β-内酰胺类抗生素药物促进红细胞的老化清除可能会恶化药物诱发的免疫溶血性贫血

目的 通过体外实验检测药物处理红细胞前后,细胞表面各种与细胞衰老及清除相关指标,以及吞噬细胞对红细胞的吞噬差异性,分析β-内酰胺类抗生素对红细胞老化和清除的影响。方法 使用β-内酰胺类抗生素(青霉素、头孢吡肟、头孢哌酮和头孢他啶)处理红细胞,然后在药物处理后0 h和24 h时通过流式细胞仪检测红细胞表面PS(磷脂酰丝氨酸)和清除相关CD标志物(CD35、CD47、CD55和CD59)的变化。通过显微镜观察,计算在药物处理后0 h和24 h棘细胞比例。通过单核细胞单层测定(MMA)检测药物处理后的红细胞被吞噬的情况。通过以上结果分析β-内酰胺类抗生素对红细胞老化和清除的影响。结果 与未处理的红细胞相比,药物处理的红细胞在细胞表面显示出更高的PS水平(0 h vs 24 h:青霉素9.42%vs 93.30%、头孢吡肟3.88%vs 57.27%、头孢哌酮4.71%vs 75.75%和头孢他啶3.05%vs 43.19%,),以及棘细胞比率(0 h vs 24 h:青霉素7.33%vs 86%,头孢吡肟2.67%vs 52.67%,头孢哌酮3.33%vs 67.67%和头孢他啶3.33%v...     

基于多重PCR的多样本混合检测低频等位基因Di~a和Co~b

目的建立可同时检测低频等位基因Dia和Cob,并且可进行多个样本混合检测的多重PCR基因分型方法。方法针对血型抗原Dia和Cob等位基因的单个核苷酸多态性(SNP)位点分别设计序列特异性引物,建立稳定的多重PCR体系。通过优化引物设计及PCR反应条件,提高多重PCR反应的灵敏度,使其可同时检测5~10份DNA标本。应用     

免疫性输血反应的调查及预防研究

目的　对各类输血反应进行调查研究 ,同时建立输血前免疫血液学检查新技术 ,以预防和治疗免疫性输血反应。方法　对上海地区 13家医院的 30 776名输血病人进行调查 ,并应用改良Polybrene、简易致敏红细胞血小板血清学试验 (SEPSA)等新技术 ,进行同种特异性抗体的筛选、鉴定及交叉配型试验。结果　发生各类输血反应5 0 8例 (1.6 5 % ) ,其中检出引起免疫性输血反应的同种抗体 6 4例 (12 .6 % ) ,抗体特异性分别为血小板抗体 (包括HLA) 5 1例 ,红细胞不规则抗体 13例 ;各项新技术的应用对预防免疫性输血反应的发生具有显著相关性 (χ2 >3.84 ,P <0 .0 5 )。结论　使用研究建立的输血前免疫血液学新技术能有效地诊断、预防和治疗免疫性输血反应的发生 ,提高了输血的安全性和有效性     

环磷酰胺抑制作用下小鼠对人红细胞抗原的选择性耐受

目的　以环磷酰胺 (CY)作为免疫抑制剂 ,诱导小鼠产生对人红细胞血型抗原的选择性免疫耐受。　方法　1 0 2只 Balb/c小鼠分成 1 7组 ,在 2× 1 0 7人红细胞免疫注射后 ,分别以不同 CY剂量和给药时间给予抑制。并通过直接和间接血凝反应测定小鼠免疫应答所产生的抗人红细胞抗原的 Ig M和 Ig G型抗体效价。　结果　在 5 0～ 1 5 0 mg/kg CY剂量范围内 ,免疫注射当天至免疫后第 4天 (d0～d4)均可对小鼠的免疫应答产生抑制。而诱导小鼠产生对人红细胞抗原完全耐受的最佳 CY抑制时间和剂量分别为免疫注射后的第 1天和 1 0 0 mg/kg。　结论　 CY能有效抑制小鼠对人红细胞免疫所产生的应答 ,选择适当的给药时间和 CY剂量对耐受的建立十分重要。本项研究对诱导小鼠免疫系统产生对人红细胞血型弱抗原的应答具有探索意义。     

序列特异性引物和微粒凝胶凝集法测定人血小板抗原基因型

背景和目标聚合酶链式反应-序列特异性引物(PCR-SSP)是目前应用最广泛的,测定人类血小板抗原(HPA)基因型的技术。在此描述一种新的微粒凝胶凝集技术,以简化扩增产物的显影。材料和方法生物素酰化的引物用来扩增HPA-1,-2,-3,-4,-5,-6,和-15,PCR产物与链霉亲和素颗粒一起培育。以异硫氰酸荧光素(FITC)标记的引物[扩增人类生长激素(HGH)基因的一个片段]和抗-FITC包被的颗粒作为内控物。在凝胶内部或顶部发生颗粒凝集表明有特异性的扩增。对来自于血液捐献者的100份样本进行了检测,方法包括这种新技术以及标准的PCR-SSP规程。结果…     

弱RhCe型家系调查

目的　了解弱RhCe抗原遗传背景。方法　采用红细胞凝集试验检测先证者父母和兄弟姐妹的RhD、C、c、E、e抗原 ,用PCR SSP方法检测RH基因。观察Rh血型基因的构成和抗原表达情况。结果　父亲带有弱RhCe抗原和正常的RhcE抗原 ,基因型为RHCe/RHcE ;母亲有正常RhCe抗原 ,基因型为RHCe/RHCe ;先证者有与父亲相同的弱RhCe抗原 ,基因型为RHCe/RHCe ;哥哥和弟弟都仅有RhcE抗原 ,基因型为RHcE/RHCe ;姐姐有正常的RhcE和RhCe抗原 ,基因型为RHcE/RHCe。结论　我国人群中RHCE基因存在有无效的RHCe基因和弱RHCe等位基因。     

汉族和维吾尔族Knops血型系统基因多态性筛查

目的了解中国人群中Knops血型系统基因(CR1基因)分布多态性以及汉族与维吾尔族之间的差异。方法采用测序方法对5份汉族样本和12份维族样本CR1基因第29外显子进行检测,同时采用序列特异性引物聚合酶链反应(polymerases chain reaction-sequence-specific primer,PCR-SSP)技术对103份汉族样本和33份维吾尔族样本的CR1基因进行分型检测。结果108份汉族样本,CR1基因4646位均为A/A纯合,4780位A/A纯合73份(67.6%)、A/G杂合31份(28.7%)、G/G纯合4份(3.7%);针对45份维吾尔族样本的2个位点(4646位和4870位),分别有36份(80%)和34份(75.6%)A/A纯合、8份(17.8%)和7份(15.5%)A/G杂合、1份(2.2%)和4份(8.9%)G/G纯合被检出。结论汉族和维族人群的Knops血型系统在CR1基因4870位均存在多态性,而维吾尔族人群同时在4646位上存在多态性。中国人Knops血型系统基因型相对稳定,但汉族和维吾尔族之间存在差异。     

抗人红细胞血型糖蛋白A非多态性表位单克隆抗体的制备和鉴定

目的制备抗人红细胞血型糖蛋白A(Glycophorin A,GPA)非多态性表位单克隆抗体并鉴定其特性。方法用小鼠B淋巴细胞杂交瘤技术获得分泌单抗-GPA非多态性表位的杂交瘤细胞株;鉴定抗体特异性和亚型;通过和各种酶处理细胞的反应确定单抗结合抗原位点的特性。结果得到的2株抗-GPA非多态性表位的单克隆细胞株Q6D7和Q7C9,均属IgG1亚类、Kappa型轻链,所针对的抗原位点均抗胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶处理,对无花果酶、木瓜酶、唾液酸酶敏感。结论制备获得2株抗-GPA非多态性表位单克隆抗体。     

个体差异的细胞因子高表达与造血干细胞移植后的复发相关性探讨

目的分析造血干细胞移植(HSCT)后复发与个体差异的细胞因子高表达的关系。方法分别采集24名异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)患者移植前后(-13、0、7、14、21、26和30 d)的系列血样,4名健康人作为对照采集血样周期同患者,分别制备血浆、DNA、RNA;血浆用于细胞因子GM-CSF、IFN-γ、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-10及TNF-α检测;DNA用于信息STR位点谱定量分析嵌合物;RNA用于定量检测BCR-ABL融合基因的肿瘤负载。结果信息STR位点谱定量分析嵌合物结合BCR-ABL融合基因的肿瘤负载,确认出4名患者为慢性粒细胞性白血病复发,另有1人根据临床表现诊断为急性粒细胞性白血病复发,1人死于急性移植物抗宿主病。对5名复发患者、18名缓解患者移植前后10种细胞因子浓度(pg/ml)分析发现:复发组与缓解组分别为GM-CSF(57.2±135.8)vs(15.7±37.3)、IL-1β(233.0±330.6)vs(19.2±39.5)、IL-2(178.2±257.0)vs(14.1±41.1)、TNF-α(9.0±18.4)vs(2.6±4.3)、IL-4(28.9±33.5)vs(9.9±10.0),P0.01),此差异主要是由于5名复发患者中的2例持续高表达IL-1β、IL-2、IL-4,而TNF-α、GM-CSF仅在1例中持续高表达,缓解组18例加上死亡的1例共19例中只有1例GM-CSF持续较高表达。结论 HSCT移植后的复发可能与个体差异的细胞因子高表达相关,且这些细胞因子为成组出现,如IL-1β、IL-2、IL-4同时高表达。建议allo-HSCT患者在移植前后做细胞因子的浓度测定,至少包括IL-1β、IL-2、IL-4。