具有谷胱甘肽过氧化物酶（GPX）活力的抗体酶研究──单克隆抗体的制备及化学诱变

将２，４－二硝基氯苯（ＤＮＣＢ）专一地与底物谷胱甘肽（ＧＳＨ）巯基反应，合成了半抗原ＧＳＨ－Ｓ－ＤＮＰ；通过蛋白质连接技术（戊二醛法）将此半抗原偶联到牛血清白蛋白（ＢＳＡ）上，制备出全抗原。用吸收光谱测得每个ＢＳＡ分子上平均连接３３个半抗原。用全抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，通过淋巴细胞杂交瘤技术，制备出抗ＧＳＨ的单克隆抗体杂交瘤细胞系４Ａ４、６Ａ６、１Ｃ８和４Ｇ３等。将其中的４Ａ４培养上清经５０％（ＮＨ４）２ＳＯ４沉淀、ＤＥＡＥ－５２纤维素离子交换柱层析和ＢｉｏｇｅｌＰ－２００凝胶过滤分离得到４Ａ４ＩｇＧ抗体，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检验纯度大于９０％。４Ａ４ＩｇＧ可变区中的丝氨酸（Ｓｅｒ）经苯甲基磺酰氟（ＰＭＳＦ）活化，再用硒化氢（Ｈ２Ｓｅ）处理，则Ｓｅｒ转变成硒代半胱氨酸（ＳｅＣｙｓ），使４Ａ４ＩｇＧ引入该催化基因。化学诱变后的４Ａ４ＩｇＧ具有谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＰＸ）活性，其活力是世界上最好的ＧＰＸ模拟物ＰＺ５１的１１００倍，是游离ＳｅＣｙｓ的２．２×１０４倍，已达到天然酶活力的数量级水平。经初步应用，该抗体酶可防止自由基对心肌线粒体的损伤。