肝素化牛心包膜对VEGF165控释的体外研究

通过交联的去细胞牛心包膜进行肝素化表面改性,提高对血管内皮细胞生长因子(VEGF)的控释能力及对内皮细胞(ECs)的促增殖能力.采用3种方式进行肝素改性,即共价键合肝素、离子结合肝素以及共价-离子联合负载肝素.评估肝素化基质对VEGF控释及促ECs粘附和增殖的影响.结果表明,共价键合肝素,结合VEGF稳定性强;而离子结合肝素,结合VEGF量可任意调节,且表面易于ECs粘附;共价-离子联合负载肝素,将两种方法的优点相结合,取长补短,使这种方式肝素改性的牛心包具有良好的VEGF控释能力和促ECs增殖能力.     

牛心包脱细胞支架的制备研究

组织工程支架材料是构建组织工程器官或组织的重要基础,天然脱细胞基质由于具有其优良特性而成为理想的支架材料。本研究采用胰酶去污剂法、冻融去污剂24 h法、冻融去污剂48 h法、冻融核酸酶法和去污剂核酸酶法等5种方法对牛心包组织进行脱细胞处理。通过HE染色、扫描电镜观察、含水量检测、力学检测、DNA含量检测和细胞毒性试验,判断不同脱细胞方法的脱细胞效果及其对牛心包基质的影响,从而筛选出对牛心包进行脱细胞的最佳方法。结果显示冻融后去污剂24 h法可以完全脱除牛心包的细胞成分,同时细胞外基质和力学特性保持完好,细胞毒性低,且经济实惠,是制备牛心包脱细胞支架的较好方法。     

共价-离子结合肝素改性对牛心包膜抗凝血性能的影响

目的在碳化二亚胺交联的去细胞牛心包膜上采用3种方式进行肝素改性,即共价键合肝素、离子结合肝素以及共价-离子联合负载肝素,比较这3种肝素化方式对牛心包膜抗凝血性能的影响,并筛选出最佳肝素化方式。方法通过溶血试验、血小板黏附实验、体外凝血测试以及复钙时间测定观察3种方式肝素化的基质抗凝血性能和血栓形成情况,以评价其血液相容性。结果综合上述4项检测的结果,共价-离子联合负载肝素改性的抗凝血性能优于共价键合肝素、离子结合肝素这2种单独负载肝素方式,溶血率〈5％,电镜照片无血小板黏附,体外生理盐水浸泡15d后,仍保持良好的抗凝血活性。结论共价-离子联合负载肝素,将离子结合肝素活性好、共价键合肝素稳定性强的优点结合起来,取长补短,使这种方式肝素改性的牛心包具有良好的血液相容性。     

生物羊膜免疫安全性的筛检

目的：探讨生物羊膜对大鼠免疫安全性的影响。方法将150只 Wistar 大鼠随机分为生物羊膜、免疫抑制、免疫刺激、假手术和空白对照5组,依据考察周期将每组30只再随机分为1、2、4、8和12周5个实验操作小组。各组大鼠皮下埋植后连续3 d 肌内注射硫酸庆大霉素抗感染,按考察周期进行免疫器官系数分析、NK 细胞杀伤活性测定及 IL-1β、IL-6和 TNF-α含量测定。结果生物羊膜植入后1、2、4、8和12周,生物羊膜与假手术和空白对照组大鼠各项检测结果相比不存在明显差异（P>0.05）;术后1周,免疫抑制组大鼠免疫器官系数分析等出现不同程度的免疫抑制,与其余各组相比存在显著性差异（P<0.01）,免疫刺激组大鼠 NK 细胞杀伤活性等出现一定的免疫刺激,与其余各组相比存在明显差异（P<0.05）。结论生物羊膜植入大鼠体内后具有较好的免疫安全性,未产生明显的不良免疫反应。