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将2,4-二硝基氯苯(DNCB)专一地与底物谷胱甘肽(GSH)巯基反应,合成了半抗原GSH-S-DNP;通过蛋白质连接技术(戊二醛法)将此半抗原偶联到牛血清白蛋白(BSA)上,制备出全抗原。用吸收光谱测得每个BSA分子上平均连接33个半抗原。用全抗原免疫BALB/c小鼠,通过淋巴细胞杂交瘤技术,制备出抗GSH的单克隆抗体杂交瘤细胞系4A4、6A6、1C8和4G3等。将其中的4A4培养上清经50%(NH4)2SO4沉淀、DEAE-52纤维素离子交换柱层析和BiogelP-200凝胶过滤分离得到4A4IgG抗体,经SDS-PAGE检验纯度大于90%。4A4IgG可变区中的丝氨酸(Ser)经苯甲基磺酰氟(PMSF)活化,再用硒化氢(H2Se)处理,则Ser转变成硒代半胱氨酸(SeCys),使4A4IgG引入该催化基因。化学诱变后的4A4IgG具有谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)活性,其活力是世界上最好的GPX模拟物PZ51的1100倍,是游离SeCys的2.2×104倍,已达到天然酶活力的数量级水平。经初步应用,该抗体酶可防止自由基对心肌线粒体的损伤。 相似文献
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