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目的 确定中性内肽酶(NEP)高表达对β-淀粉样肽(AB)诱导的PC12细胞凋亡保护作用的分子机制。方法 利用脂质体转染法建立可稳定表达NEP和失活NEP的PC12细胞系。逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法和免疫印迹法(Western blot法)检测基因在细胞中的表达。利用AB25-35诱导PC12细胞,CellTiter96AQueous单溶液检测系统(MTS)检测细胞存活率;分光光度法检测乳酸脱氢酶(LDH)含量、活性氧(ROS)生成量水平变化;化学发光法检测细胞三磷酸腺苷(ATP)生成量和Caspase-3表达量的变化。结果 在AB25-35诱导PC12细胞凋亡中,NEP高表达可明显提高细胞存活率,降低培养基中LDH含量和ROS生成量;提高细胞ATP释放量;抑制Caspase-3在细胞凋亡中的激活,与正常PC12细胞相比,差异均有统计学意义(P〈0.05)。稳定表达失活NEP的PC12细胞则对细胞凋亡没有影响。结论 NEP通过降低氧化应激反应对细胞线粒体的损伤,抑制凋亡关键蛋白Caspase-3的激活,从而提高AB25-35诱导的神经细胞的存活率。 相似文献
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目的 研究甲基环戊二烯羰基锰(MMT)诱导人SK-N-SH细胞凋亡的分子机制.方法 MMT诱导SK-N-SH细胞后,MTT法检测细胞存活率,分光光度法检测活性氧(ROS)生成;化学发光法检测Caspase-3活性;Western blot法检测p38 MAPK磷酸化程度.结果 在MMT诱导SK-N-SH细胞过程中,细胞ROS生成量为正常组的5.2倍(P<0.01);抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)及二硫苏糖醇(DTT)可有效抑制细胞ROS生成(P<0.01).提高细胞存活率(P<0.01);在这一过程中,Capase-3活性明显增强,为对照组的3.01倍(P<0.01);同时p38 MAPK磷酸化程度加强;p38 MAPK特异性抑制剂SB203580可提高细胞存活率(P<0.05),抑制Caspase-3的活性(P<0.01).结论 MMT诱导的SK-N-SH细胞凋亡与ROS升高,激活Caspase-3有关,这一过程有p38 MAPK相关信号转导途径参与. 相似文献
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探讨氯化锰(MnCl2)对PC12细胞的损伤作用。方法:构建MnCl2诱导的PC12细胞模型,用MTT法检测细胞存活率,用荧光分光光度法检测乳酸脱氢酶(LDH)和活性氧(ROS)生成量,用化学比色法测定细胞内丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果:MnCl2诱导的PC12细胞存活率明显下降,并与诱导时间和浓度呈正相关;MnCl2使PC12细胞LDH外溢量和ROS生成量显著增加,同时细胞内MDA含量增加,SOD活性下降。结论:MnCl2可导致PC12细胞的氧化损伤。 相似文献
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培养神经细胞的氧自由基损伤及银杏叶提取物的治疗作用 总被引:8,自引:1,他引:8
目的 探讨氧自由基在Alzheimer病(AD)发病中的作用和评价银杏叶提取物(Ginkgo biloba extract,EGb)的临床应用价值。方法 以产生超氧阴离子系统黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶(X/XO)作用于PC12细胞,并以EGb拮抗其作用,电镜观察细胞形态变化,MTF法检测细胞存活率,流式细胞术分析细胞凋亡情况,RT-PCR技术分析凋亡相关基因Bcl-2、Bax表达变化。结果 经X/XO损伤后,细胞存活率降低,凋亡率增加,促凋亡基因Bax表达上调。EGb(20mg/L)能改善凋亡情况。结论氧 自由基可诱导神经细胞凋亡而促进AD发生,EGb对神经细胞有保护作用,提示可用于AD的临床治疗与预防. 相似文献
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目的研究中药海风藤对人类神经母细胞瘤细胞系SK-N-SH淀粉样前体蛋白(APP)基因表达的影响。方法MTT比色法检测海风藤作用后SK-N-SH细胞活性,RT-PCR和Western blot方法分别检测APP基因mRNA及蛋白质的表达。结果海风藤能够选择性降低SK-N-SH细胞APP mRNA表达,且呈药物浓度依赖性,海风藤对APP几种同功异构体的表达均有不同程度的抑制作用。在实验药物浓度内,海风藤抑制APP的表达,未导致SK-N-SH细胞活性下降。结论海风藤能够选择性抑制SK-N-SH细胞系APP的表达。 相似文献
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目的:确定甲基环戊二烯羰基锰(MMT)对人前列腺细胞系PC-3M的损伤作用。方法:利用MTS法确定MMT对PC-3M细胞诱导的时间和浓度曲线;分光光度法检测MMT诱导的细胞活性氧(ROS)、乳酸脱氢酶(LDH)、过氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的变化。结果:MMT可明显降低PC-3M细胞的存活率并与诱导时间及浓度呈正相关,其中2mmol/L MMT诱导细胞24h后,细胞存活率降为48.55%(P<0.01);在诱导过程中,细胞ROS及LDH释放量明显上升(P<0.01),SOD活性被抑制(P<0.01),MDA生成量增加(P<0.01)。结论:MMT可对PC-3M细胞造成氧化损伤,使细胞存活率下降。 相似文献
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肿瘤抑制因子RUNX3对人胃癌细胞中凋亡相关基因表达的影响 总被引:1,自引:1,他引:0
目的:研究肿瘤抑制因子人类Runt相关转录因子3(RUNX3)对人胃癌细胞BGC823中凋亡相关基因B细胞淋巴瘤/白血病基因-2(bcl-2)、bax、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-8(caspase-8)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(caspase-9)表达的影响,以揭示RUNX3促进胃癌细胞凋亡的作用机制。方法:首先构建人Runx3的真核生物表达载体pcDNA3.1- Runx3,将pcDNA3.1-Runx3及空载体pcDNA3.1分别转染BGC823细胞48 h后,提取细胞的总RNA和蛋白质,应用逆转录-聚合酶链反应 (RT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blotting)分别检测转染不同载体的细胞内RUNX3的表达情况,然后用RT-PCR和Western blotting检测凋亡相关基因bcl-2、bax、caspase-3、caspase-8和caspase-9的表达及蛋白的表达,β-actin作为内对照。结果:我们成功构建了人Runx3的真核生物表达载体pcDNA3.1-Runx3,将其转染BGC823细胞后,RT-PCR和Western blotting结果均显示:转染pcDNA3.1-Runx3的细胞中RUNX3的表达水平明显高于转染空载体pcDNA3.1的细胞(P<0.05);转染pcDNA3.1-Runx3的细胞中bcl-2基因的表达水平明显降低,caspase-3、caspase-9基因的表达水平明显增加(P<0.05)。结论:在BGC823细胞中,RUNX3通过下调bcl-2,上调caspase-3、caspase-9的表达促进细胞的凋亡。 相似文献
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内皮细胞类表皮生长因子域7对血管平滑肌细胞凋亡的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 探讨人脐静脉内皮细胞株(HUVEC)中类表皮生长因子功能域7(EGFL7)对共培养的人主动脉平滑肌细胞(AoSMC)凋亡的影响以及可能的信号转导通路。方法 利用细胞共培养池行HUVEC与AoSMC共培养,将EGFL7的特异siRNA转染HUVEC细胞,利用MTS法检测HUVEC中EGFL7基因的有效沉默对共培养的AoSMC细胞存活率的影响;并合成无关siRNA作为阴性对照组(neg组),以未转染siRNA的细胞为空白对照组(con组)。同时利用分光光度法检测其对AoSMC细胞乳酸脱氢酶(LDH)、三磷酸腺苷(ATP)以及细胞凋亡蛋白酶(Caspase-3 )表达的影响;应用RT-PCR检测共培养AoSMC 的bcl-2及bax mRNA表达水平的改变。结果 与neg组及con组相比,干扰HUVEC细胞EGFL7表达12h后,AoSMC存活率无明显变化(P>0.05),而干扰24、36、48h后,存活率显著降低(P<0.05);干扰12、24、36、48h后,AoSMC细胞线粒体ATP释放量减少、培养基中LDH含量及Caspase-3表达量均增加(P<0.05)。RT-PCR检测结果显示,与neg组及con组相比,干扰siRNA转染HUVEC细胞24、36、48h,共培养的AoSMC凋亡基因bcl 2表达水平轻度降低(P<0.05);但Bax表达水平在相应干预时间点均无明显改变(P>0.05)。结论 内皮细胞株EGFL7基因沉默时,可导致平滑肌细胞凋亡;EGFL7通过bcl-2相关信号通路调节SMC凋亡,而与Bax基因表达无关。 相似文献
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目的 观察转染磷脂过氧化氢谷胱甘肽过氧化物酶 (PHGPx)基因对神经毒物质Aβ及H2 O2 诱导细胞凋亡的保护作用。方法 通过基因转染和筛选得到稳定高表达PHGPx基因的PC1 2 细胞 ,加入神经毒物质Aβ及H2 O2 ,采用电镜、DNA片段化测定、MTT比色微量分析及流式细胞凋亡率分析等方法观察转基因后抗逆变致凋亡的能力。结果 加入神经毒物质Aβ或H2 O2 后 ,未转染PHGPx基因的PC1 2 细胞出现凋亡的特征性形态学改变 ,电泳可见断裂的DNA片段 ,流式细胞仪检测细胞凋亡率较转染组明显增加。MTT比色微量分析显示细胞活力下降 (均P <0 0 1 )。结论 Aβ及H2 O2 能够诱导神经细胞凋亡。转染PHGPx基因能对抗Aβ、H2 O2 的神经毒性 ,保护Aβ、H2 O2 所致的神经细胞损伤凋亡 ,是AD等有活性氧参与的神经退行性疾病的一种新的基因干预治疗思路 相似文献