抗原和α_2-巨球蛋白共价复合物显著增强免疫原性

α2 -巨球蛋白 (α2 M)活化时构型改变能抑制蛋白酶的活性 ,其 4个亚基间硫酯键可使其他蛋白掺入形成复合物 ,从而可能成为一种具佐剂作用的抗原投递系统 ,使掺入蛋白免疫原性大为增强。作者建立了将蛋白共价掺入α2 M中的快速有效方法 ,用弱免疫原性的 HBs Ag单体 ( HB)掺入 α2 M进行试验。　　以还原法将 HBs Ag颗粒降解为 HB(每个颗粒约由 1 2 0个 HB构成 ) ,掺入提纯活化的α2 M(α2 M* )。将 2 .5μg HB的α2 M* /HB组及 5μg HB/福氏佐剂、5μg HBs Ag(颗粒 ) /铝佐剂和 HB无佐剂组制剂倍比稀释 4个稀释度 ,各稀释度以 0…     

汉逊酵母表达乙肝表面抗原的结构研究

目的解析汉逊酵母表达重组乙肝表面抗原（HBsAg）的空间结构,给出其颗粒大小、结构对称性方面的信息。方法整合adr亚型HBsAg的基因到汉逊酵母染色体上,建立重组汉逊酵母菌。经过发酵扩菌、诱导表达、精制纯化等步骤得到纯化的HBsAg。滴加5μl浓度为80μg／ml HBsAg溶液到亲水处理的纯碳膜铜网上,用2％醋酸铀染色,放置24h后,通过透射电镜得到汉逊酵母表达HBsAg颗粒的二维电镜图像。运用EMAN软件包完成图像选择、颗粒框取、颗粒全同性处理、初始模型构建和结构精修等HBsAg重构步骤,获得HBsAg颗粒的三维结构。结果汉逊酵母表达HBsAg颗粒大小服从高斯分布（P=0．45）,均值为（28．4±2．6）nm;汉逊酵母表达HBsAg是～中空的“鱼笼”状结构,蛋白亚基分布在球状结构的表面;蛋白的表面分布大小为1～2nm的孔状结构和围绕孔状结构的突起;不具备八面体对称性。结论汉逊酵母表达的HBsAg与血源性的HBsAg在大小和结构对称性方面都有显著差异。     

UniJect注射器预充注乙型肝炎疫苗冷链外使用可行性研究

目的为了观察UniJect注射器预充注乙型肝炎(乙肝)疫苗的热稳定性,以探讨其冷链外使用的可行性。方法将常规安瓶分装与UniJect预充注重组乙肝疫苗(酵母)在37℃放置14、30、45d,检测两种分装疫苗的体外相对效力(RP)。将配合疫苗保存使用的温度敏感指示标签(VVM30)在37℃放置30d,其间对其颜色变化进行连续检测。结果5批常规分装重组乙肝疫苗(酵母)及其同批半成品UniJect注射器分装乙肝疫苗,37℃放置14d内所有疫苗RP仍符合要求;37℃放置30d,有1批常规分装乙肝疫苗的RP不符合要求;37℃放置45d,5批常规分装乙肝疫苗的RP均不符合要求。而UniJect注射器预充注乙肝疫苗37℃放置14、30、45d,RP均符合要求。3批VVM30标签37℃干燥和1批VVM30标签37℃水浸放置30d内,其颜色变化线性良好,颜色变化指示临界期均为21d。结论UniJect注射器预充注重组乙肝疫苗(酵母)热稳定性良好,配合使用VVM30标签,可确保脱离冷链运输和保存的乙肝疫苗在效力符合要求的条件下使用。     

重组酵母表达HBsAg P24亚基结合程度对抗原性的影响

目的观察HBsAg P24亚基结合紧密程度对其抗原性的影响。方法3批重组酵母表达纯化的P24亚基松弛结合型HBsAg经半转型和转型处理后，成为混合和紧密结合型HBsAg，用HPLC法检测P24亚基结合紧密程度，松弛型和紧密型HBsAg免疫小鼠后，检测NK细胞杀伤活性及抗原特异性脾淋巴细胞增殖活性。将HBsAg吸附于佐剂Al（OH）3凝胶，免疫小鼠后用半数有效剂量法（ED50）检测所诱导的体液免疫应答，用体外相对效力法（RP）检测抗原的反应原性。结果3批松弛型、混合型和紧密型共9组HBsAg P24亚基紧密结合型比率分别在23．00％～32．00％、38．43％～50．98％和39．65％～52．76％之间，混合型组P24亚基紧密结合程度接近紧密型组；3批紧密型HBsAg免疫小鼠后可比松弛型HBsAg诱导更强的NK细胞活性，松弛型HBsAg免后4周内诱导抗原特异性脾淋巴细胞活性高于紧密型HBsAg，但总体上HBsAg仅诱导较弱的特异性脾淋巴细胞应答；紧密型HBsAg组比松弛型组诱导较强的体液免疫应答，1批混合型抗原体液免疫应答低于同批松弛型和紧密型组，2批松弛型组和其同批紧密型组的体液免疫应答程度接近；混合型HBsAg RP平均值显着高于松弛型组（P〈0．01），紧密型组RP平均值小于混合型组。结论重组酵母表达P24亚基结合程度不同的HBsAg均保持一定程度的抗原性。紧密型HBsAg免疫可诱导较强的非特异性NK细胞和体液免疫应答，混合型HBsAg的免疫反应原性较高。