EBI3与Sedlin蛋白的相互作用

目的初步确定EBI3蛋白与Sedlin之间相互作用的区域。方法构建缺失突变体，利用酵母双杂交系统进行测试。结果正确构建了4个EBI3基因的突变体，将突变体与Sedlin基因共转化酵母细胞后，β-半乳糖苷酶测试表明酵母克隆均为阳性。结论EBI3蛋白的氨基酸54-97区域和166～229区域均可与Sedlin结合。     

酸环境对过敏性紫癜患儿血清IgA1诱导血管内皮细胞ASIC1a表达的影响及机制

目的初步探讨酸性环境对过敏性紫癜(HSP)患儿血清Ig A1诱导血管内皮细胞酸敏感离子通道1a(ASIC1a)表达的影响及ASIC1a的调控作用。方法体外培养的人皮肤微血管内皮细胞经过处理后,荧光定量PCR检测血管内皮细胞ASIC1a、destrin及α-SM mRNA表达;ELISA测定血管内皮细胞细胞因子;同时采用荧光定量PCR和Western blot检测细胞骨架destrin及α-SM蛋白表达。结果酸化环境中HSP患儿血清Ig A1作用血管内皮细胞后,ASIC1a mRNA表达明显上调(P0.01);细胞因子IL-8、NO和TM分泌明显增加(P0.01);ASICs阻滞剂可以显著降低酸化诱导的细胞因子的分泌(P0.01)。细胞外酸化下,HSP患儿血清Ig A1导致细胞骨架蛋白destrin及α-SM mRNA和蛋白表达明显下调(P0.01);而ASICs阻断剂组destrin及α-SM mRNA和蛋白表达明显上调(P0.01)。结论ASIC1a在HSP患儿血管炎的发生中起着重要作用,阻断细胞外ASIC1a能显著改善HSP患儿血管内皮细胞损伤。     

酵母双杂交技术筛选胞内氯离子通道蛋白1结合蛋白

目的应用酵母双杂交技术研究胞内氯离子通道蛋白1（CLIC1）的结合蛋白,以进一步了解其功能。方法首先将CLIC1的全长cDNA连接到pGBKT7载体中,重组质粒pGBKT7-CLIC1转化入酵母菌株AH109,再将人Hela细胞的cDNA文库转化AH109细胞,用α-gal检测阳性克隆。所获得阳性克隆测序后进行BLAST检索。结果用酵母双杂交方法筛选到了16个阳性克隆,其中有4个是已知蛋白的基因。结论利用酵母双杂交系统筛选到了数个结合蛋白。     

PBL教学法在临床医学专业生物化学教学中的应用

目的:探讨PBL教学法教授临床医学专业生物化学的效果。方法:随机选取2011级临床医学专业2个班级,分别进行PBL教学法(PBL组)和传统教学法(LBL组)。教学实施后进行笔试和问卷调查两种方式来完成效果评估。结果:2组学生笔试中基础理论客观题型得分差异统计学意义(P>0.05),但PBL组案例分析题型得分高于LBL班级(P<0.01);在教学过程中,PBL组学生在学习注意力集中、学习自主性和积极性、学习兴趣、图书馆和网络资源的有效使用、分析和解决问题的能力、团队协作能力等方面均明显优于LBL(P<0.01),但LBL组学生掌握据重难点理论知识优于PBL组(P<0.01)。结论:PBL教学法在临床医学专业生物化学教学应用效果显著,值得在医学教学中推广。     

酵母双杂交技术筛选细胞极化蛋白PALS1的结合蛋白

目的筛选细胞极化蛋白PALS1的结合蛋白,进一步探讨PALS1的功能及其分子机制。方法将PALS1的全长cDNA序列克隆到载体pGBKT7中,重组的pGBKT7-PALS1质粒转入酵母AH109细胞,细胞置于SD/-Trp培养基上生长,阳性细胞再用Hela细胞的cDNA文库质粒转化,生长于SD/-Trp/-Leu/-His/X-α-gal,显蓝色的克隆为阳性。阳性克隆细胞中的DNA被抽提后转化细菌细胞,然后抽提DNA进行酶切分型。合适的类型测序后进行BLAST检索分析。结果筛选到了13个阳性克隆,其中有2个是已知蛋白的基因即ATRAP和GLT28D1。结论利用酵母双杂交系统成功克隆了PALS1的结合蛋白的基因,为进一步研究PALS1蛋白的功能提供了有益的启示。