嵌合抗CD20抗体片段F(ab'')2的表达及活性

目的 :为了简化生产步骤 ,提高抗体蛋白的生物活性 ,探索在工程菌体内直接进行抗CD2 0F(ab’) 2 的高效率分泌性表达。方法 :采用单因素考察法优化培养条件 ,使蛋白G柱和S2 0 0 HR分子筛柱分离纯化目的蛋白 ,用MTT法检测抗CD2 0F(ab’) 2 抑制Daudi细胞体外生长的活性。结果 :发现用论文所选定的最适培养条件 ,抗CD2 0F(ab’) 2 的产量有了明显提高 ,从1 9～ 2 .2mg L达到了 3 7～ 4 3mg L ,F(ab’) 2 在表达产物中所占的比例也从 9 7%～ 13 2 %提高到了 38 1%～ 4 6 8% ;使用S2 0 0 HR分子筛柱对蛋白G柱亲和纯化后的产物进一步分离纯化 ,可以使F(ab’) 2 的纯度达到 85 %以上 ;MTT法检测结果证明F(ab’) 2 抑制Daudi细胞生长的IC50 值为 14 6 μg ml,而Fab’为 39 5 μg ml。 结论 :实现了抗CD2 0F(ab’) 2 在工程菌体内的高效率分泌性表达 ,而且所表达的抗CD2 0F(ab’) 2 比抗CD2 0Fab’具有更强的抑制Daudi细胞体外生长的能力     

嵌合抗CD20抗体Fab片段在大肠杆菌中表达及活性鉴定

目的 :构建抗CD2 0 嵌合抗体Fab片段表达载体 ,并在大肠杆菌中进行高效可溶性分泌表达。方法 :利用PCR方法从抗CD2 0 单链抗体 (ScFv)表达载体上扩增抗CD2 0 抗体轻链可变区基因 (VL)、重链可变区基因 (VH) ,然后将VH、VL 基因重组到Fab表达载体pYZF中 ,构建抗CD2 0 Fab表达载体pYZF1cd2 0 ,并在 2 7C7菌中高效表这。结果 :经Fab表达载体转化的 2 7C7菌株 ,进行表达培养 ,经分离纯化获得具有CD2 0 特异结合活性的Fab片段 ,竞争性免疫荧光抑制实验表明 ,表达产物Fab片段能竞争性抑制鼠源性抗CD2 0 抗体HI47和CD2 0 表达细胞Raji细胞结合。结论 :在大肠杆菌中高效可溶性分泌表达有活性的抗CD2 0 嵌合抗体Fab片段。     

人B淋巴瘤裸鼠腹腔内移植模型

目的：建立人 Ｂ淋巴瘤裸鼠移植瘤腹腔模型,主要是为了研究抗 ＣＤ２０／ＣＤ３双功能抗体对人 Ｂ淋巴瘤的治疗作用。方法：采用５周龄左右的雌性ＢＡＬＢ／ｃ－ｎｕ,腹腔注射ｐｒｉｓｔａｎｅ ０．２ｍｌ／只 ２次,经６０Ｃｏ照射,３天后腹腔接种人Ｂ淋巴瘤细胞株（Ｒａｊｉ）１×１０～７／只,并于第 ２天随机分组用预先激活的Ｔ细胞加入双功能抗体进行治疗,每周腹腔给药 １次,共４次。结果：人Ｂ淋巴瘤细胞株（Ｒａｊｉ）裸鼠腹腔移植,接种３８只均获成功,成瘤率１００％。染色体检查证明为人类染色体特征,病理形态学观察,瘤块主要分布于腹腔、肠系膜、淋巴结、贴近肠壁处,并且ＣＤ１９、ＣＤ２０,ＨＬＡ—ＤＲ阳性率达９５％以上,对照组４０天时全部死亡,治疗组存活至１００天处死。结论：成功地建立了人类Ｂ淋巴瘤裸鼠移植瘤腹腔模型,经过实验证明,抗ＣＤ３／抗 ＣＤ２０。双功能抗体有很好地抑癌作用。     

抗CD_3/抗CD_(20)微型双功能抗体裸鼠体内分布研究

目的：建立裸鼠皮下人Ｂ－淋巴细胞移植瘤模型,研究抗ＣＤ３／ＣＤ２０。微型双功能抗体在裸鼠体内的分布。方法：采用亲和层析分离纯化本室构建的抗 ＣＤ３／抗 ＣＤ２０微型双功能抗体可溶性表达产物,并用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ、分子排阻层析和 ＦＡＣＳ鉴定纯化产物;采用５周龄左右的雌性 ＢＡＬＢ／ｃ－ｎｕ,经４Ｇｙ照射、皮下接种 Ｒａｊｉ细胞建立裸鼠皮下人Ｂ－淋巴细胞移植瘤模型,并于眼底静脉丛注射１２５Ｉ标记的抗ＣＤ３／抗ＣＤ２０微型双功能抗体,测定各组织中１２５Ｉ的分布。结果：雌性ＢＡＬＢ／ｃ－ｎｕ经照射、皮下接种１×１０～７～３×１０～７Ｒａｊｉ细胞／只,６～１４天均开始出现移植瘤,移植瘤细胞膜表面标记与 Ｒａｊｉ相同,且在２４小时时肿瘤部位１２５ Ｉ的分布明显低于心、肝、肾、脾,其比值分别为０．０８、０．１９、０．０６和０．５１,而 ７２小时时肿瘤部位１２５Ｉ的分布则高于心、肝、肾、脾,其比值分别为 ２．３２、９．４６、８．２４和９．５０。结论：抗ＣＤ３／抗ＣＤ２０微型双功能抗体能在裸鼠皮下人Ｂ－淋巴细胞移植瘤部位富集,是一个有望用于Ｂ细胞恶性肿瘤临床治疗的双特异性抗体。     

SPECIFIC UPTAKE OF MONOCLONAL ANTIBODY-CONJUGATED METHOTREXATE BY HUMAN LYMPHOCYTIC LEUKEMIC B CELLS

ＳＰＥＣＩＦＩＣＵＰＴＡＫＥＯＦＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬＡＮＴＩＢＯＤＹＣＯＮＪＵＧＡＴＥＤＭＥＴＨＯＴＲＥＸＡＴＥＢＹＨＵＭＡＮＬＹＭＰＨＯＣＹＴＩＣＬＥＵＫＥＭＩＣＢＣＥＬＬＳＺｈｕＺｈｅｎｐｉｎｇ１朱祯平ＹａｎｇＣｈｕｎｚｈｅｎｇ１杨纯正Ｔａｒｕ...     

单克隆抗体（HI30）—丝裂霉素免疫偶合物的研究

用Dextran T-40的氧化产物葡聚糖多聚醛(polyaldehyde,PAD)作为中间载体,将鼠抗人T淋巴细胞表面分化抗原的单克隆抗体HI_(30)与抗癌药丝裂霉素(mitomgcin C,MMC)形成共价连接,制备HI_(30)-PAD-MMC免疫偶合物。偶合物的特异性毒性依赖于单克隆抗体(单抗)和靶细胞表面抗原位点的结合。偶合物基本上保持原有的抗体结合活性及药物细胞毒,并具有良好的稳定性。     

以血管以皮细胞生长因子及其受体为靶点的抗肿瘤药物研究进展

血管新生是实体瘤生长和转移的必要条件。血管内皮细胞生长因子及其受体在肿瘤新生血管形成中起重要作用，成为肿瘤治疗的新靶点，一批新生血管抑制物正处于临床或临床前试验的研究阶段。     

人B淋巴瘤裸鼠腹腔内移植模型

目的建立人B淋巴瘤裸鼠移植瘤腹腔模型,主要是为了研究抗CD20/CD3双功能抗体对人B淋巴瘤的治疗作用.方法采用5周龄左右的雌性BALB/c-nu,腹腔注射pristane0.2ml/只2次,经60Co照射,3天后腹腔接种人B淋巴瘤细胞株(Raji)1×107/只,并于第2天随机分组用预先激活的T细胞加入双功能抗体进行治疗,每周腹腔给药1次,共4次.结果人B淋巴瘤细胞株(Raji)裸鼠腹腔移植,接种38只均获成功,成瘤率100%.染色体检查证明为人类染色体特征,病理形态学观察,瘤块主要分布于腹腔、肠系膜、淋巴结、贴近肠壁处,并且CD19、CD20,HLA-DR阳性率达95%以上,对照组40天时全部死亡,治疗组存活至100天处死.结论成功地建立了人类B淋巴瘤裸鼠移植瘤腹腔模型,经过实验证明,抗CD3/抗CD20双功能抗体有很好地抑瘤作用.     

抗CD3/抗CD20双特异双链抗体的生物学活性研究

目的研究抗CD3/抗CD20双特异双链抗体的生物学活性.方法采用亲和层析法纯化本室构建的抗CD3/抗CD20双特异双链抗体可溶性表达产物,并用SDS-PAGE,Westernblot和分子排阻层析鉴定纯化产物;采用FACS法和玫瑰花环试验测定纯化产物与靶细胞的结合活性;采用3H-TdR掺入实验和51Cr释放试验测定该双特异双链抗体的生物学性质.结果纯化的抗CD3/抗CD20双特异双链抗体具有与Jurkat(CD3+)和Daudi细胞(CD20+)的结合活性,且能同时与Jurkat和Daudi细胞结合形成玫瑰花环,并能竞争性封闭亲代鼠源性抗体HIT3a和HI47与Jurkat和Daudi细胞的结合位点;该双特异双链抗体具有促有丝分裂原作用和介导激活的T细胞杀伤Daudi细胞的活性.结论抗CD3/抗CD20双特异双链抗体具有与亲代鼠源性抗体HIT3a和HI47相同的性质,且能介导激活的T细胞杀伤表达CD20抗原的肿瘤细胞,是一个有望用于B细胞恶性肿瘤临床治疗的双特异性抗体.