Sox2- R9- EGFP融合蛋白的表达及穿膜能力鉴定

构建、表达、纯化、鉴定Sox2- R9 - EGFP融合蛋白,验证其在体外培养的成纤维细胞中的转导活性.以胎猪原始生殖嵴为材料提取总RNA,反转录成cDNA第一链,设计带9聚精氨酸(R9)的特定引物,从cDNA中扩增出猪Sox2基因,克隆到pET- 28a- EGFP载体中,经酶切和测序鉴定后,重组质粒转化大肠杆菌BL...     

免疫去势和未去势猪睾丸上生长激素释放肽的定位及其基因表达

目的:探讨生长激素释放肽在猪睾丸中的定位及其基因表达,以及免疫去势对猪睾丸中生长激素释放肽表达的影响.方法:14头9周龄公猪随机分为免疫去势组和对照组(未去势组),25周龄时屠宰,取血清和睾丸组织,放射免疫法检测血清睾酮的水平,免疫组织化学PV-9000两步法确定生长激素释放肽在睾丸中的细胞定位,实时荧光定量PCR法分析睾丸中生长激素释放肽mRNA的变化.结果:免疫去势组猪血清睾酮水平显著地低于未去势组;免疫组织化学显示表达生长激素释放肽的细胞为精原细胞、初级精母细胞、精子细胞、支持细胞和间质细胞,且免疫去势猪阳性细胞数显著多于未去势猪.另外,猪睾丸中有生长激素释放肽mRNA,但免疫去势组与未去势组间差异无统计学意义.结论:猪睾丸中广泛存在生长激素释放肽及其mRNA,免疫去势导致生长激素释放肽的表达增多.     

精原干细胞移植的研究进展

睾丸生殖细胞中精原干细胞(SSC)是雄性动物睾丸内惟一向子代传递遗传信息的干细胞,具有高度自我更新和分化潜能,也是雄性动物精子发生的基础.目前SSC移植法是研究精子发生过程的主要手段,也是制作转基因动物,研究基因功能,治疗雄(男)性不孕和保护濒危动物等的关键环节.常用的移植法有睾丸生殖细胞移植法和睾丸组织块移植法,现将用这2种移植法的研究进展作如下综述.     

自制载体冷冻小鼠原核期胚胎效果分析

目的 探讨自制冷冻载体冷冻保存昆明小鼠体内原核期胚胎的可行性.方法 首先,比较了两种流行的商业化载体:开放式拉长麦管(open pulled straw,OPS)和冷冻帽(cryotop)开展小鼠原核胚玻璃化冷冻保存效果.其次,以cryotop为对照,利用自制简易载体(cryotip)开展小鼠原核期胚胎的玻璃化冷冻保存.之后,利用ANOVA对各组胚胎在复苏后的体外培养卵裂率、囊胚率进行统计分析.结果 OPS和cryotop两组之间,胚胎在玻璃化冷冻/复苏后发育的2-细胞率、4-细胞率和囊胚率差异均无显著性(P＞0.05),但cryotop冷冻效果更接近对照组;cryotip玻璃化冷冻载体与cryotop相比,胚胎复苏后各组差异均无显著性(P＞0.05),数值上除了2-细胞发育率外,cryotip其他几项结果都稍微高于cryotop组.结论 OPS,cryotop,cryotip冷冻保存昆明小鼠体内原核期胚胎均是可行的;cryotop在冷冻效果上要优于OPS,笔者自制的cryotip因其成本低,制作简单,操作安全可靠,在实验中替代昂贵的商业化载体OPS和cryotop是可行的.     

Sox2-R9-EGFP融合蛋白的表达及穿膜能力鉴定

构建、表达、纯化、鉴定Sox2-R9-EGFP融合蛋白,验证其在体外培养的成纤维细胞中的转导活性。以胎猪原始生殖嵴为材料提取总RNA,反转录成cDNA第一链,设计带9聚精氨酸（R9）的特定引物,从cDNA中扩增出猪Sox2基因,克隆到pET-28a-EGFP载体中,经酶切和测序鉴定后,重组质粒转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达,Ni2＋柱亲和层析纯化和SDS-PAGE检测表达产物后,将Sox2-R9-EGFP蛋白作用于体外培养的猪胎儿成纤维细胞中以观察其转导活性。成功构建Sox2-R9-EGFP融合蛋白原核表达载体,纯化后蛋白经SDS-PAGE检测证实融合蛋白片段大小正确,加到培养的猪胎儿成纤维细胞中可观察到Sox2-R9-EGFP融合蛋白能进入细胞,且部分可定位于细胞核。获得了Sox2-R9-EGFP原核蛋白表达载体,R9能介导Sox2蛋白进入细胞,为进一步利用重组蛋白建立诱导性多潜能干细胞（Induced pluripotent stem cells,iPS细胞）的研究奠定了基础。