T7 RNA聚合酶体外转录合成siRNA的方法

目的：建立一种应用T7 RNA聚合酶体外转录合成大量siRNA的方法。方法：以萤火虫荧光素酶为靶标，应用T7 RNA聚合酶体外转录合成siRNA，脂质体转染法将其导入HepG2细胞中，通过测定荧光素酶的量，评价siRNA对萤火虫荧光素酶基因表达的抑制作用。结果：合成了以萤火虫荧光素酶为靶标的siRNA，合成的siRNA能特异性地抑制荧光素酶基因的表达，抑制率为80％。结论：建立了一种经济简便的体外合成siRNA的方法。     

生物素化标签真核表达载体的构建及其在蛋白检测中的应用

目的构建生物素化标签真核表达载体,利用生物素化蛋白检测快速、灵敏、简便的特点,对传统的Western印迹和pull down技术进行改进和优化。方法利用pCI neo载体骨架构建生物素化真核表达载体。将红色荧光蛋白插入表达载体,用辣根过氧化物酶标记的链亲和素对融合蛋白进行Western印迹检测;将萤火虫荧光素酶插入表达载体,利用pull down技术定量分析生物素化效率;将丙型肝炎病毒NS4B蛋白插入表达载体,通过pulldown技术研究丙型肝炎病毒NS4B蛋白的蛋白质间相互作用。结果构建的生物素标签真核表达载体能使目的蛋白生物素化。报告基因定量分析结果表明目的蛋白生物素化效率达72%。将该载体表达的融合蛋白应用于Western印迹和pull down技术中可实现无需特异性抗体的一步法快速检测。结论将生物素化标签真核表达载体用于Western印迹和pull down技术,建立了快速、灵敏、简便的融合蛋白质检测新方法,为生命科学领域提供了一种有利的研究工具和通用技术平台。     

HLA-B*2705-β2 m-多肽复合物的制备及纯化

目的:制备并纯化HLA-B*2705-β2微球蛋白(β2-microglobulin,β2m)-多肽复合物.方法:将pET21a-HLA-B*2705和pET21a-β2m质粒在宿主菌E.coli BL21(DE3)中诱导表达,高效表达的HLA-B*2705蛋白与β2m,在HLA-B*2705限制性抗原肽[来源于人类免疫缺陷病毒(HIV)gp120蛋白的九肽NH2-GRAFVTIGK-COOH]存在的情况下,通过稀释复性折叠成HLA-B*2705-β2m-多肽复合物单体,经Western印迹鉴定,分子筛纯化.结果:成功地制备出HLA-B*2705-β2m-多肽复合物.结论:HLA-B*2705-β2m-多肽复合物的成功制备及纯化,为进一步研究HLA-B*2705与NK细胞Ig样受体(killer Ig-like receptor,KIR)之间的相互作用奠定了基础.     

可见光光谱法评价胶体金粒径及分布

目的：利用可见光光谱法,建立便于实验室使用的评价胶体金粒径及分布的方法,方法：制备不同颗粒直径的胶体金。利用紫外分光光度计对胶体金进行扫描,得到最大吸收峰波长及峰宽,通过透射电镜观察其颗粒直径及分布,再将二者结果进行比较,求出回归方程。结果：在所研究范围内,胶体金最大吸收峰波长与粒径（１０－７０ｎｍ）呈线性相关;峰宽越小粒子分布越均匀。结论：使用可见光光谱法评价胶体金的粒径及分布,操作简便快捷,便