SERPINA3K原核表达系统的构建及其表达

目的：通过构建丝氨酸蛋白酶抑制因子SERPINA3K的原核表达载体,并将其转化到Rosetta-g ami2感受态细胞中,表达重组SERPINA3K,从而为对其功能的深入研究奠定了基础.方法：以小鼠MS-1细胞cDNA为模板通过PCR的方法扩增Serpina 3k基因的表达全片段,再将其插入到原核表达载体pET-41a中,酶切并测序鉴定重组体.将构建好的重组质粒转化大肠杆菌Rosetta-gami2感受态细胞,表达产物用Western blot鉴定.结果：原核表达载体pET-4 1a-Serpina 3k成功构建,可在大肠杆菌Rosetta-gami2中高效表达,得到重组蛋白SERPINA3K,经Western blot鉴定正确.结论：成功构建SERPINA3K原核表达载体且获得表达,为研究SERPINA3K生物学活性及产品开发提供了实验基础.     

基于GEO数据库的不明原因复发性自然流产患者子宫内膜差异基因筛选及其生物信息学分析

目的探讨不明原因复发性自然流产(URSA)患者子宫内膜差异基因筛选及其相关信号通路及生物学过程。方法在基因表达总览(GEO)数据库中,以“recurrent spontaneous abortion”“recurrent pregnancy loss”“endometrium”“homo sapiens”为关键词,检索URSA患者子宫内膜基因芯片数据集。利用R语言对URSA患者子宫内膜基因芯片数据进行分析,筛选差异基因,并对不同芯片数据集间差异基因取交集,获得共同差异基因。利用David数据库对共同差异基因的基因本体(GO)及京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路进行富集分析。利用STRING数据库对这些基因数据集的差异基因编码蛋白的蛋白质与蛋白质相互作用(PPI)网络进行构建,并采用Cytoscape软件(v3.0)进行可视化。结果①本研究获得GSE26787和GSE65099共计2个URSA患者子宫内膜基因数据集,对这2个数据集差异基因取交集,最终获得23个共差异基因,其中上调基因为19个,分别为ADM2、SH3D21、FGFR4、SULT2B1、NRG2、SERPINA4、NLRP5、FAM124B、MCOLN3、SLC7A1、PPP1R1B、SQLE、SLC24A4、PLPPR5、EPHB3、SMIM24、ZNF589、SOX7、EDN3;下调基因为4个,分别为PRKCB、ANG、IRX5、ATG9B。②共同差异基因GO富集分析获得BP、CC和MF共计3个部分结果。共同差异基因在BP中,主要涉及细胞Ca 2+稳态、血管生成及细胞内信号传导;在CC中,主要涉及膜的整体组分;在MF中,主要涉及受体结合。③KEGG通路富集分析结果显示,共同差异基因富集于ErbB信号通路(P=0.070,FDR=55.245)。涉及该信号通路的共同差异基因为NRG2和PRKCB。结论基于GEO数据库,采用生物信息学的方法筛选到参与URSA发生、发展的部分差异基因,并为进一步研究提供数据支撑。     

Tat蛋白对节律基因表达的影响

【摘要】目的 探讨HIV Tat 蛋白是否可以在细胞内影响主要节律基因Clock,Cry,Bmal1,Per的表达。方法 用lipofectamineTM2000将HIVat表达质粒转入PC12细胞,使Tat在PC12细胞中表达。转染48h后提取mRNA和蛋白,分别通过实时荧光定量PCR技术和Western blot技术检测节律基因在mRNA和蛋白水平表达的变化。结果 研究结果显示,与未处理组和空质粒组相比,转染组Cry1的表达水平显著升高（P＜0.05）;Clock的表达水平显著降低（P＜0.05）;Bmal1和Per的表达水平无明显变化（P＞0.05）。 结论 HIV Tat影响了近日节律基因Cry1和Clock的表达,表现为Cry1表达水平升高,Clock表达水平下降,提示TAT蛋白可以影响节律基因的表达并且可能通过对近日节律的影响调节细胞生理功能。     

睾丸Clock基因下调后小鼠精子前向运动百分率降低的机制

目的 通过对睾丸精子超微结构的观察和实验室前期数据的生物信息学再分析,探讨睾丸Clock基因下调使小鼠精子前向运动百分率降低的机制。 方法 选取SPF级ICR雄性小鼠（8周龄）14只,随机分为实验组和对照组,每组6只,另2只小鼠作为免疫共沉淀实验样本。获取小鼠Clock基因下调的睾丸组织,透射电镜观察其中精子的超微结构。结合对实验室前期数据再分析的结果,ELISA检测睾丸组织中α-KGDH的活性,并以RT-qPCR检测睾丸中二氢硫辛酸脱氢酶（DLD）的转录组水平。最后在野生型小鼠睾丸组织中验证CLOCK蛋白与DLD蛋白的相互作用关系。 结果 与对照组相比,实验组Clock基因的表达显著降低（P＜0.001）;实验组睾丸中精子细胞线粒体形态和排列出现异常;差异蛋白的GO和KEGG富集分析提示,实验组精子线粒体中三羧酸循环限速酶α-KGDH的亚基构成蛋白之一的DLD明显下调 （P＜0.05）;与对照组相比,实验组睾丸α-酮戊二酸脱氢酶复合体（α-KGDH）酶活性明显降低（P＜0.05）;与对照组相比,实验组睾丸Dld基因mRNA水平也明显下调（P＜0.05）;而野生型小鼠睾丸中CLOCK蛋白与DLD蛋白能够相互作用。 结论 睾丸Clock基因的下调可导致小鼠精子线粒体结构和功能蛋白发生改变,从而限制了线粒体能量的产出,最终导致精子前向运动百分率降低。     

多学科教-研-赛融合体系建设促进基础医学拔尖学生个性化培养初探

在新时代教育思想指导下,培养具有创新精神和实践能力的基础学科拔尖人才是高等教育强国建设的重大战略任务.自 2009 年教育部启动"基础学科拔尖学生培养试验计划"十年后,"拔尖计划"2.0 应运而生,并对拔尖人才的选拔机制、培养模式提出更高的要求.本文对我校基础医学拔尖学生的个性化培养开展"多学科教-研-赛融合"的体系建设,取得不错的效果.     

抑制MS-1细胞Clock基因表达引起DNA甲基化水平降低

【摘要】 目的 探讨Clock基因对MS 1细胞甲基化水平的影响及Clock基因参与调控细胞增殖的机制。方法 采用siRNA干扰MS 1细胞Clock基因表达,检测细胞DNA甲基化水平变化,以及甲基化结合蛋白MECP2,影响细胞生长和增殖的Wnt/β Catenin信号通路β Catenin基因的表达情况。结果 与对照组相比,抑制Clock基因表达后,MS 1细胞甲基化水平显著降低,且Mecp2和β Catenin基因的表达均明显减少。抑制Clock基因组（CK）和阴性对照组（NC）甲基化DNA占总DNA比率分别为：(1067±0034)%和(1983±0154)%。Real time PCR结果表明,CK组β Catenin基因相对表达量为100000±009547,NC组为162584±017167;CK组Mecp2为098824±012243,NC组为180979±018520。Western blot结果显示,CK组β CATENIN/β TUBLLIN的相对IOD值为1093368±0214433,NC组为3305374±0260016;CK组MECP2/β TUBLLIN的相对IOD值为0289546±0104738,NC组为0649544±0140909。结论 Clock基因能够影响细胞甲基化水平,并且可能通过调控甲基化结合蛋白MECP2表达和Wnt/β Catenin信号通路影响细胞增殖。     

模拟微重力对NIH3T3细胞近日节律基因的影响

目的:研究模拟微重力对NIH3T3细胞近日节律基因表达水平的影响。方法:NIH3T3细胞按照模拟微重力的天数分为5组,RT-PCR检测节律基因mRNA的相对表达水平。结果:实验结果显示五组样品Per1、Per2、Cry1、Bmal1、Clock的相对表达水平存在显著性差异。Per1和Per2基因mRNA的相对表达水平在模拟微重力的第2天、第3天较0天显著升高(P0.05),Per2、Cry1和Clock基因mRNA的相对表达水平在模拟微重力的第4天较其他四组显著降低(P0.05)。结论:近日节律基因的相对表达水平在模拟微重力第2、3天升高,第4天后降低。模拟微重力影响近日节律基因的表达且具有时间依赖性。     

Clock基因对雄性小鼠生殖功能影响

目的:通过干扰小鼠睾丸精子节律基因Clock的表达,研究Clock对雄性小鼠生殖能力的影响。方法:通过RNAi技术,向小鼠睾丸注射Clock干扰质粒干扰雄性小鼠睾丸节律基因Clock的表达。研究干扰Clock基因后精子数量、精子活力、体外受精率和雌鼠胎仔数变化,以及对精子顶体内透明质酸酶活性、芳香基硫酸酯酶A的含量影响。结果:Clock干扰质粒在体内可影响雄性小鼠的胎仔数,但注射干扰质粒后小鼠精子计数、精子活力及体外授精率无明显变化,精子顶体内透明质酸酶活性和芳香基硫酸酯酶A含量也无明显变化。结论:节律基因Clock与雄性小鼠生殖能力有密切关系。     

非编码RNA调控精子发生的研究进展

随着基因组学研究的发展,发现生物体基因组内存在大量不编码蛋白质的基因。这些基因的转录产物称为非编码RNA(Noncoding RNA,ncRNA)。以前认为ncRNA是基因组中无用的序列,但是研究表明ncRNA在很多生命活动中起到很重要的作用。按照转录产物的序列长短ncRNA分为短链非编码RNA(Small ncRNA)和长链非编码RNA(LncRNA)。精子发生包括精原细胞增殖,精母细胞减数分裂以及精子成熟等一系列受到精确调控的生理发育过程。精子发生需要相关基因的适时表达,并受到转录和转录后水平的调控。但是精子发生过程的调控机制目前还未完全研究清楚。最新研究发现在精子发生过程ncRNA起到很重要的作用,即使在成熟精子细胞中也有ncRNA的表达。表明ncRNA参与调控精子发生的过程,并且这些父源ncRNA可能在接下来的受精和胚胎发育中起到重要的调节作用。结合最新研究进展,本文综述了ncRNA在精子发生过程所起的作用,以期为精子发生过程中ncRNA的进一步研究提供参考。     

利拉鲁肽治疗NAFLD的疗效与安全性系统评价

目的:系统评价利拉鲁肽治疗NAFLD的疗效和安全性.方法:检索和筛选中外文文献数据库的相关文献进行meta分析.结果:共纳入 15 篇文献,共 924 例患者.结果显示利拉鲁肽不能有效提高NAFLD的治愈率.与对照组相比,经利拉鲁肽治疗后,NAFLD患者肝脂肪含量、肝纤维化评分和血清ALT水平明显下降,具有统计学意义;血清AST和γ-GGT的变化与对照组无明显差异.胃肠道不良反应的发生率在利拉鲁肽和对照组之间无统计学差异.结论:利拉鲁肽能够降低NAFLD患者的肝脏脂肪含量,改善肝纤维化水平,且患者对利拉鲁肽的胃肠道不良反应有较好的耐受性.