Experimental Studyon Anti－tumor Effect of SplenocytesInduced by Anti－CD3McAb，PHA and IL－2

（沈张悦）（邵静芳）（王晓林）（朱慧芬）ＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＳｔｕｄｙｏｎＡｎｔｉ－ｔｕｍｏｒＥｆｆｅｃｔｏｆＳｐｌｅｎｏｃｙｔｅｓＩｎｄｕｃｅｄｂｙＡｎｔｉ－ＣＤ３ＭｃＡｂ，ＰＨＡａｎｄＩＬ－２￥ＳＨＥＮＧｕａｎ－ｘｉｎ，ＷＡＮＧＸｉａｏ－ｌｉ...     

可与肝癌细胞系HepG2特异性结合的单链抗体的表达及其特性

目的:在原核细胞中表达经噬菌体抗体库筛选可与HepG2细胞特异性结合的单链抗体(scFv),并对其特性进行鉴定。方法:采用正常肝细胞系L02和肝癌细胞系HepG2,从人源噬菌体抗体库中筛选可与HepG2细胞特异结合的scFv。对scFv DNA测序后,以其阳性噬菌体感染大肠杆菌HB2151,在IPTG诱导下表达scFv并以金属离子螯和层析(IMAC)进行纯化,用100g/L SDS-PAGE、Western blot及ELISA分析纯化的scFv。将纯化的scFv与HepG2细胞共孵育后,观察其对细胞生长的影响。结果:经筛选获得的2个相对特异性的scFv,分别命名为SLH04及SLH10。经IPTG诱导获得可溶性scFv的表达。Western blot分析证明,表达产物的相对分子质量(Mr)均为36000左右,与理论预期值相符。ELISA检测表明,纯化的scFv能与HepG2细胞特异性结合,并抑制HepG2细胞的生长。结论:从人源噬菌体抗体库中,筛选出能与HepG2细胞特异性结合的scFv,并在大肠杆菌中表达,有望用于肝癌生物治疗的实验研究。     

抗人胎盘酸性铁蛋白McAb的制备及其鉴定

本文应用人胎盘酸性铁蛋白免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，经细胞融合制备出３株抗人胎盘酸性铁蛋白（ＰＡＦ）的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）。采用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测证明，此单抗对人胎盘酸性铁蛋白的酸性部分反应较强，而与碱性部分反应较弱；间接免疫荧光法检测此单机与体外培养的肝癌细胞株７７２１起反应，而与白血病细胞株Ｄａｕｄｉ、肺癌细胞株９２６，以及外周血单个核细胞均不起反应。     

Weel基因修饰细胞抗CTL诱导的凋亡效应

目的 研究Weel转基因细胞抗CTL介导的凋亡效应及抗穿孔素抗体的对此抗凋亡效应的影响。方法 采用DNA转染技术将重组体Weel Hu／GFP导入哺乳动物细胞NIT(鼠胰岛细胞瘤细胞)；以转染重组体前、后的NIT为靶细胞，采用ELISA凋亡试剂盒检测CTL介导的凋亡效应。结果 转染Weel及加入抗穿孔素抗体的NIT组发生凋亡的细胞数最少。结论 Weel基因转染靶细胞在一定程度上可抵抗CTL介导的细胞凋亡，而穿孔素抗体可协同增强此抗凋亡效应。     

抗慢性B淋巴细胞白血病患者IgM单抗相对亲和力的分析

本文采用间接ELISA法检测了11株抗B-CLL患者IgM腹水和杂交瘤上清McAb的相对亲和力。结果提示,各株McAb结合抗原的相对亲和力不同。根据50％最大结合浓度分为两组。其中4株杂交瘤上清McAb与纯化腹水McAb测得结果基本吻合。实验结果为合理地选用这些单抗提供了重要依据。     

白血病骨髓瘤单抗对白血病细胞株细胞内环核苷酸的影响

本文应用放射免疫测定法,检测了单克隆抗体(λ-44-5-15,λ26-4-15,SMb,OKT10和抗B)作用于相应白血病瘤细胞后细胞内cAMP、cGMP的含量变化。结果发现:抗原、抗体比例在80∶1时经McAb作用16～24h后,瘤细胞内cAMP含量明显高于对照组,cGMP含量明显低于对照组(P<0002-0001)。从而提示:McAb可通过对细胞膜作用,调控细胞内cAMP和cGMP的水平。本文还对McAb作用浓度及作用时间进行了探讨。     

MTT比色法检测IL—2和杀伤细胞活性的研究

本文采用ＭＴＴ比色法测定了ＬＡＫ和ＴＩＬ细胞培养上清ＩＬ－２活性及ＬＡＫ细胞介导对体外培养的白血病细胞株的杀伤活性。结果表明ＬＡＫ细胞和ＴＩＬ细胞培养上清有较高的ＩＬ－２活性，可用于支持培养ＩＬ－２依赖株的生长；ＬＡＫ细胞对体外培养的白血病细胞株有明显的杀伤作用。其杀伤效应随效靶比例增加而增高；同时亦证明：活的白血病细胞数与ＭＴＴ甲赞形成产物呈直线相关性，提示通过ＭＴＴ法测定ＯＤ值能较好地反映活细     

Construction and analysis of three-dimensional graphic model of single-chain Fv derived from an anti-human placental acidic isoferritin monoclonal antibody by computer

As a 24--iner consisting of different proportions of two main subunit types, named L and H,ferritin is a protein involved in iron storage. Inmammalian tissues, ferritin exists in differentmolecular forms (isoferritins )LI,2]. Previous studies showed that the acidic isoform of ferritin existing in the placenta, fetal tissues and malignant tissues was abnormally increased in the sera of patients with malignancies as well as in pregnantwomen at risk of having small--for--gestational ageinfants[3…     

高水平铅暴露对儿童智商、行为及血中某些神经递质的影响

为探讨铅对儿童智商（ＩＱ）、行为及血中去甲基肾上腺素（ＮＥ）、多巴胺（ＤＡ）、乙酰胆碱（Ａｃｈ）三种神经递质的影响，并试图从神经化学的角度阐明铅与ＩＱ、行为的关系。对象和方法：从儿保及儿科门诊收集到与可能的铅污染环境密切接触的高水平铅暴露（血铅＞１０...     

双靶向组织特异性HSV-tk/GCV抗瘤系统的构建及体外效应研究

目的：构建高靶向性基因转移及表达系统，并研究其介导HSVtk/GCV自杀基因系统对肝癌细胞的体外杀伤作用。方法： 通过重组技术分别构建antiTfR ScFvGAL4融合蛋白表达载体ScFvGAL4pET28a及含AFP启动子、GAL4特异性识别序列（GAL4rec）的HSVtk真核表达载体pEBAF/tkGAL4rec。IPTG诱导后，利用受体介导内吞作用介导pEBAF/tkGAL4rec质粒转染表面均高表达TfR的人肿瘤细胞株HepG2，SMMC7721及A549。潮霉素筛选后，MTT法检测GCV对它们的杀伤作用。结果：双酶切鉴定、SDSPAGE电泳及测序分别证明antiTfR ScFvGAL4融合蛋白及重组pEBAF/tkGAL4rec真核表达质粒构建成功。体外杀伤实验中，高分泌AFP(845 ng/ml) 的HepG2/tk细胞对GCV很敏感，且抑制率与GCV浓度及作用时间呈正相关；而低分泌AFP(2 ng/ml)的SMMC7721/tk细胞对GCV低度敏感；不分泌AFP 的A549/tk细胞则不敏感。结论：双靶向组织特异性HSVtk/GCV抗瘤系统构建成功，并显示出很好的靶向性。