酶联免疫吸附法检测血清抗内皮细胞抗体

培养人脐带静脉内皮细胞并制备内皮细胞膜，以内皮细胞膜为抗原，经酶联免疫吸附法（Ｍ－ＥＬＩＳＡ）检测系统性红斑狼疮患者血清抗内皮细胞抗体，并将结果与细胞ＥＬＩＳＡ作比较。实验表明，两方法符合率为９２％，抗内皮细胞抗体阳性率两法差异无显著性（Ｘ￣２＝０．０６，Ｐ＞０．０５），抗体活性呈明显正相关（ｒ＝０．５１，Ｐ＜０．０１），但Ｍ－ＥＬＩＳＡ可检测ＩｇＧ、ＩｇＭ两型抗体，能节省大量试剂及血清，省时省力，便于推广，也适于制作药盒。     

腺相关病毒介导的小干扰RNA对大鼠肝星状细胞金属蛋白酶组织抑制因子-1及基质金属蛋白酶13表达的影响

目的 观察以腺相关病毒(AAV)为载体含有针对金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP)-1具有较强抑制作用的小干扰RNA(siRNA)感染大鼠星状细胞系HSC-T6后TIMP-1及基质金属蛋白酶13(MMP13)的表达情况.方法 将对大鼠TIMP-1基因具有最强抑制作用的一对siRNA,在体外构建为短发夹siRNA表达载体后,将其包装为重组AAV-rAAV/siRNA-TIMP-1/neo并感染HSC-T6,于感染后4周及12周应用荧光定量PCR方法及Western blot方法分别检测TIMP-1及MMP13 mRNA及蛋白质表达情况.结果 经PCR、酶切及序列测定证实抑制作用最强的1对siRNA在体外构建的shRNA表达载体成功克隆.将重组质粒包装成病毒后感染HSC-T6细胞,与对照组细胞相比,rAAV/siRNA-TIMP-1/neo感染组在感染后4周及12周细胞TIMP-1 mRNA及蛋白质表达水平明显降低(P＜0.01),而MMP13 mRNA及蛋白质表达水平明显增高(P＜0.01).结论 化学合成的siRNA在短时期内可有效地抑制TIMP-1基因的表达,重组病毒rAAV/siRNA-TIMP-1/neo可长期有效地抑制TIMP-1基因表达.     

细胞ELISA检测血清抗内皮细胞抗体

用培养的人脐带静脉内皮细胞作为抗原，经ＥＬＩＳＡ检测了ＳＬＥ患者血清抗内皮细胞抗体，目的在于建立ＥＬＩＳＡ检测抗内皮细胞抗体的方法，并与细胞毒试验比了比较，结果表明，ＥＬＩＳＡ及细胞毒试验检测抗内皮细胞抗体，阳性率分别为７３％和５１％，差异显著显著；阳性血清用红细胞及淋巴细胞吸收后，抗内皮细胞抗体活性无明显降低，提示该法特异、灵敏、且重复性较好，可进行大批量标本筛选，为研究抗内皮细胞抗体特征及其致     

骨疏康对成骨细胞刺激作用的研究

目的 通过体外成骨细胞培养,观察补肾中药骨疏康对成骨细胞的直接刺激作用。方法 采用第２代成骨细胞加入浓度为５μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌ、２０μｇ／ｍｌ的骨疏康药液,测定ＡＫＰ、ＢＧＰ、ＰＤＹ的含量并进行细胞计数。结果 加药后细胞数随药物浓度增加而增加,ＡＫＰ和ＢＧＰ水平也相应提高。２０μｇ／ｍｌ组的ＬＡＰ和ＢＧＰ水平较５μｇ／ｍｌ组和１０μｇ／ｍｌ组增加明显,有显差异Ｐ〈０．０５。ＰＹＤ含量随药     

腺相关病毒和慢病毒作为小干扰RNA转运载体的比较

目的 观察以腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)和慢病毒(Lenti virus)为载体、含有针对大鼠金属蛋白酶组织抑制因子(tissue inhibitor of metalloproteinase,TIMP)-1、具有较强抑制作用的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)感染大鼠肝星状细胞系(hepatic stellate cell,HSC)-T6的感染效率和其对TIMP-1的表达抑制作用.方法 挑选针对大鼠TIMP-1基因具有较强抑制作用的siRNA序列,在体外构建为短发夹表达载体后,将其包装为重组AAV/siRNA-TIMP-1/GFP和Lenti/siRNA-TIMP-1/GFP,同时包装阴性对照AAV/GFP和Lenti/GFP,并以MOI=10感染大鼠肝星状细胞系HSC-T6,感染后72 h,通过流式细胞仪及荧光显微镜观察病毒的感染效率.在感染后7 d,应用Western bloting方法检测TIMP-1蛋白表达情况.结果 感染HSC-T6后细胞形态、增生速度未发生明显变化.通过流式细胞仪及荧光显微镜证实感染效率分别为:空载体AAV/GFP和Lenti/GFP组分别为72.7%和70.0%,AAV/siRNA.TIMP-1/GFP和Lenti/siRNA-TIMP-1/GFP感染组分别为64.58%和61.86%.与正常细胞相比,感染后7 d,siRNA感染组TIMP-1蛋白表达均下降约40.0%,但两组siRNA感染组下降幅度无统计学意义.结论 构建的重组AAV/siRNA-TIMP-1/GFP和Lenti/siRNA.TIMP-1/GFP均可有效感染大鼠HSC-T6,感染效率相近,且均可在短期内有效抑制大鼠肝星状细胞系HSC-T6 TIMP-1蛋白的表达.     

亲和层析技术及其应用

亲和层析法(Affinity Chromatography)是近年来从固态酶和免疫吸附法发展起来的特异性吸附层析技术。目前这种方法已被广泛应用于蛋白质、激素、酶、核酸、病毒、抗原等的分离提纯。本文仅就亲和层析技术的原理、方法及其某些应用做一简要介绍。 一、原理 亲和层析属于吸附层析。其原理是依据生物高分子化合物所特有的生物活性的不同来进行分离提纯。即利用生物高分子物质可以和其相应的配体进行专一结合和可逆解离的特点,将配体或某生物高分子物质偶联到固相载体上(如Sepharose、Sephadex、Cellulose等)     

表达细胞色素P2E1 C3A肝细胞系的建立及其对增殖的影响

细胞色素P450 2E1（Cytochrome-P450）2E1,CYP2E1）在非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）的发病机制中发挥重要作用.CYP2E1广泛与细胞物质代谢,是否影响肝细胞增殖是一个值得探讨的问题,我们对CYP2E1对C3A肝细胞增殖的影响进行了初步探索.     

可溶性白细胞介素2受体测定方法及临床意义

可溶性白细胞介素２受体测定方法及临床意义徐雍，沈静，刘俊达白细胞介素２受体（ＩＬ一２Ｒ）由ａ链及Ｂ链组成，ａ链仅在免疫细胞活化时表达，而只是出现在淋巴细胞增殖前，较其它细胞表面分子出现为早。此外，ｘ链尚可以游离状态存在于正常人血液及其它体液中，称之为...     

急性白血病患者血清sIL─2R水平测定的临床意义

急性白血病患者血清ｓＩＬ─２Ｒ水平测定的临床意义段婷，常瑛，徐雍，崔华，卢炎，唐淑珍，沈静可溶性白细胞介素Ⅱ受体（ｓＩＬ－２Ｒ）来源于细胞膜白介素Ⅱ受体α链，以游离状态存在于正常人血清及尿液中，其水平可反映机体循环或组织中免疫细胞的活化状态。在多种疾...