定等方法鉴定。工程菌发酵后,经高压匀浆破菌,用离子交换、疏水性色谱和分子筛进行分离。结果经温度诱导表达,SDS-PAGE证实在相应相对分子质量处出现表达条带,约占全菌总蛋白的15%。Western印迹法证实表达产物具有PAI-2免疫原性,溶圈抑制法及翻转板法证实表达产物具有纤溶抑制活性。5L发酵菌液可得湿菌约100g,经多步纯化后,每升发酵菌液可得纯度达97%的PAI-2ΔCD约36mg,比活性为28640AIU/mg。结论成功构建了PAI-2ΔCD突变体,实现了在大肠杆菌中的表达,并成功地分离纯化了重组人PAI-2ΔCD蛋白。 相似文献
5.
目的研究不同转移潜能人肝癌细胞系中酪氨酸磷酸化蛋白质表达的差异并筛查与肝癌转移相关的酪氨酸磷酸化蛋白质分子。方法应用双电泳(2-D E)、免疫印迹法及基质辅助激光解析电离飞行时间质谱分析,对三种不同转移潜能人肝癌细胞系Hep 3B、MHCC97L和MHCC97H进行酪氨酸磷酸化蛋白质组分析。结果对照2-DE胶和免疫印迹发光胶片,Hep3B检测到10个点,MHCC 9 7L检测到19个点, MHCC97H检测到17个点。经质谱鉴定,得到膜连蛋白Ⅰ等19个差异点。结论细胞内酪氨酸磷酸化蛋白的表达差异与肝癌的侵袭转移有关。 相似文献
6.
磷酸化蛋白质的检测技术进展 总被引:1,自引:0,他引:1
蛋白质的可逆磷酸化修饰是生物体内普遍存在的信息转导调节方式,几乎参与生命活动的所有过程。现分析磷酸化蛋白质的各种方法及其进展,尤其是近年来蛋白质组学技术的发展与应用为磷酸化蛋白质的定性、定量和功能研究提供了必要的技术,使大规模和系统性进行磷酸化蛋白质的研究成为可能。 相似文献
7.
本文采用K-ELISA比较数种日本血吸虫抗原和慢性血吸虫病患者血清内相应抗体的活性。以3例确诊患者的混合血清为标准血清,测得JAMAMA、SEA、JEU、JEC_1、JEC_2和JEC_3的抗原活性依次为2.0,8.0,4.0,4.0,5.0和10.0(ΔA460min×10~(-2)),以JEC_3的抗原活性为最高。30例慢血患者治疗前后血清中各相应抗体活性:JAMA为8.1±0.3和3.0±0.2(12例);SEA为12.8±0.3和9.0±2.0(12例);JEU为6.2±0.6和3.8±0.4;JEC为6.8±0.6和4,8±0.4;JEC_3为11.7±0.8和2.1±0.4 ΔA46O/min×10~(-2);正常人(16名)的相应抗体为0.7±0.7: 1.5±0.5;2.8±0.6;1.8±0.2与2.0±0.4。检测结果提示JEC_3可能是较好的诊断用抗原,K-ELISA可同时测定抗原和抗体活性且结果准确,似为一较好的实验方法。 相似文献
8.
9.
10.
目的 分析人肺巨细胞癌高、低转移株中uPA基因启动子序列差异和这种差异对启动子活性的影响。方法 用PCR分段扩增人肺巨细胞癌高 (95D)和低 (95C)转移细胞株中uPA基因启动子序列 ,将uPA启动子亚克隆到荧光素酶为报告基因的 pGL3 Basic载体上 ,转染 95D或 95C细胞 ,分析启动子活性。 结果 95D与 95C细胞uPA基因启动子序列中有 3个位点碱基的差别 ,95D分别是 - 1933bp为“T” ,- 4 2 4bp为“C” ,- 96bp为“G” ,而 95C分别为“C”、“T”、“T”。这些不同对启动子活性的影响未见差别。在 - 2 14 3/ - 182 4之间存在uPA基因启动子的增强子序列 ,在 - 182 4 / - 4 0 8之间存在uPA启动子的负性调控序列。结论 uPA在 95D与 95C细胞中表达的差别不是直接由于启动子序列差别引起的 ,而可能是由于两种细胞中存在转录因子量的差别 相似文献