用反向斑点杂交法检测结核杆菌对链霉素和乙胺丁醇的耐药性

目的建立结核分支杆菌对链霉素（SM）和乙胺丁醇（EMB）耐药基因突变的快速检测方法。方法根据结核分支杆菌标准株H37Rv序列,自行设计针对rpsL和embB基因常见耐药突变的系列寡核苷酸探针,制成膜芯片,并对64例结核分支杆菌临床株的基因突变情况进行检测。结果在34株SM耐药菌中,有25株被检出在rpsL基因分析部位发生突变,检出率为73．5％（25／34）,其中23株（67．6％）为第43位密码子AAG→AGG突变,2株（5．9％）为第88位密码子AAG→AGG突变;在32株EMB耐药菌中,有19株在embB基因分析部位发生突变,检出率为59．4％（19／32）,其中12株（37．5％）为ATG→GTG突变;6株（18．8％）为ATG→ATA突变;1株（3．1％）为ATG-＊CTG突变。膜芯片检出的突变与基因测序结果一致。结论用膜芯片检测结核分支杆菌对链霉素和乙胺丁醇的耐药性,具有较高的特异性和敏感性,可作为常规药敏方法的补充,用于指导开展早期、有效的临床化疗。     

多重PCR法和HPV分型基因芯片法在高危型人乳头瘤病毒感染检测中的应用

目的评价高危型人乳头瘤病毒（HPV）多重核酸扩增荧光检测法和HPV分型基因芯片检测法在HPV感染女性患者标本基因分型的临床应用效果。方法应用13种高危型HPV多重PCR荧光检测法对在深圳市人民医院进行宫颈癌筛查的653例疑似HPV感染女患者的宫颈细胞样本进行检测,并与HPV分型基因芯片检测法的检测结果进行比较,2种方法检测13种高危型HPV不一致的样本经序列分析方法进一步验证。结果13种高危型HPV多重PCR荧光检测法检测HPV阳性样本,阳性检出率为21．5％（140／653）;用HPV分型基因芯片检测法验证,与13种高危型HPV多重PCR荧光检测法一致的阳性样本占20．4％（133／653）,总一致率为98．2％。2种方法的检测结果具有高度一致性（kappa值一o．945）;用HPV分型基因芯片检测法检出：HPV单一型别感染占59．4％（79／133）,主要的高危HPV型别为HPV16、52、39、68、33和59型,6种高危型占总数的87．3％（69／79）,其中HPV16和HPV52为主要感染,占44．9％。结论高危型HPV多重PCR荧光检测法和HPV分型基因芯片检测法在13种高危型HPV的检结果具有高度一致性;多重PCR荧光检测法覆盖主要的13种高危型HPV,分型基因芯片检测法可进行具体的单一型别分型。2种检测方法的联合应用,对宫颈癌筛查和预防具有较高的临床应用价值,同时可为HPV分子流行病学和HPV疫苗的应用研究提供依据。     

结核分枝杆菌对利福平和异烟肼耐药基因突变快速检测方法的建立

目的建立结核分枝杆菌对利福平和异烟肼耐药基因突变的快速检测方法。方法根据结核分枝杆菌标准株H37Rv序列，自行设计覆盖rpoB、katG、inhA基因突变区的系列寡核苷酸探针，并检测临床样品中结核分枝杆菌的基因突变情况，以此来判断耐药结果。结果在56个利福平耐药菌株中，有50个菌株都在rpoB基因上榆出有突变，利福平耐药突变检出率为89．3％（50／56）；有30个利福平敏感菌株rpoB基因上都未检出突变。有58个异烟肼培养的耐药菌株中有47个在katG或inhA基因上检出有突变，异烟肼耐药突变检出率为81．0％（47／58）；有30个异烟肼敏感菌株katG或inhA基因上未检出突变。结论用膜芯片检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼的耐药性，具有较高的特异性和敏感性，可用于临床结核分枝杆菌耐药性的检测。     

输血依赖重型β-珠蛋白生成障碍性贫血患者同种抗体的特征性研究

目的探讨重型β-珠蛋白生成障碍性贫血(以下简称地贫)患者产生同种抗体的发生率及其类型。方法选择280例反复输血的重型β-地贫患者(β-地贫组)配血困难的标本进行同种抗体鉴定并与155例非β-地贫血液系统疾病患者(非β-地贫组)进行比较分析。结果β-地贫组产生同种抗体概率高,280例患者中检出阳性抗体27例,阳性率为9.64%(27/280)。累积输血量小于40U患者产生具有临床意义的同种抗体8例,≥40U患者产生同种抗体19例,二者比较差异有统计学意义(P0.05)。非β-地贫组患者中产生同种抗体14例,阳性率为9.03%(14/155)。累积输血量小于40U患者产生具有临床意义的同种抗体2例,≥40U患者中产生同种抗体12例,二者比较差异有统计学意义(P0.05)。结论随着输血次数的增加,产生同种抗体的概率相应增加,给予长期反复多次输血的患者RH抗原表型相匹配的血液输注,具有重要的临床意义,可降低输血不良反应发生率。     

口腔粘膜扁平苔藓患者口腔多部位幽门螺杆菌的检测及其意义

目的探讨口腔粘膜扁平苔藓与幽门螺杆菌的关系。方法根据Hp的16rRNA特异基因片段设计引物,以确诊的40例OLP患者为研究对象,收集舌背粘膜、后牙颊粘膜、后牙龈下牙菌斑、口腔含漱液及活检之石蜡包埋病理切片等多部位样本,以20例健康人群为对照,PCR法检测各样本的Hp阳性率情况。结果 40例OLPHp检出率分别为：舌背粘膜（25%）、后牙颊粘膜（32.5%）、后牙龈下牙菌斑（50%）、口腔含漱液（55%）及活检之石蜡包埋病理切片（32.5%）,与对照组比较均有显著性差异（P〈0.05）。糜烂型与非糜烂型OLP患者之间,活检标本Hp阳性率有显著差异（P〈0.05）,其它部位样本无显著性差异（P〉0.05）;不同性别OLP患者之间,Hp阳性率亦无显著性差异（P〉0.05）。结论口腔粘膜扁平苔藓与幽门螺杆菌感染有一定潜在联系。     

深圳地区尿道(宫颈)炎病原学检测分析

临床资料　病例选自1994年8月～1995年12月深圳市五家最大医院性病门诊共1321例急慢性尿道(宫颈)炎患者,年龄20～58岁。男771例,女550例。病程3天～2年。83%患者承认有不洁性交史。男性患者有不同程度的尿痛、尿频、尿道口刺痒、排尿困难或排尿后灼热等,尿道口有脓性或浆液性分泌物,一般晨起明显。女性患者除上述症状外,尚有宫颈糜烂,白带增多、异味及外阴痒痛等表现。检测方法　解脲支原体(Ｕｕ)用液体培养法,沙眼衣原体(Ｃｔ)采用英国Ｏｘｏｉｄ公司提供的试剂盒测定标本中Ｃｔ抗原,淋球菌(ＮＧ)选用深圳健尔康生物制品公司提供的ＰＣＲ试…     

2种荧光定量PCR试剂盒检测HBV载量的结果分析

目的 对深圳匹基内标法和达安基因法检测HBV-DNA载量的结果进行分析.方法 比较深圳匹基内标法和达安基因法对同一批样本的HBV-DNA检出阳性率;分别计算两种方法的灵敏度、特异性和准确度;对检测结果进行一致性分析.结果 在89例样本中,匹基内标法结果阳性者64例,阳性率71.91%;达安基因法结果阳性者62例,阳性率69.66%;两种方法结果一致者77例,总符合率86.52%,两者结果差异无统计学意义.匹基内标法的灵敏度、特异性和准确度分别为92.31%(60/65)、91.67%(22/24)、92.13%(82/89);达安基因法的灵敏度、特异性和准确度分别为89.23%(58/65)、83.33%(20/24)、87.64%(78/89). 结论 深圳匹基内标法和达安基因法检测HBV-DNA载量结果间具备良好的一致性,两者都适合用于临床检测与筛查.     

基因芯片检测缺失型α地中海贫血的研究

目的 建立基因芯片检测技术为缺失型α-地中海贫血基因检测诊断提供良好的方法。方法 应用基因芯片检测技术对1123例来我院进行产前检查及产前诊断的妇女筛查。基因突变位点排列见附图1。结果 150例缺失型α-地贫诊断结果为：--^SEA型112例占9．97％，-α^3.7型28例占2．49％；-α^4.2型5例占0．45％，--^SEA／-α^4.2型5例占0．45％。结论 应用基因芯片检测技术检测缺失型α-地中海贫血的诊断比用传统方法如：southern杂交、聚合酶链反应(PCR)方法更具备快速，微量、高效、敏感、平行化、自动化等特点，更能准确地从分子水平诊断疾病，从而可代替传统检测方法成为筛查的常规方法。     

反向斑点杂交技术在结核分枝杆菌耐药性检测中的应用研究

目的利用反向斑点杂交技术，建立结核分枝杆菌对利福平（RFP）、异烟肼（INH）、链霉素（SM）和乙胺丁醇（EMB）耐药相关基因突变的快速检测方法。方法根据结核分枝杆菌标准株H37Rv序列，自行设计针对rpoB、katG、inhA、rpsL和embB基因中常见耐药突变区的系列寡核苷酸探针，制成膜芯片，并对64例结核分枝杆菌临床株的基因突变情况进行检测。结果在36株RFP耐药菌中，有32株被检出在rpoB基因上发生突变，突变检出率为88．89％（32／36）；在39株INH耐药菌中，有30株被检出在katG或inhA基因上发生基因突变或缺失，检出率为76．92％（30／39）；在34株SM耐药菌中，有25株被检出在rpsL基因分析部位发生突变，检出率为73．5％（25／34）；在32株EMB耐’药菌中，有19株在embB基因分析部位发生突变，检出率为59．4％（19／32）。膜芯片检出的突变与基因测序结果一致。结论用膜芯片检测结核分枝杆菌对利福平（RFP）、异烟肼（INH）、链霉素（SM）和乙胺丁醇（EMB）四种主要一线抗结核药的耐药性，具有较高的特异性和敏感性，可作为常规药敏方法的补充，用于指导开展早期、有效的临床化疗。     

反向斑点杂交技术应用于人乳头瘤病毒基因分型的研究

人乳头瘤病毒（HPV）感染、传播是宫颈癌与尖锐湿疣发生的重要病因，且HPV多重感染是宫颈癌的一个极其重要的危险因素。目前，已经确定的HPV型别有100多种，其中42种与生殖道疾病有关，不同地区HPV感染类型有较大差异。本研究利用反向斑点杂交法，可同时检测23种HPV型别，包括18种高危型与5种低危型。