碳青霉烯类敏感性下降革兰阴性杆菌 NDM-1基因筛查

目的：检测碳青霉烯类敏感性下降革兰阴性杆菌的新德里金属β-内酰胺酶-1(NDM-1)基因,了解广州地区 NDM-1超级细菌的流行情况。方法收集2011~2014年分离的碳青霉烯类敏感性下降革兰阴性杆菌105株,采用聚合酶链反应(PCR)扩增 NDM-1基因保守序列初步筛查 NDM-1基因,阳性菌株扩增 NDM-1基因全序列,然后克隆至 pUCm-T 质粒后进行测序。结果肠杆菌科细菌对美罗培南、厄他培南、亚胺培南的耐药率分别为29.09%、50.91%、29.09%;鲍曼不动杆菌对美洛培南、亚胺培南全耐药;铜绿假单胞菌对美罗培南、亚胺培南的耐药率均为88.46%。有4株菌含 NDM-1基因,包括肺炎克雷伯菌1株,大肠埃希菌2株,阴沟肠杆菌1株;克隆质粒 pUCm-T-NDM-1经双酶切和测序证实构建成功。测序结果经 BLAST 比对后,发现4个克隆质粒的序列100%相同,与国内外发现的 NDM-1序列也是100%一致。结论该地区革兰阴性杆菌存在产 NDM-1酶株,其所携带的 NDM-1基因全序列与国际上发现的完全一致。     

转座子tnpU基因在多重耐药革兰阴性杆菌中的分布情况

目的研究转座子tnpU基因和β-内酰胺酶在多重耐药革兰阴性杆菌中的分布情况。方法用纸片扩散初筛试验、扩散确证试验进行超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）表型检查,头孢西丁三维试验进行AmpC β-内酰胺酶的表型检查,纸片协同试验筛选产金属β-内酰胺酶（MBL）菌株;用多重聚合酶链反应（PCR）技术扩增转座子tnpU基因,并进行DNA测序;用MIC药敏法分析多重耐药革兰阴性杆菌的药物敏感性。结果转座子tnpU的总检出率为25．5％。在各菌种的检出率分别为大肠埃希菌占6.3％（3株）、肺炎克雷伯菌占8．3％（1株）、鲍曼不动杆菌占33-3％（20株）、铜绿假单胞菌占43．2％（16株）;β-内酰胺酶表型检测中,ESBLs的检出率最高,转座子tnpU基因阳性的菌株大多数B．内酰胺酶表型为阳性;转座子tnpU基因阳性菌株对抗生素的耐药率显著高于转座子阴性菌株（P〈0．05）。结论转座子tnpU基因在非发酵菌中的分布较广泛,可能在多重耐药机制中起重要作用。     

鲍曼不动杆菌AmpC酶和AmpC耐药基因检测分析

目的检测临床分离的45株鲍曼不动杆菌的AmpC酶和AmpC耐药基因,并探讨产AmpC酶菌株的耐药情况。方法采用超声破碎法提取45株细菌的β-内酰胺酶粗提物,进行三维试验,提取45株细菌的总DNA,聚合酶链反应(PCR)扩增AmpC结构基因和ACT-1、CMY-G1、CMY-G2、DHA、FOX耐药基因,最低抑菌浓度药物敏感试验分析菌株的耐药性。结果 45株鲍曼不动杆菌中三维试验和PCR检测AmpC基因同时阳性的有11株,确认产AmpC酶菌株为11株。三维试验方法和PCR基因检测方法比较对AmpC酶的检出率差异无统计学意义(χ2=3.500,P>0.05)。ACT-1的检出率为4.4%,未检出FOX、DHA、CMY-G1、CMY-G2。产AmpC酶菌株的药物敏感度最高是丁胺卡那霉素(90.9%),其次是亚胺培南(54.5%),产AmpC酶菌株耐药率高,对氨苄西林、氨曲南、头孢曲松、头孢替坦、头孢唑啉、呋喃妥因、头孢他啶达到100.0%,产AmpC酶菌株对抗菌药物的耐药性显著高于不产AmpC酶菌株。结论三维试验方法和PCR基因检测方法对AmpC酶的检出率无明显差别,但仍存在假阳性与假阴性。产AmpC酶菌株耐药情况严重,提示临床应慎重用药。     

CTX—M型阴沟肠杆菌的基因克隆及原核表达产物特性研究

目的对阴沟肠杆菌所产CTX-M型β-内酰胺酶进行基因克隆、原核表达重组质粒的构建及其特性研究。方法以产CTX-M型β-内酰胺酶的阴沟肠杆菌45号基因组DNA为模板,设计两对引物PCR扩增CTX-M,将其克隆入pGEM-T载体后测定该核苷酸序列,再将CTX-M基因克隆到pGEX-6P-3表达质粒并转入感受态BL21,选择阳性菌落进行药物敏感试验和酶动力学检测。结果PCR扩增出大小为876bp和1067bp的基因片段,与GenBank上CTX-M-9和CTX-M-3酶的基因序列同源性为100%。CTX-M-3型重组菌株药敏试验结果与原菌株相比,对青霉素类和头孢噻肟具有明显的水解作用,第三、四代头孢菌素对之较为稳定,动力学结果与酶稳定性结果基本一致。结论重组质粒pGEX-6P-3/CTX-M构建成功,CTX-M-3型重组菌株与原菌株比较,对β-内酰胺类抗生素的敏感性和稳定性增加,亲和力下降。     

2型糖尿病合并冠心病患者白细胞介素6、超敏C反应蛋白及血脂、血糖的相关性研究

目的探讨2型糖尿病(T2DM)合并冠心病患者的白细胞介素-6(IL-6)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)及血脂、血糖的关系。方法选取2014年1～11月来该院就诊经首次诊断为T2DM合并冠心病患者64例,单纯T2DM患者56例,体检健康者58例。检测各组IL-6、hs-CRP、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白-C(LDL-C)、空腹血糖和糖化血红蛋白(HbA1c)水平并研究其在不同人群间的相关性。结果 T2DM组和T2DM合并冠心病组空腹血糖、HbA1c、TC和LDL-C比健康对照组明显升高,差异有统计学意义(P0.05);T2DM合并冠心病组患者的IL-6、hs-CRP水平显著高于T2DM组,T2DM组患者的IL-6、hs-CRP水平显著高于健康对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论 IL-6和hs-CRP可作为预测T2DM合并冠心病患者疾病进程的较为特异的指标。     

广州地区儿童肺炎支原体核酸检测阳性病例的分析

目的分析该地区儿童肺炎支原体核酸(MP-DNA)检测阳性病例的临床特征,为临床诊断和治疗儿童肺炎提供依据。方法对广州医学院荔湾医院和广州医科大学附属第一医院2014-2015年门诊及住院患者中有呼吸道感染症状者,进行咽拭子采样,提取DNA后用聚合酶链反应法检测MP基因,同时抽血检测血常规和肺炎支原体抗体。结果 2 018例呼吸道感染患儿中MP-DNA阳性209例,阳性率10.36%。3~14岁年龄组MP-DNA阳性率为18.25%,均高于其他年龄组,差异具有统计学意义(P0.05);7-9月份阳性率为16.11%,均高于其他月份组,差异具有统计学意义(P0.05);女性阳性率为13.04%,明显高于男性的8.79%,差异具有统计学意义(P0.05);MP-DNA阳性患者白细胞计数偏高占22.01%,白细胞计数正常内占49.28%,白细胞计数偏低占28.71%;MP-DNA阳性患者血清MP-IgG检测中阳性146例,占69.86%。结论 MP-DNA检测对小儿呼吸道感染诊断有重要价值,进行多项目及时快速地检测,对预防该疾病加重有重要意义。     

CTX-M-3型超广谱β-内酰胺酶的原核表达及纯化

目的对肺炎克雷伯菌所产CTX-M-3型超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrum β-lactamase,ESBLs)进行基因重组表达及纯化。方法以产CTX-M-3型超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌总基因组DNA为模板PCR扩增CTX-M-3,将其克隆入pET-28a(+)载体,重组质粒转入大肠埃希菌ER2566中表达,表达产物经过Ni-琼脂糖凝胶柱纯化,用SDS-PAGE电泳和Western-blot鉴定纯化蛋白。结果PCR扩增出大小为876bp的基因片段,与GenBank上同类酶的基因序列同源性为100%。此基因能在大肠埃希菌ER2566中大量表达,蛋白分子质量大约为32KD得到SDS-PAGE电泳和Western-blot的证实,与理论值相符。结论成功表达及纯化CTX-M-3型超广谱β-内酰胺酶,为进一步酶生物学特性及酶的抗体制备研究奠定了基础。