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1.
人β防御素4基因的合成及克隆载体的构建   总被引:3,自引:0,他引:3  
目的:合成人β防御素4(HBD4)基因并构建其克隆载体.方法:根据GenBank中HBD4结构基因的序列, 设计合成了6条长度为32 ~60 bp的寡聚核苷酸片段, 用重叠延伸PCR法扩增合成HBD4 cDNA全长.PCR产物经双酶切后, 克隆入载体pMD18-T中, 并导入细菌中进行扩增.结果:HBD4基因的PCR产物和重组载体经凝胶电泳和酶切鉴定、 测序分析证实, 合成的目的基因与设计的HBD4 cDNA的序列相一致, 并成功地克隆入克隆载体pMD18-T中.结论:用重叠延伸PCR法能方便、 准确地获得目的基因片段.重组克隆载体pMD18-T-HBD4 的获得, 为构建HBD4基因的表达载体并表达奠定了基础.  相似文献   
2.
人β防御素4(Humanpdefensin4,HBB4)是一种具有广谱抗微生物活性的抗菌肽。在人体先天免疫尤其上皮及黏膜防御中起重要作用。本研究用重叠延伸PCR扩增合成HBD4cDNA全长,并克隆人pMD18-T载体,用PCR法扩增HBIM成熟肽mamreHBD4,mHB4)编码序列并克隆入表达载体pGEX-4T-2中,在异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropy-β-D-thiogalactoside,IPTG)诱导下,表达HBD4与谷胱甘肽S转移酶(glutathione S-transferase,GST)的融合多肽。用酶切鉴定、核酸测序、十二烷基磺酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳等进行鉴定。结果表明:我们成功合成了HBD4全长编码基因,构建了克隆载体pMD18-T/HBIN和原核表达载体pGEX-4T-2/mHBD4,并在大肠杆菌中成功表达融合蛋白GST—HBD4。  相似文献   
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