浸润性乳腺癌中EphA2基因启动子区DNA低甲基化及与细胞焦亡的相关性

目的 ：探讨浸润性乳腺癌中肝配蛋白A型受体2(ephrin A receptor 2,EphA2)表达及其启动子区DNA低甲基化与细胞焦亡发生的相关性。方法 ：应用免疫荧光技术和蛋白质印迹法检测42例乳腺癌患者正常乳腺组织、癌旁组织和癌组织中EphA2的表达情况;采用免疫荧光技术和蛋白质印迹法检验细胞焦亡相关蛋白核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白3(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)的表达水平;采用蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白Caspase 1和炎性细胞因子白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)的表达水平;应用巢氏甲基化特异性PCR(nested methylation-specific PCR,nMS-PCR)检验EphA2基因启动子区DNA甲基化水平;采用蛋白质印迹法测验DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)和DNA甲基转移酶3a(DNA methyltransferase3a,DNMT3a)蛋白表达水平;应用P...     

miR-488-3p靶向调控RAP1A在同型半胱氨酸介导肝细胞自噬的作用研究

目的 探讨微小RNA(miR-488-3p)通过靶向调控RAS癌基因家族成员RAP1A在同型半胱氨酸介导肝细胞自噬中的作用。方法 体外常规培养人正常肝细胞(HL-7702),并给予100μmol/L Hcy干预24 h,采用Western blot检测肝细胞自噬相关蛋白LC3、p62和RAP1A的表达水平,qRT-PCR检测肝细胞中miR-488-3p和RAP1A的表达;转染miR-488-3p inhibitor和mimics后,qRT-PCR和Western blot分别检测miR-488-3p的转染效率及其对LC3和p62蛋白表达的影响;TargetScan预测miR-488-3p与RAP1A基因相关性,Western blot检测miR-488-3p下游潜在靶蛋白(RAP1A)的表达改变;Pearson相关系数对肝细胞中miR-488-3p表达水平与自噬相关蛋白水平进行相关性分析。结果 与Control组相比,Hcy组肝细胞自噬相关蛋白LC3、RAP1A和miR-488-3p的表达水平升高(P<0.01),而p62表达明显降低(P<0.01);同时,转染miR-48...     

同型半胱氨酸上调miR-488-3p表达诱导MPC-5小鼠肾小球足细胞凋亡

目的 探讨微小RNA-488-3p(miR-488-3p)在同型半胱氨酸(Hcy)诱导足细胞凋亡中的作用。方法 体外培养足细胞分别采用0μmol/L Hcy(对照组)和80μmol/L Hcy (Hcy组)处理48 h,流式细胞术检测足细胞凋亡率,Western blot法检测B细胞淋巴瘤因子2(Bcl2)、 Bcl2相关X蛋白(BAX)和胱天蛋白酶3(caspase-3)的蛋白表达,实时荧光定量PCR检测miR-488-3p的表达;用miR-488-3p抑制物(miR-488-3p inhibitor)转染足细胞,检测转染效率和足细胞凋亡水平。结果 与对照组相比,Hcy组中足细胞凋亡率、 BAX和caspase-3表达水平显著升高,而Bcl2表达则显著降低;且Hcy显著促进足细胞中miR-488-3p的表达。转染miR-488-3p inhibitor后,足细胞凋亡率、 BAX及caspase-3蛋白表达明显降低,而Bcl2表达显著升高。结论 Hcy通过上调miR-488-3p表达而促进足细胞凋亡。     

LncRNA MALAT1在衰老大鼠心肌缺血后处理自噬水平降低中的作用

背景:缺血后处理可缓解心肌缺血再灌注损伤,但是其具体机制尚不清楚。目的:探讨lncRNA MALAT1在缺血后处理所引起衰老心肌自噬水平降低中的作用。方法:(1)27只22-24月龄SD大鼠随机分为3组:假手术组、缺血再灌注组和缺血后处理组,每组9只,采用苏木精-伊红染色和Masson染色观察心肌组织形态学变化;(2)体外使用8 mg/mL D-半乳糖诱导大鼠心肌(H9C2)细胞9 d后,分为正常氧组、缺氧复氧组和缺氧后处理组。Western blot检测衰老心肌组织及衰老心肌细胞中LC3Ⅱ/Ⅰ和p62蛋白的表达;采用qRT-PCR检测衰老心肌组织和衰老心肌细胞中MALAT1相对表达;转染自噬双标腺病毒(RFP-GFP-LC3)观察衰老心肌细胞自噬流的变化;衰老心肌细胞转染MALAT1干扰片段和过表达质粒,Western blot检测各组细胞中LC3Ⅱ/Ⅰ和p62蛋白的表达。结果与结论:(1)与缺血再灌注组比较,缺血后处理组心肌组织结构基本清晰,细胞核完整,心肌组织间蓝色胶原纤维沉积减少;(2)与缺血再灌注组比较,缺血后处理组LC3Ⅱ/Ⅰ表达降低且p62表达增高(P <0.05)...     

TRPC6 DNA甲基化在同型半胱氨酸致胰岛β细胞焦亡中的作用研究

目的 探讨瞬时感受器电位通道6 （TRPC6） DNA甲基化在同型半胱氨酸致胰岛β细胞焦亡中的作用。方法 20只cbs^+/-小鼠随机分为2组,每组10只。对照组为正常普通饮食,高蛋氨酸组为高蛋氨酸饮食（普通饮食中加入1.7%蛋氨酸）。采用全自动生化分析仪检测小鼠血糖水平;Western blot检测焦亡相关蛋白NLRP3、Caspase-1、IL-1β和TRPC6的表达;qRT-PCR测定胰岛β细胞TRPC6 mRNA表达水平;qRT-PCR和Western blot检测DNMT1、DNMT3a及DNMT3b mRNA和蛋白的表达;采用巢式降落式特异性PCR （nMS-PCR）测验TRPC6 DNA甲基化水平;Pearson相关系数对胰腺组织中TRPC6甲基化水平与血糖以及细胞焦亡水平进行相关性分析。结果 与对照组比较,高蛋氨酸组中cbs^+/-小鼠血糖水平明显升高（P<0.01）;NLRP3、Caspase-1以及IL-1β表达水平显著升高（P<0.01）;TRPC6的mRNA和蛋白表达水平明显升高（P<0.01）。同时,高...