RhoGDI1通过抑制骨肉瘤细胞凋亡促进其顺铂耐药性的研究

目的 探讨抑制Rho蛋白鸟苷酸解离抑制因子-1(RhoGDI1)的表达对骨肉瘤顺铂耐药性的影响.方法 在骨肉瘤细胞中通过siRNA抑制RhoGDI1的表达(si-RhoGDI1-1、si-RhoGDI1-2组),CCK-8实验检测其对骨肉瘤细胞增殖和顺铂耐药性的影响,划痕实验和体外Transwell检测其对骨肉瘤细胞迁移及侵袭能力的影响,流式细胞术(FACS)和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测RhoGDI1对骨肉瘤细胞凋亡的影响.结果 与si-Control组(转染无意序列)比较,si-RhoGDI1-1、si-RhoGDI1-2组骨肉瘤细胞的增殖速度明细降低(P<0.01),对顺铂的耐受性明显降低(P<0.01),迁移到下室的细胞数显著减少;划痕实验和FACS结果显示,与si-Control组比较,si-RhoGDI1-1、si-RhoGDI1-2组细胞的修复能力明显减弱(P<0.05、P<0.01),细胞凋亡率(P<0.01)和凋亡诱导因子Bax的表达水平明显升高(P<0.01).结论 RhoGDI1通过抑制骨肉瘤细胞凋亡促进骨肉瘤细胞顺铂耐受性.     

衰老髓核细胞中环状RNA浆细胞瘤转化迁移基因1的表达及调控机制

文题释义：环状RNA浆细胞瘤转化迁移基因1：为环形非编码RNA分子之一,是PV T1基因座内的长链非编码RNA区浆细胞瘤变体易位转录物,长约410 nt,其表达降低会促进细胞衰老。 let-7：属于miRNA分子,与细胞的发育、分化密切有关,在传递细胞生长分化信号中发挥重要作用,let-7表达的降低或缺失会影响靶基因HMGA2、RAS、pha-4等的表达,导致细胞分化异常、肿瘤发生、细胞衰老。 背景：研究发现环状RNA浆细胞瘤转化迁移基因1(cyclic RNA plasmacytoma variant translocation 1,circPVT1)与成纤维细胞的衰老有关,但circPVT1与髓核细胞衰老的关系及机制目前尚不清楚。 目的：观察circPVT1在衰老髓核细胞中的表达,并探究其可能作用机制。 方法：体外培养人髓核细胞,电离辐射(5 Gy,6 d)诱导髓核细胞衰老,qRT-PCR检测细胞circPVT1、let-7 mRNA表达;circPVT1 siRNA、anti-let-7共转染至正常髓核细胞,分为空白组、si-NC+anti-NC组、si-circPVT1+anti-NC组、si-NC+anti-let-7组、si-circPVT1+anti-let-7组,qRT-PCR检测细胞circPVT1、let-7 mRNA表达,CCK-8法检测细胞增殖抑制情况,平板细胞克隆形成实验检测克隆形成数量,SA-β-gal染色检测细胞衰老情况,免疫印迹法检测细胞衰老相关蛋白p21、p27以及let-7靶标HMGA2、KRAS表达,双荧光酶素活性实验验证let-7对HMGA2、KRAS靶向调控关系。 结果与结论：①与正常髓核细胞相比,辐射组细胞中circPVT1 mRNA表达降低,let-7 mRNA表达升高,SA-β-gal染色阳性率升高(P < 0.05);②与空白组、si-NC+anti-NC组相比,si-circPVT1+anti-NC组circPVT1 mRNA表达降低,let-7 mRNA表达升高,细胞增殖抑制率升高,克隆形成数量降低,SA-β-gal染色阳性率升高,p21、p27蛋白表达升高,HMGA2、KRAS蛋白表达降低(P < 0.05);而si-NC+anti-let-7组正好相反(P < 0.05);③si-circPVT1+anti-let-7组circPVT1 mRNA表达、克隆形成数量、HMGA2、KRAS蛋白表达高于si-circPVT1+anti-NC组,低于si-NC+anti-let-7组;let-7 mRNA表达、细胞增殖抑制率、SA-β-gal染色阳性率、p21、p27蛋白低于si-circPVT1+anti-NC组,高于si-NC+anti-let-7组(P < 0.05);④双荧光酶素活性实验显示HMGA2、KRAS是let-7的靶标;⑤结果表明,抑制circPVT1表达后加速髓核细胞衰老,其机制可能是通过结合let-7进而抑制靶向HMGA2、KRAS蛋白实现的。 ORCID: 0000-0003-0128-9494(谢明忠) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

SIRT6对椎间盘退变的作用及机制

【摘要】 目的：探讨Sirtuin（SIRT）6对椎间盘退变的作用及机制。方法：32只C57BL/6小鼠随机分为假手术组、模型组、SIRT6激动剂组、SIRT6抑制剂组，每组8只。造模小鼠采用穿刺法构建Co5/6椎间盘退变模型，造模成功后，SIRT6激动剂组和SIRT6抑制剂组分别腹腔注射SIRT6激动剂（20mg/kg）和SIRT6抑制剂（20mg/kg），假手术组、模型组均腹腔注射等量生理盐水，连续7d。干预结束后，对小鼠进行影像学观察，并采集椎间盘组织，采用免疫组化检测椎间盘组织SIRT6阳性百分比；苏木精-伊红（hematoxylin eosin，HE）染色、Masson染色及甲苯胺蓝染色观察椎间盘组织病理学改变；生化检测椎间盘组织丙二醛（MDA）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）及活性氧（ROS）含量；实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应（quantitative real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR）检测椎间盘组织SIRT6、转化生长因子（transforming growth factor-β，TGF-β）1、smad1、smad5 mRNA表达；Western blot检测椎间盘组织骨胶原（collagen）Ⅱ、collagen X、TGF-β1、smad1、smad5、p-smad1、p-smad5蛋白表达。结果：影像学观察发现假手术组尾椎排列有序，无骨赘形成；模型组出现骨赘形成，相较于模型组，SIRT6激动剂组骨赘形成受到明显抑制，而SIRT6抑制剂组骨赘形成更明显。与假手术组相比，模型组小鼠椎间盘组织SIRT6表达及GSH-Px、SOD含量明显降低，而MDA、ROS含量及collagen Ⅱ、collagen X、TGF-β1、smad1、smad5、p-smad1、p-smad5表达明显升高（P<0.01）；模型组椎间盘组织软骨终板局部软骨减少，胶原纤维紊乱、致密，形态模糊；与模型组相比，SIRT6激动剂组椎间盘组织SIRT6表达及GSH-Px、SOD含量明显升高，MDA、ROS含量及collagen Ⅱ、collagen X、TGF-β1、smad1、smad5、p-smad1、p-smad5表达明显降低（P<0.05）；SIRT6抑制剂组则呈现与激动剂组相反的结果。结论：SIRT6过表达可有效调节氧化应激，抑制TGFβ-smad1/5信号通路，进而助于减缓椎间盘退变。