喉癌中HPV不同亚型的检测及测序

目的:检测人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)各型DNA在喉癌组织中的表达,探讨HPV在喉癌发生中的作用.方法:用PCR检测123例喉癌组织及123例喉粘膜上皮组织中HPV各型DNA.同时进行DNA测序,结果:在123例喉癌标本中,HPV-L1,-16E6/E7,-18E6/E7阳性率都明显高于其他各型.123例喉粘膜PCR结果表明:低危型HPV的阳性率与喉癌相近;高危型HPV的阳性率虽远远低于喉癌,但随着组织病变程度加重阳性率逐渐升高;HPV-L1的阳性率高于HPV-16E6、E7,随着组织病变程度加重,HPV-L1的检出率逐渐增高.结论:HPV-16感染会增强喉上皮病变的风险,而HPV-18有协同作用;L1片段适合用于检测HPV感染.     

肺弹性蛋白降解肽段人工抗原的合成与鉴定?

目的：制备和鉴定肺弹性蛋白降解肽段人工抗原,为进一步研制慢性阻塞性肺疾病(COPD)免疫检测试剂盒打下良好基础。方法以 Sulfo-SMCC 为偶联剂,钥孔血蓝蛋白(KLH)为载体蛋白制备免疫原;经紫外扫描和十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)电泳鉴定偶联情况;以免疫原免疫 Balb/c 小鼠制备特异性抗体,间接竞争酶联免疫吸附实验(ELISA)法评价抗血清效价及特异性。结果紫外扫描和 SDS-PAGE 电泳确认了肺弹性蛋白降解肽段人工抗原合成成功,其蛋白浓度为1.181 mg/mL,抗血清效价高于1∶64000,IC50为13.7 ng/mL,抗血清与无关肽段无交叉反应。结论本实验成功制备了肺弹性蛋白降解肽段人工抗原,其具有较好的免疫原性,为建立快速准确检测 COPD 免疫检测方法奠定基础。     

HPV 16L1基因的原核表达及表达条件的优化

目的:构建HPV 16L1基因的原核表达质粒,并优化其表达条件.方法:根据GeneBank中的HPV序列及pGEX-KG中的多克隆位点设计引物,以含有HPV全长基因片段重组质粒为模板,经PCR扩增出1 500 bp 的DNA片段.将所得片段与pGEX-KG 载体连接,转化JM109大肠杆菌,筛选阳性克隆.其扩增片段测序结果与原序列一致,表明原核表达载体pGEX-KG-HPV16L1已构建成功.提取pGEX-KG-HPV16L1质粒转化到BL21(DE3)表达菌株中,经IPTG 诱导后收集菌体,进行SDS-PAGE,Western Blot鉴定.结果:在大肠杆菌中获得HPV16L1基因融合表达,融合蛋白的相对分子量为83kDa;表达的蛋白能与抗HPV 16L1抗体发生特异性反应.结论:HPV 16L1基因在大肠杆菌中获得高效表达,为HPV16L1疫苗的研制奠定了基础.     

杨廉方治疗慢性前列腺炎经验

介绍杨廉方主任医师治疗慢性前列腺炎的经验。杨老提出本病的病理基础是肾气不足,肝失疏泄,气化不利,湿浊中生,湿热瘀阻,其发病与肝、肾、膀胱密切相关;治疗上强调补肾调肝、化气行水,选用经验方前列煎加减;同时强调灵活运用治法、偏倚恰当、舒畅情志、缓解精神压力的重要性。     

基于样品检测的布鲁氏菌荧光定量PCR方法的建立

目的 本文建立一种基于样品检测的特异性好、灵敏性高的布鲁氏菌荧光定量PCR检测方法。方法 以哺乳动物beta-actin基因和外源重组质粒为内参,针对布鲁氏菌属特异性基因IS711,建立用于样品检测的布鲁氏菌荧光定量PCR方法,并验证其敏感性、特异性及稳定性,绘制标准曲线。将该方法用于哺乳动物样品检测,并与细菌分离培养检测结果比较。结果 荧光定量PCR方法对布鲁氏菌检测有良好的特异性,3对引物对阴性对照菌均无非特异性扩增;该方法用于样品检测的最低检测限为17拷贝;内外源内参同时存在条件下,布鲁氏菌荧光定量PCR的标准曲线相关系数为R²=0.997(Y=-3.12X+40.9)。将该方法直接用于181份动物样本的检测,并与分离培养结果相比,荧光定量PCR检测阳性率为11.4%,细菌分离培养检测阳性率为9.9%,且细菌分离培养阳性样品与荧光定量PCR阳性样品中编号基本一致。结论 本文建立的荧光定量PCR检测方法灵敏性高、特异性及稳定性好,可直接应用于样品的检测,检测结果受内参基因质控。     

生物制药工艺学教学改革探讨

生物制药工艺学是制药工程(生物制药方向) 专业的主干必修课程.文章对生物技术制药工艺学在教学内容和教学方法上进行了改革;不断更新教学内容,让学生经常接触到学科的前沿知识和融会相关学科内容;开展启发式教学,引导学生进行科学思维,充分利用现代化信息技术和教学工具,开展合作研讨性教学活动,结合最新科研成果,运用实例引导学生进行创新药物开发.     

真武汤合血府逐瘀汤对慢性心力衰竭患者血脂及炎性因子的影响

目的观察真武汤合血府逐瘀汤对慢性心衰患者血脂和炎性因子的影响。方法 70例患者按随机数字表分为对照组和治疗组各35例,对照组予以西药常规基础治疗,治疗组在对照组基础治疗上加用真武汤合血府逐瘀汤。4周为1个疗程,1个疗程后,比较两组临床疗效、中医证候积分、血脂、炎性因子水平。结果治疗1个疗程后,治疗组的总有效率91.43%,高于对照组的71.43%(P0.05)。治疗后两组中医证候积分比较,治疗组明显低于对照组(P0.05)。治疗前两组血脂水平比较,差别均不大(均P0.05),治疗后两组血脂水平均较治疗前有不同程度改善,且治疗后血脂水平治疗组均低于对照组(P0.05);治疗前两组血清炎性因子水平比较,差别均不大(P0.05),治疗后两组炎性因子水平均较治疗前降低,治疗后炎性因子表达水平治疗组均低于对照组(均P0.05)。结论采用真武汤合血府逐瘀汤辅助治疗慢性心力衰竭,可明显提高慢性心力衰竭患者的临床疗效,降低中医证候积分,方中中药对调节脂质含量、拮抗炎症因子释放、改善炎症状态等方面有所帮助,这也可能是其治疗慢性心力衰竭取得疗效的机制之一。     

生物技术制药的教学实践

生物制药技术是一门新兴交叉应用学科,要求学生应该具备坚实宽厚的理论基础和解决生产实际问题的能力.文章对生物技术制药课程在教学内容和教学方法上的改进进行了总结;不断更新教学内容,让学生经常接触到学科的前沿知识和融会相关学科内容;充分利用现代化信息技术和教学工具,开展合作研讨性教学活动.     

LAPTM4B启动子荧光素酶报告基因重组体的构建

目的:LAPTM4B基因是肝癌中高度表达的新基因.为下一步LAPTM4B启动子的活性分性,本文构建了LAPTM4B基因启动子调控的报告基因重组表达质粒.方法:以LAPTM4B基因组cDNA为模板扩增翻译起始位点上游DNA序列.PCR产物定向克隆到含荧光素酶报告基因的载体pGL3-Basic中,并经限制性内切酶消化鉴定.结果:通过酶切鉴定和基因测序,证明成功地构建了三种不同长度的pGL3-LAPTM4B-Luc荧光素酶表达质粒,形成了系列的LAPTM4B启动子重组体.结论:充分利用生物信息学资源,利用已知基因的启动子序列,可快速,准确地克隆已知基因启动子序列并构建启动子载体.LAPTM4B启动子荧光素酶报告基因重组体的构建为LAPTM4B启动子的活性分析奠定了基础.     

杨廉方治疗遗尿验案两则

<正>杨廉方系重庆市垫江县中医院主任医师,全国第5批老中医药专家学术经验继承工作指导老师,全国名老中医杨廉方工作室导师,重庆市名中医,从事中医临床医疗和教学50余年,临床经验丰富,现将杨老师治疗遗尿验案介绍如下。1小儿遗尿案王某,女,8岁,2015年3月23日初诊。自幼时眠中遗尿,尿后不能自醒,醒后方觉,近1年遗尿次数明显增多,几乎每夜必尿,小便清长,伴记忆力差,睡眠差。查体:面色少华,形体消瘦,心肺腹(-)。舌质