PCR和实时荧光PCR法检测华支睾吸虫的比较研究

目的 利用PCR技术建立快速、灵敏、特异的检测华支睾吸虫的方法,并比较PCR和实时荧光PCR检测华支睾吸虫的灵敏性和特异性,探讨其在华支睾吸虫检测中的应用价值.方法 根据华支睾吸虫的特异性基因序列,设计了PCR引物及实时荧光PCR的特异性引物和探针,分别进行灵敏性和特异性实验.结果 设计的引物能够扩增华支睾吸虫DNA,而且探针的特异性很高.实时荧光PCR对华支睾吸虫的检测阈值为3 fg/μl,灵敏度比PCR高两个数量级.结论 PCR和实时荧光PCR检测华支睾吸虫的灵敏性和特异性均很高,操作简便,为华支睾吸虫的检测提供了有效的技术手段和方法.     

食品绵羊李斯特菌PCR-DHPLC快速检测

李斯特菌是一种病原菌.李斯特菌食品传播亦渐被重视[1].在李斯特菌属的分类种中,单核细胞增生李斯特菌对人类致病性最强,绵羊李斯特菌对人类也有一定的致病性,其余李斯特菌的致病性少有报道[2].     

单增李斯特菌免疫胶体金试纸条快速检测

单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,单增李斯特菌),是李斯特菌属(Listeria)中最重要的人类食源性病原菌[1].目前单增李斯特菌的检测方法主要依靠传统的分离培养和生化鉴定,该方法费时费力[2,3].     

丹东口岸国境外环境水体中检出O139群霍乱弧菌

[目的] 对丹东口岸中朝界河(鸭绿江)水体进行霍乱监测，从而了解丹东口岸国境外环境水体被霍乱弧菌污染情况。[方法] 对可疑菌落作霍乱O1群、O139群血清玻片凝集试验和聚合酶链式反应(PCR)检测，对凝集菌落和PCR扩增阳性的菌落作进一步的生化试验。[结果] 最终鉴定出1株O139霍乱弧菌。[结论] 鸭绿江水体已被O139霍乱弧菌污染，出入境检验检疫部门应加强对江水的监测和进口水产品的检验工作。     

酶标方法检测食品中O157大肠杆菌

〔目的〕O_(157)大肠杆菌是污染食品引起食物中毒的主要病原菌,针对进出口食品卫生监测的需要,研究1种简便、快速、准确的实验方法。〔方法〕采用辣根过氧化物酶标记在特异性的O_(157)大肠杆菌单克隆抗体上(1gM型),利用抗原-抗体的特异性结合反应,最后通过反应的颜色来判断阴、阳性结果。〔结果〕本方法检出率高,每克样品中有5个细菌即可检出,48h即可报告结果。〔结论〕酶标方法检测食品中O_(157)大肠杆菌快速、准确检测周期短,既可提高检出率,又可节省检测时间。     

基于TaqMan探针双重荧光PCR检测食品中鼠伤寒沙门菌和肠炎沙门菌

目的建立基于TaqMan探针双重荧光PCR检测鼠伤寒沙门菌和(Salmonella typhimurium,ST)和肠炎沙门菌(Salmonella enteritidis,SE)的方法。方法根据ST的STM4599序列(GenBank:AERV01000023.1)和SE特异序列(GenBank:AF370707.1),分别设计引物和探针,ST探针的5'端标记FAM、SE探针的5'端标记VIC,建立基于TaqMan探针双重荧光PCR检测方法。结果 ST和SE的引物和探针分别特异性地扩增出16株ST和15株SE,而28种不同血清型沙门菌和17株变形杆菌等扩增结果均为阴性。ST和SE的双重荧光PCR扩增效率均为94.2%,R2分别为0.998和0.995,最低检测浓度分别达到300 CFU/ml、260 CFU/ml。结论建立的方法特异性好、灵敏度高,整个试验可在31h完成,是快速检测ST和SE的有效方法,可用于食品中ST和SE的特异性检测。     

实时荧光RT-PCR检测活性单核细胞增生李斯特菌方法的建立

目的 采用逆转录结合实时荧光定量PCR技术,建立一种快速、准确、特异甄别单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,简称单增李氏菌)死活状态的定量方法.方法 根据单增李氏菌hlyA基因序列设计引物和探针;对实时荧光PCR反应体系进行优化后,提取菌体mRNA,通过随机引物进行逆转录反应;产生的cDNA通过实时荧光定量PCR进行鉴定.进一步评价逆转录结合实时荧光定量PCR方法的特异性、灵敏度、重复性后,对20份模拟双盲样本进行检测.结果 本实验所建立的逆转录结合实时荧光定量PCR方法可准确、特异地检测单增李氏菌,其他菌株和失活的单增李氏菌均无阳性结果出现;该方法检测纯菌和模拟样本的灵敏度分别可达到10 CFU/ml和1000CFU/ml;定量检测的批间和批内的变异系数均小于5%;对20份模拟样本进行检测,其中10份含有活性单增李氏菌样本的检测结果均为阳性,其他含有失活单增李氏菌的5份样本和其他致病菌的5份样本检测结果为阴性.结论 本文建立的检测活性单增李氏菌实时荧光定量PCR方法快速、准确,结果可靠,实用性强,可进行定量分析,为食品安全监测和现场流行病学调查提供较好的分析手段和完整的数据.     

霍乱弧菌多重PCR-DHPLC分型方法建立

目的 建立霍乱弧菌多重PCR-变性高效液相色谱(DHPLC)快速分型方法.方法 分别合成扩增霍乱弧菌胶原酶基因(VCC基因)、O1群和O139群的毒力基因(ctxA基因和tcpA基因)以及O139群毒力基因(LPSgt基因),并对4对引物的PCR退火温度进行优化,建立多重PCR-DHPLC分型方法.结果 4种基因可同时被扩增,应用多重PCR-DHPLC方法对霍乱弧菌进行分型的结果与预期的一致.结论 多重PCR-DHPLC分型方法可用于快速、准确地鉴定细菌纯培养物是否为霍乱弧菌以及具体的菌群.     

试探应用贻贝进行海洋生物毒素跟踪监测的可行性

试探应用贻贝进行海洋生物毒素跟踪监测的可行性曹际娟唐守亭（辽宁商检局，大连１１６００１）目前，世界发达国家如美国、加拿大、日本、欧盟等诸国的政府主管部门，对双壳贝类的养殖区都建立了监控体系。对养殖区实行划区管理、定点周期监测，实行警告、开放、关闭养殖...     

建立Taqman探针实时荧光PCR检测食品中肠炎沙门氏菌的方法

目的利用Taqman探针实时荧光PCR检测食品中肠炎沙门氏菌。方法根据沙门氏菌属共有基因序列和肠炎沙门氏菌的特异序列分别设计2组引物及探针,运用实时荧光PCR进行特异性、灵敏性及模拟样品的检测实验。结果采用沙门氏菌属探针可检测到25种不同血清型沙门氏菌(共49株),而11株阴性对照菌株未得到扩增;利用肠炎沙门氏菌探针可从25种不同血清型的沙门氏菌(共49株)和11株阴性对照菌株中特异性的检测出全部15株肠炎沙门氏菌;以肠炎沙门氏菌系列稀释度菌液DNA为模板进行实时荧光PCR扩增,菌株的模板浓度与Ct值之间呈现良好线性关系,线性系数(R2)0.993,扩增效率87%,最低检测浓度260cfu/mL;分别接种肠炎沙门氏菌于四种样品进行模拟样品检测,实时荧光PCR检测结果与经典培养鉴定方法的检测结果相吻合。结论实时荧光PCR检测食品中肠炎沙门氏菌的方法特异性强、敏感度高,可应用于食品中肠炎沙门氏菌的检测。