肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体在肾癌中的分布及其意义

目的：研究肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体（TRAIL）受体在肾癌组织中的分布及其意义。方法：采用RT－PCR及NorthernBlot的方法检测TRAIL受体在肾癌组织及正常肾组织,肾癌细胞系GRC－I和正常肾小管细胞系HK－2中的表达。结果：死亡受体DR4、DT4在肾癌组织及正常肾组织、肾癌细胞系GRC－I和正常肾小管细胞系HK－2中强表达;假受体DcR-1在正常肾组织和正常肾小管细胞系HK－2中强表达;假受体DcR-2未见表达。结论TRAIL基因在肾癌肿瘤细胞的凋亡机制中可能发挥重要的作用。     

人神经生长因子在昆虫细胞中的表达

神经生长因子(NGF)在外周及中枢神经系统的发育及存活方面起着重要的作用.它可以促进外周感觉神经元及背根神经节神经元的增生.中枢神经系统中,NGF主要存在于前脑底部胆碱神经元中,其脑中含量的减少与Alzheimer病引起的记忆力减退及老年斑沉积呈正相关[1].因此NGF药用方面的作用已受到人们的重视,它可望成为治疗Alzheime病的新型药物.     

人血管内皮生长因子受体Flt-1胞外区2-3loop在Pichia.pastoris酵母中的表达、纯化及其生物学活性研究

目的研究人Flt-1胞外区2-3loopcDNA在Pichia.pastoris酵母中的表达,获得高效表达的具有生物学活性的重组Flt-1(2-3)。方法采用PCR扩增Flt-1(2-3)基因,经DNA序列分析后,插入含AOX1启动子和α分泌信号肽序列的Pichia.pastoris酵母表达载体中,构建重组质粒pPIC9K/Flt-1(2-3),转化酵母宿主菌GS115,筛选His     

人血管内皮生长因子受体Flt—l胞外配体结合域的筛选及其结构分析

目的 应用酵母双杂交系统筛选人血管内皮生长因子受体Flt－1胞外最小配合结合域。方法 采用PCR技术,从人胎盘cDNA文库扩增出4个截短的Flt-1cDNA,分别含胞外第2、1、－2、2－3和1－3个loop,构建酵母双杂交系统配合表达质粒,并将pGB59／hVEGF165与pGAD424／Flt-ls两两配对转化酵母菌SFY526。采用滤纸法和液体培养法对阳性克隆进行β－半乳糖苷酶活性分析。结果 Flt－1胞外loop2－3与loop1-3的配体结合能力相关不大,loop1-2的结合力较弱,单独第2个loop无配体结合域－2－3loop,这对研制分子量更小、安全性高的可溶性Flt-1片段,开发其在肿瘤、糖尿病性网膜病变等血管生成相关疾病基因治疗中的应用具有重要的指导意义。     

TRAIL受体在膀胱癌中的表达及意义

目的：了解肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体（TRAIL）受体在膀胱癌组织中的表达及意义。方法：采用RT－PCR及Northern blot方法检测TRAIL受体在膀胱癌组织及正常膀胱粘膜中的表达。结果：死亡受体DR4、DR5在膀胱癌组织及正常膀胱粘膜中呈强表达,候受体DcR-1在正常膀胱粘膜呈强表达,假受体DcR-2未见表达。结论：TRAIL基因在膀胱移行上皮细胞癌凋亡机制中可能发挥重要作用。     

血管内皮生长因子受体KDR胞外区基因对裸鼠人膀胱癌生长的影响

目的研究血管内皮生长因子(VEGF)受体KDR胞外区基因对肿瘤新生血管的抑制作用.方法采用脂质体转染技术,将KDR胞外区基因的真核表达质粒pcDNA3.1/KDRn7转入人膀胱癌EJ细胞,用G418筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞克隆,经固相结合实验筛选得到表达与VEGF特异结合的目的蛋白的细胞克隆,阳性细胞克隆进行了RT-PCR鉴定.结果鸡胚测活表明,EJ细胞表达rKDRn7的能抑制鸡胚绒毛尿囊膜的血管形成;表达rKDRn7的EJ细胞株对裸鼠人膀胱癌生长及血管生成明显抑制,实验组的微血管密度(MVD)为12±4,阴性对照组62±11.结论阻断VEGF/KDR信号传导途径能够抑制肿瘤新生血管的形成,延缓肿瘤的生长速度.     

血管内皮生长因子可溶性受体flt-1_(n3)对裸鼠人膀胱癌生长的影响

目的　研究血管内皮生长因子 (VEGF)受体flt 1胞外区基因抗肿瘤新生血管生成的作用。　方法　采用脂质体转染技术将含有flt 1胞外区前三个IgG样结构区域的真核表达质粒 pcD NA3.1/KDRn7转入人膀胱癌EJ细胞 ,用G418筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞克隆 ,经固相结合实验筛选得到表达与VEGF特异结合的目的蛋白的细胞克隆 ,阳性细胞克隆进行PCR和RT PCR鉴定。对裸鼠人膀胱癌组织切片进行免疫组化染色 ,定量分析微血管密度。　结果　PCR和RT PCR结果显示重组质粒转入EJ细胞及在转录水平表达 ;免疫组化的微血管密度实验组明显低于阴性对照组。　结论　阻断VEGF/flt 1信号传导途径能够抑制肿瘤新生血管的形成 ,延缓肿瘤的生长速度     

人血管内皮生长因子受体胞外1-3、2-3 loopcDNA在酵母中的表达及其生物学活性研究

目的 在酵姆 中实现人血管内皮生长因子（hVEGF165)受体FLT-1胞外1-3及2-3loopcDNA的高效分泌性表达,并比较两种表达产物的生物学活性。方法 构建酵母重组表达质粒pPIC9K/FLT-1(1-3)及pPIC9K/FLT-1(2-3),并分别转化酵母宿主菌CS115,表达产物经CM-SepharoseFF阳离子交换层析和SephacrylS-100分子筛层析纯化后测定其生物学活性。结果 SDS-PACE显示,表达产物以可溶性分子形式存在于上清中,诱导4d的表达量占上清总蛋白的60%以上。表达的sFLT-1（1-3）及sFLT-1(2-3)都具有结合hVEGF165的能力和抑制hVEGF165对人脐静脉内皮细胞（HUVC）的促增殖功能,其中前者的作用虽较强,但二者相差不大。结论 获得了具有生物学活性的可溶性重组TLT-1受体胞外区1-3及2-3loop小片段,为进一步的动物实验和临床应用提供有益的资料。     

TNF受体（P55）和IgG Fc的融合蛋白在哺乳动物细胞中的表达

目的 在真核细胞表达具有生物活属性的可溶性肿瘤坏死因子（TNF）受体蛋白,用于中和TNF的毒性。方法 将TNFR（P55）的胞外区基因和人IgG Fc段基因通过18个碱基的凝血酶切点连接,克隆入真核表达载体pcDNA3.1( ),在COS7和BHK细胞分别得到目的蛋白的表达。结果 在真核表达系统表达了TNFR（P55）胸外区与人IgG Fc段的融合蛋白,免疫学实验及L929细胞体外实验均表明该蛋白具有TNR（P55）特异的抗原性、与TNF结合的活性以及抑制TNF的活性。结论 真表达的融合蛋白产物具有可溶性TNF受体（P55）的生物学活性。