经点突变的花生主要过敏原Ara h2低致敏原的制备与鉴定

目的构建经点突变的Ara h 2表达载体,表达并纯化该蛋白,鉴定其过敏原性。方法将Ara h 2基因进行点突变,并将其序列进行合成,再将合成后的基因连入原核表达载体pET-32a(+)上,然后转入BL21(DE3)宿主表达菌中;IPTG诱导表达;通过Ni2+亲和层析(FPLC)纯化目的蛋白;Western-blotting和ELISA检测该重组蛋白的过敏原性。结果测序结果表明合成后的序列成功转入原核表达载体pET-32a(+)上。重组蛋白纯化后经SDS-PAGE鉴定,目的蛋白大小与理论值相符。Western-blotting和ELISA结果均表明经点突变的Ara h 2蛋白(M-Ara h 2)与重组的Ara h 2(R-Ara h 2)蛋白相比,结合花生过敏病人混合血清中IgE显著降低。结论成功构建了经点突变的Ara h 2表达载体,初步的体外实验表明该基因表达的重组蛋白具有低致敏原的潜能。     

直上直升机训练飞行学员的卫生保障工作

传统的直升机飞行学员训练,要经过固定翼初级教练机训练后才转入直升机训练。我部训练直升机飞行学员不经过固定翼初级教练机训练,直接上直升机训练。到目前为止已完成了多批训练任务。训练方法的改革,给航卫保障工作带来了新的课题。我们对直上直升机学员的卫生保障特点进行了研究,在实践中不断总结经验,初步掌握了学员的飞行、身体和心理特点,并提出了相应的航卫保障措施。现将我们的认识和体会介绍如下。     

花生过敏原Ara h 8的克隆表达、纯化及免疫学鉴定

目的:克隆花生主要过敏原Ara h 8基因,表达并纯化该蛋白,检测其免疫活性。方法:提取花生总RNA,设计特异性引物,RT-PCR克隆花生Ara h 8基因;将反转录的基因连入pMD19-T Simple Vector,提质粒酶切鉴定并测序。将测序正确的片段连入原核表达载体pET-32a(+)上,并转入BL21(DE3)宿主表达菌中;IPTG诱导表达;通过Ni2+亲和层析(FPLC)纯化目的蛋白Ara h 8;Western blot检测该重组蛋白的免疫原性。结果:测序结果表明克隆的花生Ara h 8基因片段全长为474 bp,编码157个氨基酸,与GenBank中蛋白序列100%相同。重组蛋白纯化后经SDS-PAGE鉴定,目的蛋白大小与理论值相符。Western blot结果表明该蛋白与花生过敏病人混合血清中IgE结合,具有免疫原性。结论:成功克隆并表达纯化了花生过敏原Ara h 8,该基因表达的重组蛋白具有良好的免疫原性。     

Ara h2三聚体重组蛋白的制备及其低致敏原性鉴定

目的制备花生主要过敏原Ara h 2三聚体重组蛋白并检测其过敏原性。方法利用分子生物学的方法将3分子的Ara h 2依次串联起来,并将其整合到原核表达载体pET-32a(+),再转化到感受态Origami中;然后利用IPTG诱导其表达;通过Ni2+亲和层析纯化三聚体重组蛋白;Western-blotting和ELISA检测目的蛋白的过敏原性。结果测序结果表明Trimer成功整合到pET-32a(+)上。三聚体重组蛋白纯化后经SDS-PAGE鉴定,蛋白大小与理论值相符。Western-blotting和ELISA结果表明Trimer与重组的Ara h 2(r-Ara h 2)蛋白相比,结合花生过敏病人混合血清中IgE的能力有所降低。结论成功制备花生主要过敏原Ara h 2三聚体重组蛋白,初步的体外实验表明该重组蛋白具有低致敏原的潜能。     

血清NT-ProBNP的检测对心力衰竭诊断价值的探讨

目的:探讨血清NT—ProBNP在心力衰竭患者诊断和治疗中的临床应用价值。方法:选取我院2008年10月到2010年6月门诊、急诊和住院的心力衰竭患者100例,正常对照组60例。用罗氏2010电化学发光免疫分析的原理检测。结果:心力衰竭患者血清NT—ProBNP水平显著高于正常对照组的NT—ProBNP水平(P<0.05)。心衰患者血清NT—ProBNP的浓度与心功能分级呈正相关。差异有统计学意义(P<0.05)。结论:测定血清NT—ProBNP的水平对心衰患者的诊断、鉴别诊断和对早期心衰的诊断很有价值。给心功能的分级提供有力的依据。