抗AFP单克隆抗体夹心ELISA检测试剂盒的研制及应用

甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)是一种癌胚抗原,在胚胎期由肝细胞和卵黄囊合成并出现在胎儿血清中,出生后血清中AFP的含量很低,正常人血清中的AFP浓度在20μg/L以下。当机体发生原发性肝癌时,肝癌细胞可合成和分泌大量AFP,在癌组织提取液、血清及腹水中均可检出高水平的AFP,现已作为肝癌的标志物,广泛应用于肝癌的普查、诊断、     

实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠脾脏和肝脏中NKT细胞调变的研究

目的:观察NKT细胞在实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠脾脏和肝脏中所占百分比的变化特点,探讨NKT细胞在EAE模型中的免疫调节作用.方法:以MOG35-5521肽诱导C57BL/6小鼠建立EAE模型并进行临床评分.于发病高峰期处死小鼠,分离脾脏和肝脏淋巴细胞,采用免疫荧光染色和流式细胞术(FCM)分析,观察EAE小鼠与正常小鼠脾脏和肝脏中NKT细胞在全部淋巴细胞中所占百分率的变化.结果:在EAE小鼠不同器官中,NKT细胞占淋巴细胞的百分率均较正常小鼠减少.脾脏NKT细胞百分率(%)从正常组2.22±0.14下降到EAE模型组1.94±0.07(P<0.05),肝脏NKT细胞百分率(%)从正常组5.52±2.17下降到2.67±1.41(P<0.05).结论:NKT细胞在EAE模型C57BL/6小鼠脾脏和肝脏中增殖受抑,提示EAE发病可能通过对NKT细胞数量的调节进而影响其对免疫应答的调节.     

胆汁可溶型抑制性受体LAIR-1以及白介素-2受体监测在肝移植急性排斥反应中的意义

目的 探讨胆汁中sLAIR-1及IL-2R的表达在肝移植排斥反应中的意义.方法 连续3周应用双单克隆抗体夹心ELISA方法检测55例肝移植受者术后胆汁sLAIR-1及sIL2R水平.结果 在22例移植肝功能正常的受体中(对照组),胆汁sIL-2R在(23.1±3.5)～(55.1±6.1)ng/L范围之内呈较低水平的波动,sLAIR-1则波动于(3.2±1.1)～(6.1±1.4)ng/L范围之内,亦呈低水平表达.在急性排斥反应(AR)组,胆汁sIL-2R水平在排斥反应确诊前2 d为(116.1±10.3)ng/L,确诊前1 d则为(136.8±12.7)ng/L,均显著高于对照组(P＜0.01).在经激素冲击治疗3 d时则下降至(74.2±6.2)ng/L,明显低于确诊前1、2 d水平.在对照组,胆汁sLAIR-1在(3.2±1.1)～(6.1±1.4)ng/L范围之内呈较低水平的波动;在AR组确诊前3 d为(18.1±2.2)ng/L,确诊前2 d为(25.1±3.5)ng/L,确诊前1 d则为(31.1±5.5)ng/L,均显著高于对照组(P＜0.01);经激素冲击治疗3 d时,胆汁sLAIR-1水平下降至(8.1±2.5)ng/L,接近对照组水平,且sLAIR-1的下降早于sIL2R.结论 胆汁sLAIR-1在发生移植肝急性排斥反应的病人血清中有较高水平的表达,其波动较sIL-2R大,将二者联合进行监测,可望成为早期预测移植物排斥反应发生及转归的诊断指标.     

ECLIA法与传统ELISA法检测TNF-α比较

化学发光酶联免疫检测法(ECLIA)是将酶免疫系统与化学发光系统结合起来,通过发光强度(RLU)反映检测样品含量的一种免疫学检测技术[1].本实验建立了ECLIA法,并将其与传统ELISA法在其敏感性上进行对比,结果表明,ECLIA法较ELISA法敏感性提高4倍,报道如下.     

检测大肠杆菌菌体蛋白的夹心ELISA试剂盒的建立及应用研究

目的  建立特异、敏感的检测大肠杆菌菌体蛋白的夹心ELISA试剂盒。方法  采用大肠杆菌菌体蛋白免疫家兔,制备得到高效价抗菌体蛋白抗血清。将经饱和硫酸铵盐析、阴离子交换柱层析和亲和层析纯化的兔抗大肠杆菌菌体蛋白特异性多克隆抗体作为包被抗体和检测抗体,用生物素标记检测抗体,并加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的亲和素。结果　建立的大肠杆菌菌体蛋白夹心ELISA检测方法的敏感性为0.32 μg/L,检测范围为1~100 μg/L,与国际同类商品化试剂盒相当。此法具有良好的稳定性,其批内变异系数小于7.7%,批间变异系数小于6.2%。结论  建立了特异、敏感、稳定的检测大肠杆菌菌体蛋白的夹心ELISA试剂盒,为生物制品中残留大肠杆菌菌体蛋白的质量控制提供了一种重要的检测方法。     

抑制性受体LAIR-1表达在移植物排斥反应中的意义

目的探讨可溶性LAIR-1(sLAIR-1)表达与移植物排斥反应的关系。方法应用双单克隆抗体夹心ELISA方法检测20例健康志愿者及162例肝、肾移植术后患者血清sLAIR-1水平,并进行分析比较。结果20例健康志愿者和98例移植物功能正常患者分别作为对照组,其血清sLAIR-1均有低水平的表达,分别为4.3±2.3μg/L和6.3±3.7μg/L,二者之间无显著差异(P>0.05)。6例移植肝急性排斥、20例移植肾急性排斥以及5例移植肾失功的患者血清中sLAIR-1表达水平显著升高,分别为47.2±25.9、36.3±14.7和28.8±9.4μg/L,与健康志愿者和移植物功能正常组之间有显著差异(P<0.01)。在1例移植肝重度排斥患者中,血清sLAIR-1水平高达117.3μg/L。5例移植肝慢性排斥、27例移植肾慢性排斥以及6例等待肾移植的透析患者血清sLAIR-1的表达水平分别为16.1±6.4、13.1±5.5和11.2±4.6μg/L,亦明显高于健康志愿者和移植物功能正常组(P<0.01)。结论sLAIR-1在发生移植物排斥反应的患者血清中有较高水平的表达,有望成为移植物排斥反应的监测指标。     

带有GFP标签的汉滩病毒糖蛋白表达载体的构建

目的:构建带有绿色荧光蛋白(GFP)标签的汉滩病毒(HTNV)包膜糖蛋白(GP)真核表达载体,并进行初步表达鉴定.方法:以peGFP-C1质粒为模板扩增GFP片段,将其插人真核表达载体pFLAG-CMV3中,构建成可表达带有GFP标签分泌型蛋白的载体pFLAG-CMV3-GFP.扩增HTNV-G1、HTNV-G2,分别插入上述载体,转染293T细胞,采用检测GFP标签蛋白的夹心ELISA法检测转染细胞培养上清中分泌型重组蛋白的含量.结果:酶切及测序证实带有GFP标签的HTNV-G1、HTNV-G2表达载体构建成功,分别命名为pFLAG-G1-GFP/pFLAG-G2-GFP,转染细胞的培养上清中可以检测出带有GFP标签的融合蛋白.结论:成功构建了带有GFP标签HTNV-GP的重组质粒并成功表达,为深入研究HTNV感染后机体针对HTNV-GP的特异性免疫应答规律奠定了实验基础.     

新的人类白细胞分化抗原(CD)的命名及其功能

第8届国际人类白细胞分化抗原专题讨论会(HLDA8)从上届CD247后共命名了92个新的编号。其中正式CD编号68个,CDw编号6个,还预留了CD18个。现将CD和CDw共76种分子及其单克隆抗体(mAb)或代号,主要表达细胞和分组,相对分子质量(Mr),以及主要的生物学功能整理成表(表1),以飨读者。表1新的CD命名及其功能CD常用mAb或代号主要表达细胞Mr/103功能CD248TEM1,Endosialin肿瘤血管En,基质Fb[AS]175可能参与肿瘤血管形成CD249APAEn,Ep[AS]160氨肽酶活性,金属肽酶活性,水解酶活性,结合Zn,受体为OX4CD252OX4OL,TNFSF4APC,B,En[NL]…     

免疫学课外阅读对学员综合能力的提高

免疫学是处于发展中的新兴学科,新概念、新理论及新技术不断涌现.在本科教学实践中,如何联系学科发展,培养学生科研思维与综合能力,一直是我们探索的方向.     

抑制性受体CD305表达在移植肾排斥反应监测中的意义

目的 探讨抑制性受体CD205的表达在移植肾排斥反应中的意义.方法 应用双单克隆抗体夹心ELISA法检测153例肾移植术后患者血清中可,溶型CD305(sCD305)的表达水平,20例健康志愿者标本作为对照组.结果 对照组和98例移植肾功能正常患者血清sCD305表达分别为(4.3±2.3)和(6.3±3.7)μg/L.20例移植肾急性排斥及5例移植肾失功患者血清sCD205表达明显增加,分别为(36.3±14.7)和(28.8土9.4)μg/L,显著高于对照组和移植物功能正常组(P＜0.01).30例移植.肾慢性排斥及6例尿毒症透析患者血清sCD205分别为(13.1±5.5)和(11.2±4.6)μg/L,亦明显高于对照组和移植肾功能正常组(P=0.00).结论 发生移植肾排斥反应的患者血清sCD3205有较高水平的表达,可望作为移植肾排斥反应的监测指标之一.