恐惧应激对大鼠睾丸中Annexin5表达的影响

目的观察大鼠应激条件下睾丸组织中Annexin5表达的变化。方法建立SD大鼠的恐惧应激模型，分别取急性应激、急性对照、慢性应激、慢性对照SD大鼠睾丸，免疫组织化学和Western blotting分析Annexin5免疫定位和蛋白表达。结果急性应激组与对照组相比，免疫组化显示Annexin5都定位在间质细胞、支持细胞和成熟的精子头部，Western blotting分析发现Annexin5的表达降低了10．8％；慢性应激组与对照组相比，免疫组化结果显示Annexin5在精子头部的定位逐渐减少，应激1w和2w组，未见到Annexin5定位于精子头部，到了应激的3w和4w，发现Annexin5重新定位于精子的头部，而在间质细胞和支持细胞上的定位模式没有显著变化。Western blotting分析发现Annexin5的表达降低了17．4％。结论大鼠睾丸Annexin5参与了应激过程，急性应激条件下Annexin5表达降低。随着应激时间的延长，在慢性应激条件下，Annexin5的表达由减少之后而开始有缓慢增加。     

半自动生化分析仪检测精浆α葡糖苷酶活性的研究

目的:建立半自动生化分析仪检测精浆α葡糖苷酶活性的方法。方法:同时用半自动生化分析仪法(速率法)和手工葡萄糖氧化酶法检测51例精液常规分析参数均正常的男性精浆α葡糖苷酶活性,计算批内和批间变异系数以及正常参考值范围,并分析两种方法检测结果的相关性。结果:2例α葡糖苷酶活性不同的精浆样本用半自动生化分析仪法检测的批内变异系数分别为12.63%和9.13%,批间变异系数分别为10.67%和13.49%,正常参考值范围为102.28～555.08U/L。半自动生化分析仪法和手工法检测的精浆α葡糖苷酶活性呈显著正相关(r=0.792,P<0.01)。结论:半自动生化分析仪检测精浆α葡糖苷酶活性法简便、省时,节省试剂,结果稳定可靠。建议在男科实验室推广使用半自动生化分析仪法检测精浆α葡糖苷酶活性。     

恐惧应激对雄性大鼠生殖激素的影响

目的：观察比较不同恐惧应激状态下,大鼠血清卵泡刺激素（FSH）、黄体生成素（LH）和睾酮（T）的变化。方法：建立SD大鼠的急性应激、亚急性应激和慢性应激模型,分别在麻醉后心脏取血,酶联免疫分析法测定并比较各实验组及相应对照组大鼠血清FSH、LH和T的含量。结果：急性应激组大鼠血清FSH、LH和T水平略高于对照组大鼠,但无显著差异（P〉0.05）;亚急性应激组大鼠血清FSH、LH和T水平均低于其对照组,但都无显著差异（P〉0.05）;慢性应激组大鼠血清FSH、LH和T均低于对照组大鼠,其中LH水平的变化有显著差异（P〈0.05）;而T水平有极显著差异（P〈0.001）。结论：急性应激、亚急性应激和慢性应激能影响大鼠血清FSH、LH和T浓度,尤其慢性应激引起的体内激素的变化最大,提示应激对大鼠生理功能的维持以及生殖保护具有干扰作用。     

解脲脲原体感染与精子DNA完整性的相关性的研究

目的:探讨不育男性解脲脲原体(Uu)感染与精子核DNA完整性及精液各参数的相关性。方法:95例不育症患者的精液用Uu培养液进行解脲脲原体的培养,按WHO的标准,用计算机辅助精液分析系统(CASA)进行精液各参数的分析,然后通过精子低渗肿胀实验,吖啶橙(AO)荧光染色检测精子膜的完整性和精子核DNA的完整性。结果:Uu阳性40例,Uu阴性55例,Uu阳性组与阴性组比较,精子核DNA完整性与精子的密度、a+b级精子百分率以及精子的肿胀率都有显著性差异(P<0.01,P<0.05)。同时Uu阳性组与阴性组的精子核DNA完整性与精子的肿胀率存在显著的正相关性(r=0.438,P=0.014;r=0.438,P=0.01)。结论:Uu感染能够降低精子膜的完整性以及精子核DNA的完整性,这可能是Uu致男性不育的又一因素。     

癫痫大鼠颞叶和海马区PX1mRNA与CX36mRNA表达及甘珀酸的干预

目的观察戊四氮点燃大鼠颞叶和海马区PX1mRNA和CX36mRNA的表达及阻断剂甘珀酸的干预作用。方法 K组、CBX、NS组SD大鼠各10只,K组、CBX组用PTZ点燃,再分别用生理盐水CBX干预3d,NS组注射生理盐水。观察3组大鼠的行为变化,采用RT-PCR方法观察颞叶和海马区PX1mRNA和CX36mRNA的表达。结果①K组,CBX组28d左右均达到点燃,NS组大鼠行为学无变化。②PX1mRNA在海马和颞叶的表达均为K组〉CBX组〉NS组（P〈0.05）,各组海马区的表达高于颞叶（P〈0.05）。CX36mRNA在海马和颞叶的表达均为K组〉CBX组〉NS组（P〈0.05）,各组颞叶的表达高于海马区（P〈0.05）。结论 PX1和CX36可能参与癫痫的发生发展,其阻断剂CBX有潜在的抗惊厥作用。     

精子获能液的pH对精子胞浆内Ca2+水平影响机制的初步研究

目的研究不同pH值的精子获能液对精子胞浆内Ca2 水平的影响。方法取15例正常生育男性精液,离心沉淀所得精子用不同pH值(4.2、5.2、6.2、7.2、8.2、9.2、10.2、11.2)的精子获能液处理,用流式细胞仪和激光共聚焦显微镜分别检测精子胞浆内游离钙离子的平均荧光强度值。结果流式细胞仪测定结果显示,与pH7.2获能液的荧光值(209.94±89.02)相比,获能液pH为6.2时,精子胞浆内钙离子的荧光强度值(161.91±53.92)降低(P<0.05),pH为8.2、9.2时差异不显著(P>0.05),其余各种pH值的获能液均较pH7.2获能液荧光强度显著降低(P<0.01);激光共聚焦显微镜测定结果显示,与pH7.2获能液荧光值(200.87±27.43)相比,pH为6.2时荧光强度值(152.18±38.05)也显著降低(P<0.05),pH为8.2、9.2时没有差异(P>0.05),其余各组与pH7.2获能液相比,均有显著性降低(P<0.01)。结论不同pH值的精子获能液,可能影响精子胞浆内的钙离子水平的变化,进而导致精子的各种生理活动的改变。     

南京市精液分析质量控制的初步研究

目的:调查并分析南京市各家医院对精液分析项目中的精子浓度、精浆果糖、α葡糖苷酶及酸性磷酸酶(ACP)的检测结果,为进一步开展省内乃至全国范围内的精液分析的外部质量控制打下基础。方法:制备低、高浓度的4种检测项目的质控品8份,分装后检测每份质控品的结果并计算变异系数(CV)。质控品分发至南京市11家医院,收集并分析质控品回收结果。以分装后检测结果为参考值,计算不同实验室测得的质控品结果的总相对误差(RE)。结果:8份质控品分装后检测的CV为3.83%~11.16%。11家医院回报的精子浓度结果11份,精浆α葡糖苷酶、果糖和ACP结果5份。不同实验室高、低浓度精浆果糖的检测结果差异最小(CV分别为8.99%和3.95%),其次为α葡糖苷酶(CV分别为16.66%和18.41%),而精浆ACP的检测结果差异最大,CV分别为54.12%和65.58%。RE亦有相同的趋势,不同实验室精浆果糖检测的总RE分别为11.99%和20.31%,α葡糖苷酶为22.92%和27.26%,而ACP为7.34%和318.35%,即高浓度ACP检测结果的RE最大。11家医院中,6家用计算机辅助精液分析(CASA)系统检测精子浓度,5家用改良牛鲍血球计数池的方法检测。血球计数池计数的精子浓度结果[分别为(62.74±16.63)×106/m l和(163.32±36.24)×106/m l]和RE值(分别为148.47%和187.59%)显著高于CASA系统检测的结果分别为[(24.88±4.16)×106/m l和(54.24±23.06)×106/m l]和RE值(分别为13.97%和10.48%)。结论:目前男科学实验室精浆α葡糖苷酶和果糖的检测方法比较稳定,结果的变异在可接受的范围内,而ACP检测的方法可能不适合于临床常规使用,尚需进一步改进。血球计数池明显高估精子浓度,不适合用作精子浓度分析。     

荧光定量RT-PCR检测去下颌下腺大鼠睾丸annexin 5 mRNA和Bax mRNA的表达

目的 观察下颌下腺切除对大鼠睾丸膜联蛋白5(annexin 5)和Bax mRNA表达的影响.方法 切除大鼠下颌下腺.分别于术后14d、28d和42d处死大鼠,提取睾丸总RNA,反转录,设计特异性引物和Taqman探针.荧光定量RT-PCR检测annexin 5和Bax mRNA的表达.结果 荧光定量PCR结果显示,与对照组相比,切除下颌下腺14d和28d后,实验组大鼠睾丸annexin 5 mRNA分别升高了38.5%和55.3%,但无显著性差异;实验组大鼠睾丸Bax mRNA分别升高了70.6%和80.5%,其升高具有显著性差异(P<0.05和P<0.01);切除下颌下腺42d时,实验组大鼠睾丸annexin 5和Bax mRNA分别升高5.6%和2.3%,几乎恢复到与对照组相同的水平.结论 下颌下腺切除后14d和28d可造成大鼠睾丸annexin 5和Bax mRNA的表达升高;切除后42d,annexin 5和Bax mRNA又恢复到正常水平.     

抗卵泡刺激素自身抗体引起大鼠睾丸生精细胞凋亡

目的：研究抗卵泡刺激素（FSH）自身抗体大鼠模型睾丸生精功能低下的可能机制.方法：SD大鼠（21d龄,30只）,随机分为实验组和对照组,每组各15只.实验组用18肽-KLH免疫,对照组用KLH免疫,每隔2周加强免疫1次,共7次,直至实验结束.分别于免疫第77、91及105 d时心脏取血处死实验组和对照组大鼠各5只,收集血清.采用ELISA法检测模型大鼠血清FSH、黄体生成素（LH）和抑制素B水平,并以Rpl19为内参照,用荧光定量PCR法检测睾丸内Bax mRNA水平,同时用末端标记技术（TUNEL）检测睾丸生精细胞凋亡情况.结果：免疫后第77和91 d的实验组大鼠血清FSH水平显著低于对照组（P＜0.05）,免疫105 d后,实验组大鼠FSH水平有所回升.与对照组相比,实验组大鼠血清抑制素B水平均显著降低（P＜0.05）.血清LH水平在两组大鼠间无显著差异.免疫后第77、91及105 d的实验组大鼠睾丸内Bax mRNA水平,分别为对照组的2.15、3.77和1.89倍,TUNEL检测结果也显示实验组大鼠睾丸生精细胞凋亡指数显著高于对照组.结论：抗FSH自身抗体可能通过与FSH形成抗原抗体免疫复合物,以降低外周血中FSH浓度,进而激活Bax相关凋亡通路,诱导生精细胞凋亡,导致模型大鼠睾丸生精功能低下.     

精浆酸性磷酸酶和γ-L-谷氨酰转肽酶检测的比较及其与精液参数的相关性研究

目的:对精浆酸性磷酸酶(ACP)和γ-L-谷氨酰转肽酶(γ-GT)活性检测进行比较,并分析ACP和γ-GT活性与精液参数的相关性。方法:133例精浆标本,分别检测ACP活性和γ-GT活性。随机留取2例精浆标本,1例用于ACP批内检测,另1例用于γ-GT批内检测。随机留取4例标本,2例用于ACP批间检测,另2例用于γ-GT批间检测。用计算机辅助的精液分析(CASA)系统分析精液标本的精液量、pH、精子密度、活动率、a+b级活动精子百分率等参数。同时分析ACP和γ-GT活性与精液参数的相关性。结果:精浆ACP活性和γ-GT活性呈显著性正相关(r=0.570,P=0.000)。ACP的批内变异系数(CV)为13.72%,批间CV分别为13.80%和15.49%。γ-GT批内CV为7.68%,批间CV分别为7.76%和9.73%。精浆ACP活性和γ-GT活性均与pH值呈显著负相关(r=-0.330,P=0.000;r=-0.388,P=0.000)。γ-GT活性与精子密度呈显著正相关(r=0.165,P=0.045),而ACP活性与精子密度无显著相关(r=0.048,P=0.546)。ACP活性和γ-GT活性均与精子活动率、(a+b)级活动精子百分率、精液量、禁欲时间以及年龄无显著相关性。结论:精浆γ-GT活性检测的精确性高于ACP活性检测,两者与精液参数的相关性基本类似。提示精浆γ-GT活性检测比ACP活性检测更适合用来评价前列腺功能。