生物素标记法分析MCF-10A细胞质膜蛋白质

 目的 优化细胞膜蛋白分离纯化技术,以期实现快速、高效分析细胞膜蛋白质。方法 本文以乳腺细胞系MCF-10A为模型,用sulfo-NHS-LC-biotin标记完整的活细胞,使细胞表面蛋白生物素化,细胞裂解后利用链亲和素对膜蛋白进行分离富集,再洗脱膜蛋白,达到分离纯化的目的。利用液相层析偶合串联质谱技术（liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS）鉴定提取得到MCF 10A膜蛋白。结果 sulfo-NHS-LC-biotin浓度为0.2 mg/mL时得到的标记纯化膜蛋白最多,可作为标记最适浓度。利用这种方法鉴定出256个蛋白质,生物信息学分析表明其中膜蛋白占63%,比传统膜蛋白分离纯化方法得到的结果好。结论 这种方法省去常规分离膜蛋白时所需的超速离心,具有操作简单、可行性高、平行性高的特点,有望用于规模化肿瘤膜蛋白的差异比较,为肿瘤早期诊断及治疗提供新的靶标。     

非胰岛素依赖型糖尿病基因定位研究进展

非胰岛素依赖型糖尿病（ＮＩＤＤＭ）易感性基因的定位研究是近年来的研究热点，由于ＮＩＤＤＭ的致病因素的多样性和临床表现的复杂性，使它的基因定位进展较慢．本文概述了ＮＩＤＤＭ的发病机理，对其易感性基因的研究现状，基因定位中常用的方法及其优缺点，我国在这方面的研究优势与现状进行了全面的综述，并对其研究前景提出展望．     

基于ELISA的神经胶质酸性蛋白自身抗体的血清含量测定及其在脑胶质母细胞瘤诊断中的应用

 目的 发展基于ELISA的血清神经胶质酸性蛋白(glial fibnillary acidic protein,GFAP)自身抗体含量测定方法,用于脑胶质瘤患者的诊断。方法 克隆GFAP基因至pGEX 6p 1载体,使用大肠埃希菌中纯化得到的GFAP重组蛋白包被96孔板,经封闭后依次孵育稀释的血清样本和偶联HRP的羊抗人二抗,最后加入TMB底物显色,硫酸终止显色反应,测定各孔吸光度。结果 pGEX 6p 1 GFAP质粒在大肠埃希菌Rosetta菌株中表达产生了大量GFAP重组蛋白,所得蛋白经洗脱纯化后用作ELISA反应底物。ELISA实验中,脑胶质瘤患者血清D值明显高于正常人,差异有显著统计学意义。结论 使用GFAP作为抗原的ELISA实验可作为应用GFAP自身抗体进行脑胶质瘤患者血清诊断的一种候选方法。     

胃癌侧群细胞检测分选及其增殖能力的初步分析

 目的 检测和分选胃癌细胞系中的侧群细胞（side population,SP）,并对其体外增殖能力进行初步分析。方法 选择3株不同分化程度的人胃癌细胞系MKN-28、SGC-7901、BGC-823,以Hoechst 33342 / 碘化丙啶（propidium iodidc,PI）荧光染料双染,维拉帕米拮抗对照,应用流式细胞仪荧光激活分选法检测SP细胞比例;通过细胞生长曲线（CCK-8法）对SP细胞体外增殖能力进行初步分析。结果 3株胃癌细胞中均存在含量极少的SP细胞,比例在0.8%～2.7%之间;SP细胞比例随着胃癌细胞分化程度降低而下降（2.20% vs 1. 57% vs 0.93%, P=0.023）人胃癌细胞系MKN-28来源的SP细胞体外培养1周、2周后的增殖倍数分别为22.67和290,明显高于非SP细胞培养后的13.68和124。细胞生长曲线显示,SP细胞体外增殖能力明显强于non-SP细胞及未经分选的MKN-28细胞（P=0. 044）。结论 胃癌细胞系中存在比例相对稳定的SP细胞,SP细胞比例随着胃癌细胞分化程度增高而上升。胃癌SP细胞体外增殖能力明显高于非SP细胞。     

子宫颈糜烂的预防和治疗

众所周知,子宫颈阴道部为鳞状上皮所披盖,面子宫颈的粘膜却为圆柱状上皮所披盖。鳞状上皮与圆柱状上皮的分界是在子宫的外口。子宫颈管的粘膜以鲜红色与子宫颈阴道部灰白微红色有所不同。当子宫颈在不发生病理性变化的一般条件下,不能窥见子宫颈管的粘膜。在子宫内发育到第6—7个月的胎儿,其圆柱状上皮与鳞状上皮的分界,位于子宫颈管的内口,即显著地高于子宫颈管的外口,随着子宫内胎儿的进一步发育,子宫颈的上皮开始向子宫外口扩展,排挤掉所扩展部     

胃癌侧群细胞分选及生物学特性的体外鉴定

目的 检测和分选胃癌细胞系中的侧群细胞(SP),并通过体外实验鉴定其生物学特性.方法 选择3株不同分化程度的人胃癌细胞系MKN-28、SGC-7901、BGC-823,以Hoechst33342/碘化丙锭(PI)荧光染料双染,维拉帕米拮抗对照,应用流式细胞仪荧光激活分选法检测sP细胞比例;通过细胞生长曲线(CCK-8法)、平板克隆形成试验对SP细胞体外增殖及不对称分裂能力等生物学特性进行鉴定.结果 3株胃癌细胞中均存在含量极少的SP细胞,比例在0.8%～2.7%之间.细胞生长曲线显示,人胃癌细胞系MKN-28来源的SP细胞体外增殖能力明显强于non-SP细胞及未经分选的MKN-28细胞(P＜0.05).MKN-28来源的SP细胞平板克隆形成能力(89.33±6.11)%明显强于non-SP细胞(13.33±1.16)%及未经分选的MKN-28细胞(42.67±6.43)%,P＜0.05.MKN-28分选获得的SP细胞亚群经体外培养2周后可分裂产生SP细胞和non-SP细胞,SP细胞比例由起始的100.0%下降至1.4%.结论 胃癌细胞系中存在比例相对稳定的SP细胞.胃癌SP细胞体外增殖和克隆形成能力均明显强于非侧群细胞,且具有不对称分裂能力,可作为胃癌干细胞研究的切入点.     

非胰岛素依赖型糖尿病基因定位研究进展

非胰岛素依赖型糖尿病（ＮＩＤＤＭ）易感性基因的定位研究是近年来的研究热点，由于ＮＩＤＤＭ的致病因素的多样性和临床表现的复杂性，使它的基因定位进展较慢。本文概述了ＮＩＤＤＭ的发病机理，对其易感性基因的研究现状，基因定位中常用的方法及其优缺点，我国在这方面的研究优势与现状进行了全面的综述，并对其研究前景提出展望。     

Polymorphism of DXS102 locus in Chinese population and its application to gene diagnosis in hemophilia B family.

ＰｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｏｆＤＸＳ１０２ｌｏｃｕｓｉｎＣｈｉｎｅｓｅｐｏｐｕｌａｔｉｏｎａｎｄｉｔｓａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｔｏｇｅｎｅｄｉａｇｎｏｓｉｓｉｎｈｅｍｏｐｈｉｌｉａＢｆａｍｉｌｙＢａｏＹｕｎ包斌贝，ＬｕＤａｒｕ卢大儒，ＸｕＨｏｎｇｙａｎ徐...