纺锤体检测点机制对细胞周期的调控

细胞周期的各个步骤是连续进行的,各个步骤都受到严格而精细的调控,在某一个环节出现错误将会妨碍后续过程的进行,进而出现细胞分裂错误而导致非整倍体细胞,肿瘤细胞形成或细胞死亡。有丝分裂的后期染色体分离到两个子代细胞中,只有染色体平均分配到子代细胞中才能保证遗传的稳定性,但细胞分裂是一个不可逆的过程,所以染色体的分离是细胞分裂最为重要的一个步骤,这一步骤受到一种称为纺锤体监测点（spindle checkpoint,SCP)机制的严格调控。这种机制在纺锤体组装出现错误时或染色体与微管连接出现错误时就会激活,激活后对细胞周期发出一个阻碍信号进而影响两个主要的细胞周期过程①只有两个染色单体与来自两极的微管形成稳定而且正确的连接后,后期才开始进行;②直到姊妹染色单体正确的分离后有丝分裂才结束。本文主要是介绍SCP对前一个过程的调控作用。     

乙型肝炎肝硬化患者外周血dNLR、MLR和SII变化及其临床意义分析

目的 探讨乙型肝炎肝硬化患者外周血衍生中性粒细胞/淋巴细胞比值(dNLR)、单核细胞/淋巴细胞比值(MLR)和系统性免疫性炎症指数(SII)变化及其临床意义。方法 2019年1月～2021年12月我院收治的乙型肝炎肝硬化患者85例和慢性乙型肝炎(CHB)患者85例,采用ELISA法检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)和IL-17。常规检测血细胞计数。结果 乙型肝炎肝硬化患者血清TBIL和INR分别为(43.1±8.5)μmol/L和(1.3±0.6),显著高于【分别为(19.4±3.0)μmol/L和(1.1±0.2),P<0.05】,而血清ALT和ALB水平分别为(63.6±8.2)U/L和(30.8±4.6)g/L,显著低于CHB组【分别为(104.1±14.9)U/L和(39.0±8.1)g/L,P<0.05】;肝硬化患者血清TNF-α、IL-6和IL-17水平分别为(88.7±11.6)pg/mL、(95.6±12.5)pg/mL和(45.6±8.9)ng/mL,显著高于CHB组【分别为(68.2±9.3)pg/mL、(67.9±9.5)p...     

原代绒毛滋养层细胞的培养及转染研究

目的 探索绒毛组织滋养层细胞原代培养、纯化的有效方法及最佳转染方法.方法 分离妊娠7周内的人工流产胚胎的绒毛组织进行滋养层细胞的培养和纯化.用细胞免疫化学方法对培养细胞进行鉴定;用MTT实验方法绘制滋养层细胞的生长曲线;用细胞贴壁率找到最适pH;用细胞存活分数评价转染的最佳脂质体用量.结果 成功寻找到滋养层细胞原代培养和纯化的有效方法;细胞消化传代后的12～48 h滋养层细胞处于对数生长期,pH 6.8～7.0为培养液最适pH范围;并找到质粒转染滋养层细胞的最佳脂质体用量.结论 成功培养和纯化滋养层细胞,并找到滋养层细胞的最佳转染方法.     

细胞分裂调控基因MAD2与GFP融合的真核表达质粒的构建及表达

目的：构建MAD2基因与GFP融合的绿色荧光蛋白真核表达质粒,并在HepG2细胞中表达.方法：通过RT-PCR扩增,获得MAD2基因的完整序列.将此片断插入pEGFP-N1载体多克隆位点区,构建MAD2基因与GFP融合的绿色荧光蛋白真核表达质粒.应用脂质体转染技术转染HepG2细胞并观察表达的绿色荧光.结果：成功构建MAD2基因与GFP融合的绿色荧光蛋白真核表达质粒,并在HepG2细胞中观察到绿色荧光蛋白的表达.结论：该载体的成功构建,为研究MAD2基因在细胞分裂中的功能及定位建立了有效的观察体系.     

联合检测同型半胱氨酸与脂蛋白(a)在脑血管疾病中的诊断价值

目的探讨同型半胱氨酸与脂蛋白(a)在脑血管疾病中的诊断价值。方法循环酶法与免疫透射比浊法分别测定同型半胱氨酸与脂蛋白(a)水平。结果与对照组比较,同型半胱氨酸与脂蛋白(a)在脑出血组和脑梗死组差异有统计学意义(P0.01),脂蛋白(a)在脑出血组和脑梗死组间差异无统计学意义(P0.05),Hcy在脑出血组和脑梗死组间差异有统计学意义(P0.01)。结论联合检测同型半胱氨酸与脂蛋白(a)有助于提高脑血管疾病的诊断和预防。     

染色体数目异常自然流产胚胎有丝分裂关卡蛋白基因的研究

目的探讨染色体数目异常自然流产胚胎中有丝分裂关卡蛋白(hsMAD2)基因的功能。方法分别用定量PCR和Western blotting在mRNA和蛋白水平检测染色体数目异常(实验组)和正常(对照组)的自然流产胚胎组织中目的基因的表达;构建针对hsMAD2基因的shRNA表达载体,抑制胚胎细胞内源性hsMAD2基因的表达,用Western blotting和定量PCR方法评价shRNA的干扰效果;用MTT法测定细胞增殖率;流式细胞术检测细胞周期。结果hsMAD2蛋白在实验组中的表达显著低于对照组。shRNA的重组质粒表达载体能明显抑制胚胎细胞中hsMAD2基因的表达。胚胎细胞转染有效干扰质粒48 h后,细胞增殖抑制率达58%。有效干扰质粒引起G0/G1期和S期细胞的明显降低,G2/M期细胞增多。结论hsMAD2基因表达下调可能在染色体数目异常的自然流产胚胎发生中起着很重要的作用,为寻找可靠的临床检测指标奠定了基础。     

改良胸膜活检术联合生物标志物等对不明原因胸腔积液的诊断价值

目的 探讨改良胸膜活检术联合生物标志物、细胞学检查在不明原因胸腔积液中的诊断价值.方法 对216例胸腔积液患者的临床资料进行回顾性分析,其中结核性胸腔积液(结核组)106例,恶性胸腔积液110例(恶性组).所有患者均行改良胸膜活检术检查,胸腔积液细胞学检查,胸腔积液腺苷脱氨酶(ADA)、癌胚抗原(CEA)及乳酸脱氢酶(LDH)检测以及血CEA检测.统计胸膜活检术的确诊率,比较两组胸腔积液的ADA、CEA、LDH以及血CEA、胸腔积液CEA/血CEA水平.结果 216例患者共进行了241次胸膜活检穿刺,首次穿刺取材成功率94.9％ (205/216),首次穿刺成功的胸膜活检材料病理结果有诊断价值的占58.8％ (127/216),总确诊率65.3％(141/216),不良反应发生率为5.8％ (14/241).结核组细胞学检查肿瘤细胞阳性0例,恶性组细胞学检查肿瘤细胞阳性率54.5％(60/110);恶性组中胸腔积液CEA、LDH、血CEA及胸腔积液CEA/血CEA水平及阳性率均显著高于结核组,而胸腔积液ADA水平以及阳性率显著低于结核组,差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 改良胸膜活检术、胸腔积液细胞学、胸腔积液生物标志物在单独辅助诊断胸腔积液时均具有一定的局限性,临床上可联合多种指标明确胸腔积液病因,指导治疗.     

微小RNA对胚胎细胞BUB1基因的表达抑制

目的:探讨微小RNA对胚胎细胞BUB1基因表达的调控.方法:用定量real-time PCR比较microRNA转染前后的胚胎细胞内源性基因BUB1 mRNA表达水平,同时用western blot比较转染前后Bub1蛋白的表达水平.结果:对照组的BUB1基因mRNA拷贝数/GAPAH mRNA拷贝数为0.1960±0.0688,而转染microRNA重组质粒后,实验组的mRNA比值分别为0.1968±0.0689和0.1962±0.0670,经统计分析,两实验组细胞的内源性BUB1基因mRNA水平与对照组无显著性差异;而蛋白水平在转染后均有明显降低.结论:microRNA主要在翻译水平调节哺乳动物细胞内基因的表达,为研究基因表达的调控机制奠定了良好的基础.     

微小RNA抑制胚胎细胞MAD2基因的表达

目的:探讨微小RNA(microRNA)抑制胚胎细胞MAD2基因表达的机理.方法:用定量real-time PCR比较microRNA转染前后的胚胎细胞内源性基因MAD2 mRNA表达水平,同时用western blot比较转染前后Mad2蛋白的表达水平.结果:对照组的MAD2基因mRNA拷贝数/GAPAH mRNA拷贝数为0.1780±0.0688,而转染microRNA重组质粒后,实验组的mRNA比值分别为0.1778±0.0689和0.1778±0.0670,经统计分析,两实验组细胞的内源性MAD2基因mRNA水平与对照组无显著性差异;而其中一实验组的蛋白水平在转染后有明显降低.结论:microRNA主要在翻译水平调节哺乳动物细胞内基因的表达,为研究基因表达的调控机制奠定了良好的基础.     

有丝分裂关卡基因致染色体数目异常自然流产胚胎发生的机制

目的 探讨有丝分裂关卡基因(hBUB1)在染色体数目异常自然流产胚胎发生中的可能机制.方法 采用实时定量逆转录(RT)-PCR和免疫印迹法(WB)检测染色体数目异常组和正常对照组的自然流产胚胎组织中目的 基因在mRNA和蛋白水平的表达;构建针对hBUB1基因的短发卡状(shRNA)表达载体,用细胞免疫化学、WB和实时定量RT-PCR方法评价其对胚胎细胞内源性hBUB1表达的干扰效果;用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTF)试验测定细胞增殖抑制率;用流式细胞术解析细胞周期分布.结果 hBUB1蛋白在染色体数目异常组中的表达显著低于正常对照组(阳性表达率分别为8%和93.5%,P＜0.05).shRNA的重组质粒表达载体能明显抑制胚胎细胞中hBUB1基因的表达(干扰前后mRNA水平分别为0.196±0.067和0.042±0.006,P＜0.05).胚胎细胞转染有效干扰质粒48 h后,染色体数目异常组细胞增殖抑制率达62%,显著高于正常对照组(4%,P＜0.05).有效干扰质粒引起G2/M期细胞从对照组的40.2%和41.3%降低至21.3%.结论 hBUB1基因表达下调可导致细胞增殖的抑制和周期的改变,在染色体数目异常自然流产胚胎发生中可能起很重要的作用,这将为寻找可靠的临床检测指标奠定基础.