盐酸苯肼诱发小鼠网织红细胞条件的优化

 目的 利用盐酸苯肼诱发小鼠产生网织红细胞的最佳条件选择。方法 每天背部皮下给ICR和BALB/c小鼠注射1%盐酸苯肼100～400 μL,连续9 d。每天尾静脉取血,利用煌焦油蓝染色,观察染色后网织红细胞的诱发效率并进行统计学分析。结果 注射200 μL盐酸苯肼的小鼠诱发的网织红细胞状态最好,第4 天诱发效率最高,可达83.16% ± 3.41%;注射300 和400 μL盐酸苯肼的小鼠诱发的网织红细胞形态不规则, 细胞状态较差小鼠很快死亡。结论 ICR小鼠及BALB/c小鼠网织红细胞诱发的最佳条件为：体质量25～35 g 的小鼠每天注射200 μL 1%盐酸苯肼,连续注射4 d。     

PBDC1蛋白的表达及其多克隆抗体的制备简

 目的 原核表达、纯化PBDC1蛋白,制备PBDC1多克隆抗体。方法 将PBDC1基因克隆到pET-28a(+)质粒中,构建成重组质粒pET-28a(+)-PBDC1。将此重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)后,IPTG诱导其在宿主菌中大量表达,并进行SDS-PAGE检测。经镍离子亲和柱纯化得到PBDC1融合蛋白,并以此免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。结果 经质谱鉴定,获得了高纯度的PBDC1蛋白。经Western blot验证,获得了抗PBDC1蛋白的多克隆抗体。结论 成功获得抗PBDC1蛋白的多克隆抗体,为研究PBDC1在红系分化中的功能提供了有利工具。     

NonO蛋白在丁酸钠诱导小鼠红白血病细胞分化过程中的表达

目的探讨NonO蛋白在丁酸钠诱导小鼠红白血病(MEL)细胞向红细胞系分化过程中的表达变化。方法利用联苯胺染色观察丁酸钠诱导MEL细胞红细胞系分化情况,通过Western blotting、免疫细胞化学检测NonO蛋白在丁酸钠诱导MEL细胞分化的过程中表达量的变化,PCR技术检测NonO基因在RNA水平上的表达变化,免疫细胞化学技术检测NonO蛋白在MEL细胞中的定位。结果发现NonO在丁酸钠诱导MEL细胞向红细胞系分化过程中在基因水平和蛋白水平上均上调表达,NonO蛋白在MEL细胞中定位于细胞质和细胞核。结论NonO蛋白与丁酸钠诱导MEL细胞分化密切相关。     

RNAi介导的pirin低表达降低了K562细胞的红系分化能力

目的 研究pirin低表达对人红白血病细胞系K562红系分化和细胞活力的影响.方法 通过短发卡RNA(shRNA)干扰技术,构建pirin低表达细胞稳定株,用Western blot方法对干扰效果进行检测,并用联苯胺染色和MTT法分别检测下扰pirin后对K562细胞的红系分化和增殖的影响.结果 转染了pirin-shRNA的细胞其pirin的表达量明显低于对照组(随机干扰组),pirin低表达与对照组相比对细胞增殖无影响,但在诱导剂诱导分化过程中,血红蛋白的合成出现了显著性的降低(P＜0.05).结论 Pirin低表达不影响K562细胞的增殖能力,但能降低其红系分化能力.     

eIF4H低表达对MEL细胞增殖和红系分化的影响简

 目的 探究eIF4H低表达对MEL细胞增殖和红系分化的影响。方法 重组质粒载体eIF4H-shRNA-1或eIF4H-shRNA-2与pCMV-VSVG和pCMV-dR8.2共同转染HEK293T细胞,获得可使eIF4H低表达的慢病毒。慢病毒侵染MEL细胞,获得eIF4H低表达的MEL细胞稳定株,Western blot检测干扰效果。MTT检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期;联苯胺染色观察红系分化情况。结果 与对照组相比较,eIF4H-shRNA-2组细胞eIF4H表达明显下调,细胞增殖能力明显减弱（P<0.01）,G1期细胞比例明显增加;经丁酸钠处理后eIF4H-shRNA-2组联苯胺阳性细胞明显增加（P<0.01）。结论 成功构建eIF4H低表达MEL稳定株;eIF4H低表达抑制MEL细胞增殖能力;eIF4H低表达不能诱导MEL细胞红系分化,但可促进丁酸钠诱导MEL细胞红系分化。