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目的研究HeLa细胞黏附状态的改变对血管扩张刺激磷蛋白(VASP)磷酸化的影响,探讨VASP在肿瘤细胞黏附与去黏附过程中的作用。方法HeLa细胞分为4组,即贴壁细胞组、悬浮细胞组、再黏附细胞组及阳性对照组(Forskolin处理)。倒置相差显微镜观察细胞形态,W estern b lot检测VASP磷酸化水平,试剂盒检测蛋白激酶A(PKA)活性。结果HeLa细胞处于黏附状态时,PKA活性较低,VASP主要以去磷酸化形式(基态水平)存在;细胞处于悬浮状态时,PKA激活,VASP主要以磷酸化形式存在;细胞再黏附于I型胶原的过程中,VASP逐渐发生磷酸化,待细胞伸展后,VASP磷酸化又回复到基态水平。结论在HeLa细胞黏附/去黏附的交替过程中,VASP呈现磷酸化与去磷酸化的动态改变,这种改变与PKA信号通路有关。 相似文献
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苦参碱对胃腺癌细胞SGC7901黏附和移动的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:探讨不同浓度苦参碱对SGC7901细胞黏附和移动能力的影响。方法:5,50,100,250和500 mg/L苦参碱作用SGC7901细胞24 h后,黏附实验检测细胞黏附率,划痕损伤实验(Wound healing assay)检测迁移速度,在Transwell培养体系中,观察苦参碱对SGC7901细胞的抑制作用,PKA试剂盒检测PKA活性。结果:5,50,100,250和500 mg/L苦参碱处理24 h后,SGC7901细胞黏附率分别为78.56%,44.28%,42.48%,39.75%和31.54%,总体呈下降趋势,50 mg/L组与5 mg/L和500 mg/L组比较差异有显著性(P<0.01);与100 mg/L和250 mg/L组比较差异无显著性(P>0.05)。50 mg/L苦参碱作用24 h后SGC7901细胞迁移速度显著降低(P<0.01),Transwell培养体系中,苦参碱组上层迁移到下层的细胞明显少于不加苦参碱组(P<0.01),且PKA活性明显降低(P<0.01)。结论:苦参碱能抑制SGC7901细胞黏附和运动。 相似文献
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目的:探讨高危人乳头状病毒16/18(HPV16/18)DNA检测对不能明确意义的非典型鳞状细胞(ASCUS)进一步分流诊断的意义.方法:对80例薄层液基细胞学(LCT)检查结果为ASC-US的患者进行HPV16/18DNA检测,同时所有患者均进行阴道镜检查及组织病理学检查.结果:80例患者中,HPV16/18阳性者4... 相似文献
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细胞松弛素D对稳定层流诱导的VASP改变的作用 总被引:1,自引:0,他引:1
探讨细胞松弛素D对稳态层流诱导的actin与VASP分布改变的影响.试验采用人脐静脉内皮细胞(HUVECs)暴露于稳定层流.荧光标记VASP和actin,Western blot检测VASP表达及磷酸化水平.结果表明细胞松弛素D预处理细胞暴露于10 dyn/cm2剪切力1 h后,actin不能沿顺流场方向产生重排,VASP表达减弱;VASP总体表达水平不仅无增加,且无磷酸化VASP出现.以上提示VASP通过反复磷酸/脱磷酸化介导剪切力引起的细胞骨架重排,进而细胞形态改变,这种调节作用的发挥有赖于细胞骨架的完整. 相似文献
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苦参碱对HeLa细胞粘附和移动的抑制作用及机制 总被引:3,自引:0,他引:3
目的:探讨苦参碱(Matrine)抑制HeLa细胞粘附和移动的作用及机制。方法:不同浓度苦参碱作用HeLa细胞24h后,粘附实验检测细胞粘附率,划痕损伤实验检测迁移速度,Westernblotting检测血管扩张刺激磷蛋白(VASP)磷酸化水平,PKA试剂盒检测蛋白激酶A(PKA)活性。结果:5,50,100,250和500μg/ml苦参碱处理24h后,HeLa细胞粘附率分别为74.68%,48.97%,45.66%,40.68%和32.61%,总体呈下降趋势,50μg/ml组分别与5μg/ml和500μg/ml组比较差异有显著性(均为P<0.01);与100μg/ml和250μg/ml组比较差异无显著性(P>0.05)。50μg/ml苦参碱处理24h后HeLa细胞迁移速度明显降低(P<0.01),PKA活性明显降低(P<0.01),VASP处于非磷酸化状态。结论:苦参碱抑制HeLa细胞粘附和运动,并降低其PKA活性及抑制骨架调节蛋白VASP磷酸化,发挥了抑制肿瘤转移作用。 相似文献
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目的:构建真核表达载体pEGFP-VASP-lC并稳定转染人宫颈癌细胞系HeLa细胞,为进一步探讨VASP-lC区介导的VASP的寡聚化在HeLa细胞迁移中的作用奠定基础。方法:用RT-PCR技术从人内皮细胞株ECV304细胞中获得VASP-lC区的cDNA并将其插入表达载体pEGFP-C1中,构建的重组质粒经脂质体介导转染HeLa细胞,Western blot鉴定VASP-lC区在HeLa细胞中的稳定表达。结果:RT-PCR成功地扩增出一条约310bp的片段,经限制性内切酶酶切图谱分析和DNA序列测定证实目的基因已插入重组质粒,荧光显微镜下观察到稳定转染的细胞发出较强绿色荧光,Western blot证明人VASP-lC区能以融合蛋白的形式在HeLa细胞中稳定表达。结论:成功构建了真核表达载体pEGFP-VASP-lC,获得了稳定表达人VASP-lC区基因的HeLa细胞克隆,便于进一步探讨VASP-lC区介导的VASP的寡聚化在HeLa细胞迁移中的作用。 相似文献
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目的观察淫羊藿甙(ICA)抑制胃癌细胞黏附、移动及侵袭的效应,探讨ICA对其恶性表型的逆转作用。方法常规培养人胃癌细胞株SGC-7901细胞;200 mg/L淫羊藿甙作用细胞48 h后,检测黏附率、迁移速度、侵袭力(Transwell法)及蛋白激酶A(PKA)活性。结果200 mg/L ICA处理48 h后,SGC-7901细胞在Ⅰ型胶原上黏附40 min时和80 min时,其黏附率分别为34.72%、58.12%,均明显低于对照组的40.31%、68.42%(P<0.05),并且这种黏附抑制作用随时间的延长更为明显;细胞迁移速度[(1.27±0.22)μm/h]和细胞的侵袭力[(41.67±4.80)细胞数/每视野],均较对照组明显降低[(2.28±0.39)μm/h;(137.25±7.25)细胞数/每视野](P<0.01);但PKA活性由(0.6±0.1)U/ml增高到(0.9±0.1)U/ml(P<0.01)。结论ICA抑制SGC-7901细胞黏附、移动及侵袭,增加了细胞内PKA活性,从而发挥逆转其恶性表型的作用。 相似文献